本文關(guān)鍵詞：創(chuàng)傷治愈微環(huán)境抑肺癌機制與藥物治療，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：腫瘤的發(fā)生發(fā)展與腫瘤微環(huán)境密切相關(guān),腫瘤被稱為永不愈合的創(chuàng)傷。創(chuàng)傷修復(fù)過程與腫瘤發(fā)生發(fā)展過程在信號傳導(dǎo)方面有很多相同之處,創(chuàng)傷修復(fù)一直被認為是促癌因素之一。然而,創(chuàng)傷治愈是組織器官恢復(fù)功能的必要條件,是否治愈創(chuàng)傷能夠阻止腫瘤發(fā)展未有報道�；谥嗅t(yī)“創(chuàng)傷治愈需元氣充足”的觀點,我們提出“創(chuàng)傷治愈微環(huán)境可以阻止癌癥的發(fā)生”。為驗證此科學(xué)假設(shè)的正確性,我們開展了創(chuàng)傷治愈微環(huán)境抑肺癌機制與藥物治療研究。本課題首先用小鼠全層皮膚切除創(chuàng)傷模型篩選出有創(chuàng)傷愈合作用的藥物,通過血流灌注量、小鼠耳腫脹抗炎模型、巨噬細胞的吞噬作用觀察藥物治療創(chuàng)傷的特點,根據(jù)藥物作用特點進行創(chuàng)傷愈合藥物組合。接著,我們用創(chuàng)傷愈合藥物組合體外處理A549、BEAS-2B和L929細胞,MTT法檢測細胞增殖;劃痕標(biāo)記染料示蹤法觀察細胞連接通訊功能;軟瓊脂克隆實驗和細胞成球?qū)嶒灆z測細胞自我更新能力。最后,我們采用烏拉坦誘導(dǎo)小鼠肺癌模型觀察創(chuàng)傷愈合藥物組合營造的創(chuàng)傷治愈微環(huán)境對小鼠肺癌發(fā)展的影響,體重和自主活動檢測考察藥物組合對小鼠正常生理的影響;肺部病理變化、肺癌發(fā)生率及肺腫瘤結(jié)節(jié)數(shù)檢測藥物組合對腫瘤發(fā)生的影響;免疫組化檢測細胞增殖標(biāo)記物ki67及凋亡相關(guān)標(biāo)志物cleaved caspase-3;Western blot檢測腫瘤干細胞標(biāo)志物Oct4及Nanog,細胞通訊標(biāo)志物細胞間隙連接蛋白Connexin43,上皮-間充質(zhì)轉(zhuǎn)化標(biāo)志物E-鈣粘蛋白,N-鈣粘蛋白及波形蛋白。另外,為了進一步探索創(chuàng)傷治愈微環(huán)境抑制腫瘤發(fā)展的機制,我們在烏拉坦誘導(dǎo)小鼠肺癌模型中用脂多糖氣管滴注,氯屈膦酸鈉脂質(zhì)體腹腔注射,博來霉素氣管滴注觀察了肺炎癥、肺巨噬細胞耗竭和肺損傷對肺癌發(fā)展及藥物組合的影響,重點用ELISA試劑盒檢測細胞炎癥標(biāo)志物腫瘤壞死因子α(TNFα)、髓過氧化物酶(MPO),和細胞損傷標(biāo)志物活性氧(ROS)、8-羥基脫氧鳥苷(8-OHdG)。