本文關(guān)鍵詞：膠質(zhì)瘤中MGMT、k-ras的表達(dá)及意義

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【摘要】：目的:腦膠質(zhì)瘤是人類中樞神經(jīng)系統(tǒng)中最多見的原發(fā)惡性腫瘤,每年發(fā)病率大約為5/10萬。我國(guó)屬于腦膠質(zhì)瘤病的高發(fā)地區(qū),每年的新發(fā)病人數(shù)與因膠質(zhì)瘤病而死亡的人數(shù)呈逐年上升態(tài)勢(shì),并且腦膠質(zhì)瘤具有生長(zhǎng)侵襲性、極易復(fù)發(fā)和無法根治等特點(diǎn),已經(jīng)成為了令全球?qū)＜壹值碾y題。腦膠質(zhì)瘤的形成是一個(gè)多種基因參與、多個(gè)階段發(fā)展的過程,是環(huán)境與遺傳等因素共同作用的結(jié)果,一方面機(jī)體受到來源于環(huán)境當(dāng)中的危險(xiǎn)因素導(dǎo)致DNA損傷促使原癌基因激活和/或抑癌基因失活。另一方面因?yàn)榛騻�(gè)體的差異,在少量的危險(xiǎn)因素刺激下即可使攜帶易感基因型的個(gè)體發(fā)病。環(huán)境中的有害因素對(duì)人體細(xì)胞DNA產(chǎn)生損害,致其發(fā)生突變,但我們的機(jī)體有相應(yīng)的自我修復(fù)機(jī)制,6-氧-甲基鳥嘌呤-DNA-甲基轉(zhuǎn)移酶(O6-methylguanine-DNAmethyltransferase MGMT)就是普遍存在人體細(xì)胞當(dāng)中的DNA修復(fù)酶,其能夠修復(fù)DNA上烷化劑等有害因素對(duì)鳥嘌呤O(6)位點(diǎn)產(chǎn)生的損害,使DNA恢復(fù)其原有的結(jié)構(gòu)和功能。k-ras屬于ras基因家族一員,是細(xì)胞當(dāng)中的原癌基因,k-ras蛋白在細(xì)胞內(nèi)生長(zhǎng)信號(hào)傳遞中起重要作用,是調(diào)控細(xì)胞分裂增殖的關(guān)鍵因素。當(dāng)k-ras基因的結(jié)構(gòu)或調(diào)控區(qū)發(fā)生變異時(shí),機(jī)體細(xì)胞的分裂增殖就會(huì)發(fā)生了異常。k-ras基因的突變是“啟動(dòng)”癌變的關(guān)鍵要素之一。通過研究MGMT與k-ras在腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞中的表達(dá)及二者與膠質(zhì)瘤級(jí)別高低的關(guān)系,可以為實(shí)現(xiàn)腦膠質(zhì)瘤病的及早預(yù)防、及時(shí)診斷、妥善治療、延長(zhǎng)患者生存期等開辟一條新途徑。本次研究課題通過檢測(cè)MGMT、k-ras在正常腦組織、低級(jí)別和高級(jí)別腦膠質(zhì)瘤中的表達(dá)以探討二者在腦膠質(zhì)瘤發(fā)生、發(fā)展中的作用。方法:自2014年12月至2015年6月,在河北醫(yī)大二院手術(shù)室,收集神經(jīng)外科手術(shù)當(dāng)中的切下的膠質(zhì)瘤標(biāo)本。膠質(zhì)瘤組織切下后,立即選取適當(dāng)部位切取標(biāo)本,留取進(jìn)行免疫組化的組織放入10%福爾馬林固定,常溫儲(chǔ)存;留取進(jìn)行PCR的組織,置入凍存管內(nèi),并及時(shí)將管放入液氮罐內(nèi)儲(chǔ)存,共收集50例膠質(zhì)瘤患者手術(shù)標(biāo)本。經(jīng)核實(shí),收集標(biāo)本的膠質(zhì)瘤患者術(shù)前都沒有進(jìn)行放化療等抗腫瘤治療。將50例標(biāo)本按照WHO 2007版關(guān)于中樞神經(jīng)系統(tǒng)腫瘤的分類,26例為Ⅰ~Ⅱ級(jí)屬于低級(jí)別膠質(zhì)瘤;24例為Ⅲ~Ⅳ級(jí)屬于高級(jí)別膠質(zhì)瘤,這50例標(biāo)本都有本院病理科出具的病理報(bào)告。另外在腦出血或腦外傷手術(shù)當(dāng)中,收集12例正常腦組織標(biāo)本做為對(duì)照組,收集方法同收集膠質(zhì)瘤組織一樣。分別應(yīng)用免疫組織化學(xué)法和RT-PCR,檢測(cè)正常腦組織和膠質(zhì)瘤組織中MGMT、k-ras的表達(dá)情況。應(yīng)用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件中非參數(shù)檢驗(yàn)方法對(duì)所得數(shù)據(jù)進(jìn)行分析。結(jié)果:1 IHC結(jié)果顯示:在正常腦組織與低、高級(jí)別膠質(zhì)瘤組中,MGMT表達(dá)陽(yáng)性率依次為:92%、81%、71%;k-ras表達(dá)陽(yáng)性率依次為:33%、81%、96%。對(duì)MGMT與k-ras所得實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,結(jié)果顯示:在三組之間進(jìn)行比較,顯示有顯著性統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P=0.000),并且在其中任意兩組之間比較顯示有顯著性統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。