本文關(guān)鍵詞：CTP介導(dǎo)抑癌基因NPRL2對(duì)腎癌細(xì)胞生物學(xué)活性及Bax-Caspase3凋亡通路的影響

  更多相關(guān)文章： CTP-NPRL2融合蛋白 腎細(xì)胞癌 Bax-Caspase3凋亡通路

【摘要】：目的:證實(shí)胞漿轉(zhuǎn)導(dǎo)肽(cytoplasmic transduction peptide,CTP)介導(dǎo)抑癌基因NPRL2(nitrogen permease regulator-like 2)以CTP-NPRL2融合蛋白形式對(duì)人腎癌細(xì)胞株786-O的作用,檢測(cè)其誘導(dǎo)的腎癌細(xì)胞凋亡及其對(duì)Bax-Caspase3凋亡通路的影響。方法:構(gòu)建重組質(zhì)粒pET28a-CTP-NPRL2并轉(zhuǎn)染大腸桿菌DH5α,從而獲得原核表達(dá)體系用于CTP-NPRL2融合蛋白的表達(dá)和提取;Western blot驗(yàn)證CTP-NPRL2蛋白的表達(dá);將CTP-NPRL2蛋白和腎癌786-O細(xì)胞共培養(yǎng),采用免疫熒光染色和倒置熒光顯微鏡檢測(cè)CTP-NPRL2蛋白在腎癌細(xì)胞786-O的亞細(xì)胞定位情況;MTT法檢測(cè)786-O細(xì)胞增殖的情況;流式細(xì)胞儀分析細(xì)胞周期和細(xì)胞凋亡情況;qRT-PCR、Western blot檢測(cè)786-O細(xì)胞中Bax和Caspase-3在mRNA及蛋白水平的表達(dá)情況。結(jié)果:(1)質(zhì)粒測(cè)序結(jié)果顯示成功構(gòu)建所需的原核表達(dá)載體;(2)Western blot結(jié)果顯示CTP-NPRL2融合蛋白在原核表達(dá)載體中有表達(dá);(3)倒置熒光顯微鏡結(jié)果提示CTP-NPRL2蛋白導(dǎo)入786-O細(xì)胞后定位于胞漿;(4)MTT發(fā)現(xiàn)CTP-NPRL2組細(xì)胞增殖較NPRL2組及空白對(duì)照組受到明顯的抑制(P0.05);(5)流式細(xì)胞分析顯示,相對(duì)于空白對(duì)照組和NPRL2組,CTP-NPRL2組的凋亡率顯著增高且處于G0/G1期細(xì)胞明顯增多(P0.05)。(6)qRT-PCR和Western blot結(jié)果提示,與空白對(duì)照組和NPRL2組比較,CTP-NPRL2組Bax和Caspase-3在mRNA和蛋白質(zhì)水平的表達(dá)均明顯上調(diào)(P0.05)。結(jié)論:CTP介導(dǎo)抑癌基因NPRL2以CTP-NPRL2融合蛋白形式導(dǎo)入腎癌786-O細(xì)胞中并對(duì)其有明顯的抑制作用,可能通過影響B(tài)ax-Caspase3凋亡通路的活性,抑制786-O細(xì)胞的增殖,并誘導(dǎo)其凋亡將細(xì)胞周期阻滯于G0/G1期,從而發(fā)揮抑癌作用。
【關(guān)鍵詞】：CTP-NPRL2融合蛋白 腎細(xì)胞癌 Bax-Caspase3凋亡通路
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R737.11
【目錄】：

• 英漢縮略語名詞對(duì)照4-6
• 摘要6-8
• ABSTRACT8-10
• 前言10-11
• 1 材料與方法11-24
• 2 結(jié)果24-32
• 3 討論32-34
• 結(jié)論34-35
• 參考文獻(xiàn)35-37
• 文獻(xiàn)綜述:轉(zhuǎn)移性腎癌治療的研究進(jìn)展37-49
• 參考文獻(xiàn)42-49
• 致謝49-50
• 碩士期間發(fā)表的論文50

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