發(fā)布時(shí)間：2017-06-30 02:21

  本文關(guān)鍵詞：CCNG2在人甲狀腺乳頭狀癌K1細(xì)胞中的表達(dá)及其對(duì)K1細(xì)胞增殖凋亡影響的研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:細(xì)胞周期蛋白G2(Cyclin G2,CCNG2)是細(xì)胞周期蛋白家族中發(fā)現(xiàn)較晚的一員。近年來(lái)對(duì)其的研究發(fā)現(xiàn),CCNG2具有抑制細(xì)胞增殖、促進(jìn)凋亡,負(fù)性調(diào)控腫瘤細(xì)胞增殖的作用。本研究旨在探討CCNG2基因在甲狀腺乳頭狀癌K1細(xì)胞中的表達(dá)情況及其對(duì)K1細(xì)胞增殖、凋亡的影響,并期望通過(guò)實(shí)驗(yàn)了解CCNG2基因在上述過(guò)程中可能的作用機(jī)制,為以CCNG2為靶點(diǎn)的甲狀腺乳頭狀癌治療提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。方法:1構(gòu)建載有CCNG2基因的質(zhì)粒p EGFP-N1-CCNG2,優(yōu)化轉(zhuǎn)染條件后轉(zhuǎn)染體外甲狀腺乳頭狀癌K1細(xì)胞,Western blot法檢測(cè)轉(zhuǎn)染結(jié)果。2 MTT、流式細(xì)胞術(shù)分別檢測(cè)空白對(duì)照組、陰性對(duì)照組、實(shí)驗(yàn)組K1細(xì)胞增殖、凋亡情況。Western blot法、免疫細(xì)胞化學(xué)染色法檢測(cè)CCNG2、p53、mdm2蛋白表達(dá)情況。3上述實(shí)驗(yàn)均重復(fù)3次或以上,結(jié)果以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±S)表示。計(jì)量資料行正態(tài)性檢驗(yàn)及方差齊性檢驗(yàn)后采用方差分析,多組數(shù)據(jù)兩兩比較采用LSD-t檢驗(yàn)。所有實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)均用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理,P0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果:1轉(zhuǎn)染條件的優(yōu)化及檢測(cè):不同比例DNA與轉(zhuǎn)染試劑Lipofectamine2000混合后轉(zhuǎn)染細(xì)胞,各組轉(zhuǎn)染效率有差異,其中DNA(ug):Lipofectamine2000(ul)為1:5時(shí)轉(zhuǎn)染效率最高,達(dá)(77.33±3.79)%(P0.05);不同細(xì)胞融合度時(shí)接受轉(zhuǎn)染,轉(zhuǎn)染效率有差異,以細(xì)胞融合度達(dá)50~60%時(shí)轉(zhuǎn)染效率最佳,為(90.33±1.53)%(P0.05)。2 MTT檢測(cè)細(xì)胞增殖結(jié)果:分別于轉(zhuǎn)染24h、48h、72h、96h行MTT檢測(cè),與對(duì)照組比較實(shí)驗(yàn)組各時(shí)間點(diǎn)均出現(xiàn)生長(zhǎng)抑制,并于轉(zhuǎn)染72小時(shí)抑制效應(yīng)最明顯達(dá)35.40%(P0.05),空白對(duì)照組與陰性對(duì)照組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。3 FCM檢測(cè)細(xì)胞凋亡結(jié)果:轉(zhuǎn)染48小時(shí)后,實(shí)驗(yàn)組較空白對(duì)照組、陰性對(duì)照組早期凋亡率明顯升高[(5.48±0.35)%vs(1.06±0.05)%、(1.12±0.09)%](P0.05);實(shí)驗(yàn)組較空白對(duì)照組、陰性對(duì)照組晚期凋亡率顯著升高[(9.90±0.94)%vs(2.65±0.20)%、(1.58±0.28)%](P0.05),空白對(duì)照組與陰性對(duì)照組比較,細(xì)胞早期、晚期凋亡率差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。4 Western Blot檢測(cè)結(jié)果:轉(zhuǎn)染48小時(shí)后,實(shí)驗(yàn)組CCNG2蛋白相對(duì)表達(dá)量較空白對(duì)照組、陰性對(duì)照組顯著升高(0.72±0.053 vs 0.36±0.032、0.37±0.040)(P0.05),而兩對(duì)照組之間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。轉(zhuǎn)染48小時(shí)后,實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組相比,p53、mdm2蛋白表達(dá)水平明顯上調(diào)(P0.05),空白對(duì)照組與陰性對(duì)照組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。分別轉(zhuǎn)染p EGFP-N1-CCNG2 24h、48h、72h,CCNG2蛋白表達(dá)持續(xù)增加,p53、mdm2蛋白表達(dá)水平上調(diào)且與CCNG2表達(dá)趨勢(shì)具有一致性。5免疫細(xì)胞化學(xué)染色法結(jié)果:轉(zhuǎn)染p EGFP-N1-CCNG2 48h后實(shí)驗(yàn)組CCNG2、p53、mdm2蛋白表達(dá)陽(yáng)性水平明顯高于對(duì)照組。結(jié)論:1體外實(shí)驗(yàn)顯示,瞬時(shí)轉(zhuǎn)染技術(shù)使CCNG2基因在甲狀腺乳頭狀癌K1細(xì)胞產(chǎn)生過(guò)表達(dá)并具有抑制細(xì)胞增殖,促進(jìn)細(xì)胞凋亡的作用。2轉(zhuǎn)染CCNG2基因后CCNG2、p53蛋白表達(dá)上調(diào),推測(cè)CCNG2通過(guò)上調(diào)p53蛋白表達(dá)水平起到抑制細(xì)胞增殖、促進(jìn)細(xì)胞凋亡的作用。3轉(zhuǎn)染CCNG2基因后mdm2蛋白表達(dá)上調(diào),推測(cè)這種現(xiàn)象可能為過(guò)量的p53蛋白所致,同時(shí)可能存在CCNG2對(duì)mdm2作用的其他途徑,對(duì)mdm2上調(diào)的原因及其與CCNG2之間的關(guān)系做深入研究將有助于進(jìn)一步了解CCNG2腫瘤負(fù)性調(diào)控作用機(jī)制。
【關(guān)鍵詞】：CCNG2 甲狀腺乳頭狀癌 增殖 凋亡 p53 mdm2
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R736.1
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• 英文摘要6-8
• 英文縮寫(xiě)8-9
• 前言9-10
• 材料與方法10-20
• 結(jié)果20-23
• 附圖23-32
• 討論32-36
• 結(jié)論36-37
• 參考文獻(xiàn)37-41
• 綜述CCNG2 及其對(duì)腫瘤影響的研究進(jìn)展41-48
• 參考文獻(xiàn)45-48
• 致謝48-49
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷49

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 陜光;陜聲國(guó);張孝斌;劉修恒;;細(xì)胞周期素G_1和G_2在膀胱癌中的表達(dá)及臨床意義[J];中國(guó)組織化學(xué)與細(xì)胞化學(xué)雜志;2009年03期

  本文關(guān)鍵詞：CCNG2在人甲狀腺乳頭狀癌K1細(xì)胞中的表達(dá)及其對(duì)K1細(xì)胞增殖凋亡影響的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：500261