實驗結(jié)果表明,在篩選的藥物中,烏頭堿,紫草素和三七皂苷R1較快的促進了小鼠全層皮膚切除創(chuàng)傷愈合;三七皂苷R1及烏頭堿在激光散斑儀檢測中增加了創(chuàng)傷局部的血流灌注量;僅紫草素對TPA引起的小鼠耳腫脹有顯著的抑制作用;而三七皂苷R1及烏頭堿在巨噬細胞吞噬實驗表現(xiàn)了吞噬能力增強作用。因此,我們將三個藥物組合成創(chuàng)傷治愈復(fù)合物營造創(chuàng)傷治愈微環(huán)境用于體內(nèi)外觀察創(chuàng)傷治愈微環(huán)境對腫瘤發(fā)展的影響。在體外實驗中,0.2μM~1μM紫草素能抑制ECV304細胞增殖;2μM~10μM三七皂苷R1抑制L929細胞增殖而促進了ECV304的增殖,0.02μM~0.1μM烏頭堿促進了L929的增殖,而三個藥物組合促進了L929細胞和ECV304細胞的增殖而并不抑制A549增殖。藥物組合恢復(fù)了烏拉坦導(dǎo)致的BEAS-2B細胞間連接通訊減少,減少了A549腫瘤細胞的軟瓊脂克隆和干細胞成球數(shù)量。在烏拉坦誘導(dǎo)的小鼠肺癌模型中,0.2mg/kg烏頭堿,2mg/kg紫草素,20mg/kg三七皂苷R1對烏拉坦化學(xué)誘導(dǎo)小鼠肺癌模型肺癌的預(yù)防率分別為50%,30%及35%,藥物組合預(yù)防率可高達90%。病理結(jié)果顯示三個藥物單獨使用雖然均能一定程度改善致癌小鼠肺組織病理變化,三者聯(lián)合用藥可使致癌小鼠肺組織病理變化恢復(fù)到接近正常。免疫組化結(jié)果顯示藥物組合能顯著下調(diào)ki67和上調(diào)Cleaved Caspase-3的表達。Western實驗結(jié)果顯示,藥物組合可以下調(diào)干細胞標(biāo)志物Oct4,Nanog的表達,增加連接蛋白Connexin43,E-鈣粘蛋白表達,減少N-鈣粘蛋白,波形蛋白表達。另外,我們發(fā)現(xiàn)脂多糖氣管滴注主要增加肺臟中MPO及TNFα,對小鼠肺癌并無明顯促進作用;博來霉素氣管滴注以增加肺臟中ROS和8-OHdG為主,同時促進了肺癌發(fā)生;而氯屈磷酸鈉脂質(zhì)體在致癌前耗竭巨噬細胞表現(xiàn)出降低MPO及TNFα的抗炎作用和增加ROS及8-OHdG的促肺損傷作用,也促進肺癌發(fā)生。值得注意的是,在三種處理方式下,藥物組合物營造的損傷治愈微環(huán)境肺癌防治作用均降低。綜上所述,創(chuàng)傷治愈微環(huán)境能夠阻止肺癌的發(fā)生和發(fā)展,創(chuàng)傷治愈藥物組合可能是一種防治肺癌和有前景的方法。
【關(guān)鍵詞】：創(chuàng)傷治愈微環(huán)境 肺癌預(yù)防 創(chuàng)傷治愈藥物組合 腫瘤干細胞
【學(xué)位授予單位】：河南大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R734.2
【目錄】：