這樣從上述結(jié)果中可看出,隨著膠質(zhì)瘤級(jí)別的升高,MGMT表達(dá)量逐漸減少,而k-ras表達(dá)量逐漸升高。經(jīng)相關(guān)性分析計(jì)算,MGMT與k-ras在三組中表達(dá)呈明顯負(fù)相關(guān)(r=-0.399,P=0.001),在低級(jí)別膠質(zhì)瘤與正常腦組織組表達(dá)也呈負(fù)相關(guān)(r=-0.384,P=0.017),在高級(jí)別膠質(zhì)瘤與正常腦組織組表達(dá)同樣呈負(fù)相關(guān)(r=-0.454,P=0.005),但是在高、低級(jí)別膠質(zhì)瘤組間,表達(dá)未見相關(guān)關(guān)系,這可能與樣本量少有關(guān)。2 RT-PCR結(jié)果顯示:根據(jù)MGMT與k-ras的PCR表達(dá)的數(shù)據(jù)計(jì)算,隨膠質(zhì)瘤級(jí)別升高,MGMT的中位數(shù)逐漸降低,而k-ras的中位數(shù)逐漸升高。另外統(tǒng)計(jì)學(xué)分析后,在三組之間進(jìn)行比較,顯示有顯著性統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P=0.000),并且在其中任意兩組之間比較顯示有顯著性統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。這就可證明,隨著腫瘤級(jí)別增高,MGMT表達(dá)量逐漸減少,而k-ras表達(dá)量逐漸升高,這個(gè)結(jié)論同免疫組化結(jié)果相吻合。經(jīng)相關(guān)性分析計(jì)算,MGMT與k-ras在三組中表達(dá)呈負(fù)相關(guān)(r=-0.539,P=0.001),在低級(jí)別膠質(zhì)瘤與正常腦組織組表達(dá)也呈負(fù)相關(guān)(r=-0.375,P=0.020),在高級(jí)別膠質(zhì)瘤與正常腦組織組表達(dá)同樣呈負(fù)相關(guān)(r=-0.531,P=0.001),但是在高、低級(jí)別膠質(zhì)瘤組間,表達(dá)未見相關(guān)關(guān)系,這可能與樣本量少有關(guān)。結(jié)論:1 MGMT在三組之間及兩兩組間比較,表達(dá)都有顯著性統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。這證明MGMT表達(dá)量減少與膠質(zhì)瘤的發(fā)生、發(fā)展是相關(guān)的,這與MGMT對(duì)膠質(zhì)細(xì)胞DNA損傷起保護(hù)作用,防止基因突變有關(guān),MGMT可防止膠質(zhì)細(xì)胞腫瘤樣變的發(fā)生。2 k-ras在三組之間及兩兩組間比較,表達(dá)都有顯著性統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。這證明k-ras表達(dá)量增多與膠質(zhì)瘤的發(fā)生、發(fā)展是相關(guān)的。這與k-ras蛋白傳遞細(xì)胞分裂信號(hào)有關(guān),k-ras基因突變程度越高,膠質(zhì)瘤的惡性程度越高。3 MGMT和k-ras在膠質(zhì)瘤中地表達(dá)存在相互關(guān)聯(lián)性,MGMT表達(dá)降低,k-ras表達(dá)升高。作為修復(fù)基因的MGMT可以修復(fù)k-ras當(dāng)中的損傷,防止膠質(zhì)細(xì)胞腫瘤樣變的發(fā)生。4本次實(shí)驗(yàn)通過對(duì)MGMT和k-ras的研究,可以為膠質(zhì)瘤的診斷及靶向治療提供一個(gè)方向。
【關(guān)鍵詞】：膠質(zhì)瘤 MGMT k-ras 免疫組化 RT-PCR
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R739.4
【目錄】：

• 中文摘要4-7
• 英文摘要7-11
• 前言11-13
• 材料與方法13-21
• 結(jié)果21-23
• 附圖23-30
• 附表30-32
• 討論32-37
• 結(jié)論37-38
• 參考文獻(xiàn)38-40
• 綜述 MGMT、ras基因與腫瘤關(guān)系及研究進(jìn)展40-54
• 參考文獻(xiàn)50-54
• 致謝54-55
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷55

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 林英,黃世章,郝卓芳,廖德貴;MGMT及P53在腦膠質(zhì)瘤組織中的表達(dá)及其生物學(xué)意義[J];現(xiàn)代臨床醫(yī)學(xué)生物工程學(xué)雜志;2005年03期

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本文編號(hào)：631456