本文關(guān)鍵詞：沙利度胺聯(lián)合奧沙利鉑、5-氟尿嘧啶對人肝癌HepG2細胞的VEGF、Caspase-3基因表達的研究

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【摘要】：肝細胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)是我國常見的惡性腫瘤,嚴重的危害著我國人類的健康。肝癌的惡性程度高、易復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移、侵襲性強、進展快、對放療、化療不敏感,死亡率仍居高不下,是世界范圍內(nèi)腫瘤患者的主要死因。5-氟尿嘧啶聯(lián)合奧沙利鉑,是治療原發(fā)性肝癌的最有效化療方案之一,但有效率低,近期不良反應(yīng)的發(fā)生率高。因此,針對肝癌細胞的特征,研究抗腫瘤新的治療模式成為腫瘤治療的熱點。沙利度胺(thalidomide,ThD)具有抗新生血管的生成的作用,開始應(yīng)用于一些惡性腫瘤治療。沙利度胺聯(lián)合奧沙利鉑和5-氟尿嘧啶是否可以抑制肝癌細胞的生長,還需要通過基礎(chǔ)研究試驗進一步證實。目的:本實驗通過體外人肝癌HepG2細胞培養(yǎng)技術(shù),應(yīng)用MTT法觀察三藥物對肝癌細胞增殖的影響,利用流式法檢測不同藥物干預(yù)組細胞凋亡的情況,應(yīng)用Western Blot法檢測不同藥物干預(yù)組對肝癌細胞凋亡因子VEGF、Caspase-3蛋白的表達差異,探討沙利度胺聯(lián)合奧沙利鉑及5-氟尿嘧啶的療效及可能作用機制。此次體外實驗的研究結(jié)果將有助于為肝癌治療的臨床化療提供新的實驗支持和治療思路。方法:1.細胞來源:HepG2人肝癌細胞株購買自上海美軒生物科技有限公司2.實驗分組:設(shè)立空白對照組、沙利度胺組、奧沙利鉑聯(lián)合5-氟尿嘧啶組及沙利度胺聯(lián)合奧沙利鉑、5-氟尿嘧啶組3.MTT法檢測各干預(yù)組HepG2人肝癌細胞增殖活性的差異4.流式細胞儀體外研究各組對HepG2細胞周期的影響5.Western blot法測定各組細胞Caspase-3蛋白表達的差異6.Western blot法測定各組細胞VEGF蛋白表達的差異7.數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析:統(tǒng)計數(shù)據(jù)使用SPSS17.0,分別用均數(shù)±標準差(x±s)的數(shù)據(jù)進行表示。多組之間的比較使用單因素方差分析法,兩組之間的比較使用lsd或snk法,p0.01則表示差異有統(tǒng)計學意義。結(jié)果:1.沙利度胺聯(lián)合奧沙利鉑、5-氟尿嘧啶對hepg2細胞增殖的影響:先篩查出各藥物48h的ic50做為聯(lián)合用藥的ic50分別為:沙利度胺為0.1mmol/l、5-氟尿嘧啶為40umol/l及奧沙利鉑為5umol/l的。沙利度胺聯(lián)合5-氟尿嘧啶以及奧沙利鉑、5-氟尿嘧啶聯(lián)合奧沙利鉑、沙利度胺組與空白對照組比較,od值均降低,各用藥組均抑制hepg2肝癌細胞的增殖,差異均有統(tǒng)計學意義(p0.01);而各干預(yù)組中沙利度胺聯(lián)合5-氟尿嘧啶以及奧沙利鉑od值最低,說明沙利度胺與5-氟尿嘧啶+奧沙利鉑聯(lián)合有效提高了對hepg2肝癌細胞增殖的抑制率。(沙利度胺聯(lián)合5-氟尿嘧啶以及奧沙利鉑、5-氟尿嘧啶聯(lián)合奧沙利鉑間、沙利度胺組、空白對照組間的比較,p0.001,差異具有統(tǒng)計學意義)。2.沙利度胺聯(lián)合奧沙利鉑、5-氟尿嘧啶對肝癌hepg2細胞周期的影響轉(zhuǎn)染48h后,空白對照組、沙利度胺組、奧沙利鉑聯(lián)合5-氟尿嘧啶組,沙利度胺聯(lián)合奧沙利鉑、5-氟尿嘧啶組hepg2細胞均在g0/g1期凋,且依空白對照組、沙利度胺組、奧沙利鉑聯(lián)合5-氟尿嘧啶組,沙利度胺聯(lián)合奧沙利鉑、5-氟尿嘧啶組順序,凋亡百分比逐漸明顯(p0.05),而在s、g2/m期百分比不成任何趨勢,表明隨著藥物的聯(lián)合,沙利度胺聯(lián)合奧沙利鉑及5-氟尿嘧啶組對細胞凋亡的作用逐漸增加,且被阻滯于g0/g1期。3.沙利度胺聯(lián)合奧沙利鉑、5-氟尿嘧啶對hepg2細胞中caspase-3蛋白的表達:予以空白對照組相比較,各用藥組hepg2細胞中caspase-3蛋白的表達均升高,且沙利度胺聯(lián)合奧沙利鉑、5-氟尿嘧啶組的蛋白表達最明顯。表明隨著藥物的聯(lián)合作用,caspase-3蛋白的表達逐漸增加(p0.001,各組差異有統(tǒng)計學意義)4.沙利度胺聯(lián)合奧沙利鉑、5-氟尿嘧啶對hepg2細胞中vegf蛋白的表達最低:予以空白對照組相比較,各用藥組hepg2細胞中vegf蛋白的表達均降低,且沙利度胺聯(lián)合奧沙利鉑、5-氟尿嘧啶組的蛋白表達最低。表明隨著藥物的聯(lián)合作用,vegf蛋白的表達逐漸降低(p0.001,各組差異有統(tǒng)計學意義)。結(jié)論:沙利度胺聯(lián)合奧沙利鉑以及5-氟尿嘧啶有效提高了對HepG2細胞增殖的抑制作用。阻滯HepG2細胞生長停滯在G1期�？缮险{(diào)HepG2細胞中凋亡因子Caspase-3的分泌,可下調(diào)HepG2細胞中血管內(nèi)皮生長因子VEGF的分泌,從而促進細胞凋亡。
【關(guān)鍵詞】：沙利度胺 5-氟尿嘧啶 奧沙利鉑 化學治療 肝癌 凋亡 VEGF Caspase-3
【學位授予單位】：承德醫(yī)學院
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R735.7
【目錄】：

• 中文摘要5-8
• 英文摘要8-11
• 英文縮寫11-12
• 前言12-15
• 材料與方法15-23
• 結(jié)果23-25
• 附圖25-28
• 附表28-29
• 討論29-35
• 結(jié)論35-36
• 參考文獻36-40
• 綜述40-46
• 參考文獻44-46
• 致謝46-47
• 個人簡歷47

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