• 摘要4-6
• ABSTRACT6-13
• ABBREVIATION13-14
• 第一章 緒論14-18
• 第二章 促進創(chuàng)傷治愈藥物的篩選18-26
• 2.1 前言18
• 2.2 實驗材料18-19
• 2.2.1 藥物及其試劑18
• 2.2.2 實驗動物18-19
• 2.2.3 主要儀器設(shè)備19
• 2.3 實驗方法19-20
• 2.3.1 藥物對小鼠皮膚創(chuàng)傷模型的影響19
• 2.3.2 激光散斑觀察篩選的藥物對創(chuàng)傷部位血流灌注量的影響19
• 2.3.3 篩選的藥物對小鼠耳腫脹模型的影響19-20
• 2.3.4 篩選的藥物對小鼠腹腔巨噬細胞吞噬功能的影響20
• 2.3.5 統(tǒng)計學(xué)分析20
• 2.4 實驗結(jié)果20-24
• 2.4.1 藥物對小鼠皮膚創(chuàng)傷模型的影響20-22
• 2.4.2 篩選的藥物對血流灌注量的影響22
• 2.4.3 篩選的藥物對小鼠耳腫脹模型的影響22-23
• 2.4.4 篩選的藥物對小鼠腹腔巨噬細胞吞噬功能的影響23-24
• 2.5 實驗小結(jié)24-26
• 第三章 體外創(chuàng)傷治愈微環(huán)境抑肺癌作用研究26-34
• 3.1 前言26
• 3.2 實驗材料26-28
• 3.2.1 試劑材料26
• 3.2.2 實驗細胞26-27
• 3.2.3 實驗儀器27
• 3.2.4 試劑配制27-28
• 3.3 實驗方法28-29
• 3.3.1 MTT細胞增殖實驗28
• 3.3.2 劃痕標(biāo)記染料示蹤方法檢測細胞間隙連接通訊28-29
• 3.3.5 軟瓊脂克隆實驗29
• 3.3.6 腫瘤干細胞成球?qū)嶒?/span>29
• 3.3.7 統(tǒng)計學(xué)分析29
• 3.4 實驗結(jié)果29-33
• 3.4.1 MTT檢測藥物對細胞增殖的影響29-30
• 3.4.2 藥物對細胞間連接通訊的影響30
• 3.4.3 藥物對A549軟瓊脂克隆實驗的影響30-31
• 3.4.5 藥物對A549干細胞成球?qū)嶒灥挠绊?/span>31-33
• 3.5 實驗小結(jié)33-34
• 第四章 體內(nèi)創(chuàng)傷治愈微環(huán)境抑肺癌作用研究34-50
• 4.1 前言34
• 4.2 實驗材料34-37
• 4.2.1 實驗藥品及試劑34-35
• 4.2.2 實驗動物35
• 4.2.3 實驗儀器35
• 4.2.4 試劑配制35-37
• 4.3 實驗方法37-41
• 4.3.1 篩選藥物對化學(xué)誘導(dǎo)小鼠肺癌模型的預(yù)防作用37
• 4.3.2 肺組織HE染色37-38
• 4.3.3 免疫組化檢測肺組織KI67及CLEAVED CASPASE-338-39
• 4.3.4 免疫印跡檢測肺組織中蛋白表達39-41
• 4.3.5 統(tǒng)計學(xué)分析41
• 4.4 實驗結(jié)果41-48
• 4.4.1 藥物對小鼠體重變化的影響41-42
• 4.4.2 藥物對小鼠自主活動的影響42
• 4.4.3 藥物對烏拉坦誘導(dǎo)肺癌發(fā)生率的影響42-43
• 4.4.4 藥物對肺屏障通透性檢測43-44
• 4.4.5 肺臟病理學(xué)診斷44-45
• 4.4.6 KI67及CLEAVED CASPASE-3 免疫組化表達45-46
• 4.4.7 免疫印跡檢測肺組織中蛋白表達46-48
• 4.5 實驗小結(jié)48-50
• 第五章 創(chuàng)傷治愈微環(huán)境抑肺癌作用機制研究50-58
• 5.1 前言50
• 5.2 實驗材料50-51
• 5.2.1 試劑材料50
• 5.2.2 實驗動物50-51
• 5.2.3 實驗儀器51
• 5.2.4 檢測試劑盒51
• 5.3 實驗方法51-52
• 5.3.1 藥物對不同模型組肺臟的影響51
• 5.3.2 炎癥與損傷相關(guān)細胞因子的檢測51
• 5.3.3 創(chuàng)傷修復(fù)能力的檢測51-52
• 5.3.4 統(tǒng)計方法52
• 5.4 實驗結(jié)果52-57
• 5.4.1 藥物對不同模型組肺臟的影響52-54
• 5.4.2 不同造模方法對肺臟細胞因子的影響54-55
• 5.4.3 藥物對烏拉坦誘導(dǎo)肺癌模型肺臟細胞因子的影響55
• 5.4.4 藥物對烏拉坦誘導(dǎo)肺癌模型聯(lián)合巨噬細胞耗竭肺臟細胞因子的影響55-56
• 5.4.5 藥物對烏拉坦誘導(dǎo)肺癌模型小鼠皮膚創(chuàng)傷的影響56-57
• 5.5 實驗小結(jié)57-58
• 第六章 討論58-60
• 第七章 結(jié)論60-62
• 第八章 創(chuàng)新性總結(jié)62-64
• 參考文獻64-70
• 致謝70-71
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文71-72

