本文關(guān)鍵詞：LAT在T系白血病裸鼠CD59介導(dǎo)的T細(xì)胞活化信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)中的作用研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:利用T系Jurkat白血病細(xì)胞建立裸鼠動(dòng)物模型,對(duì)其進(jìn)行生物學(xué)鑒定,研究T細(xì)胞活化銜接蛋白(LAT)及其棕櫚�；�,在CD59分子介導(dǎo)T淋巴細(xì)胞活化信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)中的作用。方法:體外培養(yǎng)人Jurkat細(xì)胞,構(gòu)建LAT-EGFP(LAT分子高表達(dá))、LAT-M-EGFP(LAT分子棕櫚�；稽c(diǎn)突變)的慢病毒載體,轉(zhuǎn)染入Jurkat細(xì)胞,從而建立穩(wěn)定表達(dá)目的基因的細(xì)胞株。BALB/C純系雌性裸鼠24只,編號(hào)后隨機(jī)抽取,分為空白對(duì)照組1組,以及實(shí)驗(yàn)組3組:LAT組、LAT-M組和正常Jurkat組,每組6只。第一、第二天通過腹腔注射定量的環(huán)磷酰胺,第三天用尾靜脈注射的方法,實(shí)驗(yàn)組小鼠分別接種Jurkat細(xì)胞株5×106個(gè)/只,空白對(duì)照組小鼠則尾靜脈注射等量無菌PBS溶液,注射定時(shí)定量,連續(xù)兩天。觀察小鼠發(fā)病一般體征,分別于移植后第1周(7d)、第2周(14d)、第3周(21d)、第4周(28d)監(jiān)測(cè)體質(zhì)量及外周血白細(xì)胞數(shù)量變化;并用ELISA檢測(cè)模型小鼠外周血中IL-2表達(dá)水平;取肝脾組織進(jìn)行HE染色觀察;流式細(xì)胞術(shù)(FCM)檢測(cè)骨髓白血病細(xì)胞增殖率;免疫組化染色法檢測(cè)肝組織中細(xì)胞凋亡調(diào)控蛋白Bcl-2、Caspase-3的表達(dá)水平;血涂片于激光共聚焦顯微鏡下觀察CD59單克隆抗體活化前后LAT在細(xì)胞膜上的定位。結(jié)果:靜脈移植Jurkat細(xì)胞后,實(shí)驗(yàn)組小鼠逐漸出現(xiàn)病態(tài)體征,表現(xiàn)為嗜睡、食欲減退、體質(zhì)量減輕、精神萎靡、弓背、后肢癱瘓等癥狀,外周血WBC計(jì)數(shù)呈增高趨勢(shì),生存時(shí)間較對(duì)照組明顯縮短,肝脾組織HE染色及骨髓涂片光鏡下觀察均可見腫瘤細(xì)胞浸潤,建模成功,對(duì)照組小鼠活力正常均存活。實(shí)驗(yàn)組中LAT組小鼠第四周即出現(xiàn)瀕死狀態(tài),伴脊柱側(cè)彎,呈惡病質(zhì),WBC計(jì)數(shù)高于其他各組。ELISA檢測(cè)結(jié)果示LAT組血清中IL-2表達(dá)水平高于LAT-M組和Jurkat組。促凋亡因子Caspase-3在LAT-M組中的表達(dá)高于LAT組和Jurkat組,促進(jìn)細(xì)胞活化的Bcl-2蛋白,在LAT組中的表達(dá)高于LAT-M組和Jurkat組,且LAT-M組表達(dá)水平低于Jurkat組。流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)到LAT組白血病細(xì)胞增殖率高于LAT-M組和Jurkat組。通過激光共聚焦顯微鏡觀察LAT組提示,于細(xì)胞膜上可見LAT分布且點(diǎn)簇狀聚集于脂筏,經(jīng)CD59單抗交聯(lián)后,點(diǎn)簇狀聚集較刺激前更為明顯;而在LAT-M組中,可見LAT分子散在分布,未見點(diǎn)簇狀聚集,CD59抗體作用后無明顯變化。結(jié)論:成功建立T系Jurkat白血病細(xì)胞裸鼠動(dòng)物模型。從體內(nèi)實(shí)驗(yàn)證實(shí)LAT分子及其棕櫚酰化在T細(xì)胞活化信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)中的正向激活作用;CD59分子通過向LAT提供棕櫚�；鶊F(tuán),進(jìn)而共同定位于脂筏,介導(dǎo)T細(xì)胞的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)。
【關(guān)鍵詞】：T淋巴細(xì)胞 裸鼠模型 LAT棕櫚�；� CD59
【學(xué)位授予單位】：青島大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R733.7
【目錄】：

• 摘要2-3
• Abstract3-7
• 引言7-9
• 技術(shù)路線9-10
• 第一章 材料與方法10-20
• 1.1 材料10-11
• 1.1.1 主要實(shí)驗(yàn)儀器10
• 1.1.2 病毒與細(xì)胞株10
• 1.1.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物10-11
• 1.1.4 主要實(shí)驗(yàn)試劑11
• 1.2 方法11-20
• 1.2.1 Jurkat細(xì)胞的培養(yǎng)11-12
• 1.2.2 慢病毒載體轉(zhuǎn)染Jurkat細(xì)胞12-13
• 1.2.3 建立Jurkat細(xì)胞裸鼠動(dòng)物模型13-14
• 1.2.4 動(dòng)物模型各項(xiàng)指標(biāo)檢測(cè)14-19
• 1.2.4.1 ELISA檢測(cè)外周血IL-2 表達(dá)水平14-16
• 1.2.4.2 骨髓涂片免疫熒光16
• 1.2.4.3 肝脾組織蘇木精-伊紅（HE）染色16-17
• 1.2.4.4 免疫組化法檢測(cè)Caspase-3、Bcl-2 的表達(dá)17-18
• 1.2.4.5 流式細(xì)胞術(shù)（FCM）檢測(cè)骨髓中腫瘤細(xì)胞18
• 1.2.4.6 激光共聚焦顯微鏡觀察LAT分子定位18-19
• 1.2.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析19-20
• 第二章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果20-32
• 2.1 細(xì)胞的培養(yǎng)慢病毒轉(zhuǎn)染后的Jurkat細(xì)胞20-21
• 2.2 建模后小鼠發(fā)病一般狀況21-24
• 2.2.1 體質(zhì)量及生存時(shí)間21-22
• 2.2.2 外周血白細(xì)胞計(jì)數(shù)22-24
• 2.3 骨髓涂片免疫熒光24-25
• 2.4 肝脾組織HE染色25-26
• 2.5 免疫組化檢測(cè)肝組織中Caspase-3、Bcl-2 的表達(dá)26-27
• 2.6 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)骨髓中陽性腫瘤細(xì)胞27-29
• 2.7 ELISA檢測(cè)血清IL-2 表達(dá)29-30
• 2.8 激光共聚焦顯微鏡觀察LAT分子定位30-32
• 第三章 討論32-35
• 結(jié)論35-36
• 參考文獻(xiàn)36-38
• 綜述38-49
• 綜述參考文獻(xiàn)45-49
• 攻讀學(xué)位期間的研究成果49-50
• 附錄50-52
• 致謝52-53

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本文編號(hào)：501103