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1 王莉莎;;社長的話[J];中國組織工程研究與臨床康復(fù);2009年12期

2 張慈安;魏品康;李勇進;;腫瘤酸性微環(huán)境的研究進展[J];腫瘤;2010年06期

3 姚志麟;;三個人口組在各種微環(huán)境中的一氧化碳暴露和總暴露[J];國外醫(yī)學(xué)(衛(wèi)生學(xué)分冊);1986年03期

4 程鴻,楊幼明,張帆;籠內(nèi)換氣對微環(huán)境的影響[J];中國實驗動物學(xué)雜志;1991年Z1期

5 彭玉萍;;營造科學(xué)的睡眠微環(huán)境[J];家庭醫(yī)藥(快樂養(yǎng)生);2013年03期

6 徐銳;;打造睡眠微環(huán)境[J];家庭醫(yī)藥(快樂養(yǎng)生);2013年02期

7 楊沁怡;謝欣怡;;腫瘤炎性微環(huán)境與腫瘤的發(fā)生發(fā)展[J];醫(yī)學(xué)信息(中旬刊);2011年08期

8 唐代彬;李樹清;;神經(jīng)元微環(huán)境及其調(diào)節(jié)[J];中國微循環(huán);2008年01期

9 徐靚;季峰;;腫瘤酸性微環(huán)境與抗腫瘤耐藥對策研究進展[J];國際消化病雜志;2010年02期

10 孫靈芝;莊偉端;;內(nèi)源性神經(jīng)干細胞的原位激活與微環(huán)境[J];中國醫(yī)藥導(dǎo)報;2012年34期

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1 余秀芳;蔣賢輝;;關(guān)注微環(huán)境創(chuàng)建農(nóng)業(yè)健康生態(tài)[A];科技、工程與經(jīng)濟社會協(xié)調(diào)發(fā)展——中國科協(xié)第五屆青年學(xué)術(shù)年會論文集[C];2004年

2 徐志剛;劉曉英;焦學(xué)磊;;基于C8051F005的新型組培氣體微環(huán)境調(diào)控系統(tǒng)的研制與試驗[A];中國農(nóng)業(yè)生物技術(shù)學(xué)會第三屆會員代表大會暨學(xué)術(shù)交流會論文摘要集[C];2006年

3 蔡尤溪;胡石政;吳仁杰;駱志輝;;超潔凈微環(huán)境設(shè)計參數(shù)之實驗與模擬研究[A];第五屆海峽兩岸制冷空調(diào)技術(shù)交流會論文專輯[C];2001年

4 王方;;展柜微環(huán)境控制的應(yīng)用研究[A];中國文物保護技術(shù)協(xié)會第七次學(xué)術(shù)年會論文集[C];2012年

5 李福山;;肝癌復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移與微環(huán)境調(diào)節(jié)[A];2013年廣東省肝臟病學(xué)會《全國肝病防治高峰論壇》深圳會議講義匯編[C];2013年

6 鄧方閣;張秀英;王心蕊;李玉林;;體外模擬心肌微環(huán)境對人骨髓間充質(zhì)干細胞向心肌分化的影響[A];中華醫(yī)學(xué)會病理學(xué)分會2006年學(xué)術(shù)年會論文匯編[C];2006年

7 楊長青;楊麗;常義忠;陳錫美;;整合素α1β1和α1β2是纖維化微環(huán)境中肝腫瘤細胞浸潤的主要介導(dǎo)因素[A];中華醫(yī)學(xué)會第七次全國消化病學(xué)術(shù)會議論文匯編（下冊）[C];2007年

8 申俊;周紅梅;;腫瘤-宿主界面微環(huán)境中的細胞交互作用模型研究[A];中華口腔醫(yī)學(xué)會第六屆全國口腔黏膜病學(xué)術(shù)會議論文集[C];2004年

9 蔣宏亮;康成軍;蔡國強;於麟;王利群;;腫瘤弱酸性微環(huán)境響應(yīng)性殼聚糖基多層次膠束:高級組裝與解組裝研究[A];2011年全國高分子學(xué)術(shù)論文報告會論文摘要集[C];2011年

10 許嘉;高佳佳;高瑩;金陶勝;;天津市典型交通微環(huán)境內(nèi)顆粒物的個體暴露研究[A];2010年海峽兩岸環(huán)境與能源研討會摘要集[C];2010年

中國重要報紙全文數(shù)據(jù)庫 前7條

1 劉海;“微環(huán)境”時刻影響兒童健康成長[N];新華每日電訊;2003年

2 孫國根;腫瘤發(fā)生、惡化的“微環(huán)境”可被清除[N];中國醫(yī)藥報;2013年

3 小舒;搞科研的微環(huán)境十分重要[N];中國醫(yī)藥報;2006年

4 記者 胡其峰;我科學(xué)家實現(xiàn)腦細胞生存微環(huán)境可視[N];光明日報;2013年

5 編譯 李勇;微環(huán)境可作為抗癌藥研發(fā)新靶點[N];中國醫(yī)藥報;2013年

6 遼寧中醫(yī)藥大學(xué) 鄭洪新　上海中醫(yī)藥大學(xué)附屬龍華醫(yī)院 王擁軍;探索“腎藏精”與干細胞及其微環(huán)境及NEI網(wǎng)絡(luò)動態(tài)平衡關(guān)系[N];中國中醫(yī)藥報;2011年

7 唐曉景 渠紅麗;最好的時代與最優(yōu)的微環(huán)境[N];東營日報;2013年

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1 張博;高糖微環(huán)境通過GSK3β調(diào)控Cyclin D1、CXCR-4影響大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞增殖遷移[D];中國人民解放軍醫(yī)學(xué)院;2015年

2 張雪;軟骨微環(huán)境及細胞起源對再生軟骨類型的調(diào)控作用[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2016年

3 許小青;化學(xué)小分子誘導(dǎo)的蛋白質(zhì)活性中心周圍微環(huán)境的變化[D];南京師范大學(xué);2016年

4 王凱;蜂膠對炎性疾病和炎癥微環(huán)境的影響及其作用機制[D];浙江大學(xué);2016年

5 李建華;生物材料表面與微環(huán)境構(gòu)建對細胞行為的調(diào)控及在生物醫(yī)學(xué)工程應(yīng)用[D];山東大學(xué);2016年

6 徐春雯;室內(nèi)空氣穩(wěn)定性對人體呼吸微環(huán)境的影響[D];湖南大學(xué);2014年

7 宋敏;DJ-1蛋白對肺癌微環(huán)境的調(diào)節(jié)作用及其與EGCG防癌的關(guān)系[D];中南大學(xué);2010年

8 高劍;新疾病外傷后細菌性致死性肉芽腫病原菌——痤瘡丙酸桿菌生物膜三維模型重建及生物膜與微環(huán)境pH的相互作用[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2010年

9 朱秀委;數(shù)學(xué)腫瘤學(xué)的研究與應(yīng)用：微環(huán)境的作用[D];浙江大學(xué);2011年

10 徐志剛;組培微環(huán)境與規(guī)�；缭O(shè)施環(huán)境調(diào)控的研究[D];南京農(nóng)業(yè)大學(xué);2002年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 孫志平;結(jié)核分枝桿菌BSL-3實驗室微環(huán)境表面污染檢測及消毒的研究[D];復(fù)旦大學(xué);2014年

2 朱愛林;COPD微環(huán)境對A549細胞增殖、遷移和侵襲的影響[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2015年

3 朱蔚沫;基于城市微環(huán)境PM_(2.5)暴露的人群健康風(fēng)險研究[D];南京大學(xué);2016年

4 謝濤;膠質(zhì)瘤干細胞誘發(fā)腫瘤免疫炎性微環(huán)境相關(guān)動物模型的研究[D];蘇州大學(xué);2016年

5 王紅;炎癥微環(huán)境下組蛋白去乙�；瘜ρ乐苣じ杉毎偕芰Φ挠绊慬D];第四軍醫(yī)大學(xué);2016年

6 朱宏;ERK通路調(diào)控正常及炎癥微環(huán)境內(nèi)牙周膜干細胞內(nèi)皮向分化的機制研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2016年

7 劉睿豪;成都住宅建筑群微環(huán)境特性及被動式設(shè)計方法研究[D];西南石油大學(xué);2016年

8 劉霖鑫;創(chuàng)傷治愈微環(huán)境抑肺癌機制與藥物治療[D];河南大學(xué);2016年

9 賀宇姣;網(wǎng)絡(luò)微環(huán)境下中學(xué)思想政治課教學(xué)實效性研究[D];陜西師范大學(xué);2015年

10 韓遠青;車載微環(huán)境監(jiān)控系統(tǒng)的設(shè)計與實現(xiàn)[D];中山大學(xué);2014年

  本文關(guān)鍵詞：創(chuàng)傷治愈微環(huán)境抑肺癌機制與藥物治療，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

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本文編號：490383