本文關(guān)鍵詞：轉(zhuǎn)錄因子c-Jun通過調(diào)控β3GnT8表達改變肝癌細胞侵襲、遷移機制研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:探討轉(zhuǎn)錄因子c-Jun通過對β3GnT8的調(diào)控作用發(fā)揮對肝癌細胞侵襲、遷移調(diào)控的作用機制。方法:(1)培養(yǎng)三種人肝癌細胞株SK-Hep-1、SMMC7721、HepG2,Real time PCR及Western blot檢測c-jun和β3GnT8的表達;(2)染色質(zhì)免疫共沉淀(ChIP)檢測轉(zhuǎn)錄因子c-Jun與β3GnT8啟動子區(qū)相互結(jié)合;(3)c-jun正義載體及空載體和c-jun干擾載體及空載體分別通過脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染c-Jun低表達細胞株SK-Hep-1和c-Jun高表達細胞株HepG2,熒光顯微鏡觀察轉(zhuǎn)染效率;(4)Real time PCR及Western blot檢測轉(zhuǎn)染后SK-Hep-1和HepG2 c-jun、β3GnT8、CD147以及一些相關(guān)分子的表達變化;(5)Lectin blot檢測轉(zhuǎn)染后多聚乳糖胺表達變化;(6)Transwell檢測轉(zhuǎn)染后SK-Hep-1和HepG2細胞侵襲、遷移能力變化;(7)劃痕損傷修復(fù)實驗檢測轉(zhuǎn)染后SK-Hep-1和HepG2細胞遷移能力變化;(8)低表達β3GnT8 SK-Hep-1與SMMC7721構(gòu)建上調(diào)β3GnT8穩(wěn)轉(zhuǎn)細胞株;(9)c-jun干擾載體及空載體分別通過脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染SK-Hep-1與SMMC7721上調(diào)β3GnT8穩(wěn)轉(zhuǎn)細胞株,Western blot檢測轉(zhuǎn)染后SK-Hep-1和SMMC7721 c-Jun、β3GnT8、CD147表達變化,Lectin blot檢測細胞多聚乳糖胺表達變化,Transwell實驗檢測細胞侵襲、遷移能力變化。結(jié)果:(1)三種肝癌細胞中HepG2的c-Jun表達量最高,其次為SMMC7721,SK-Hep-1的c-Jun表達最低;β3GnT8在HepG2中表達最高,SK-Hep-1中表達適中,SMMC7721表達最低;(2)ChIP結(jié)果顯示,SK-Hep-1和HepG2細胞中轉(zhuǎn)錄因子c-Jun結(jié)合到β3GnT8 DNA啟動子區(qū);(3)Real time PCR及Western blot檢測發(fā)現(xiàn),與對照組相比,SK-Hep-1細胞上調(diào)c-jun后,細胞β3GnT8 mRNA及蛋白表達升高,GNTⅤ蛋白表達升高,HG-CD147蛋白表達升高,MMP14 mRNA表達升高,TIMP2蛋白表達降低;與對照組相比,HepG2細胞干擾c-jun后,細胞β3GnT8mRNA及蛋白表達下降,GNTⅤ蛋白表達下降,CD147 mRNA及HG-CD147蛋白表達下降,MMPs mRNA表達下降,TIMP2蛋白表達升高;(4)Lectin blot結(jié)果顯示,與對照組相比,SK-Hep-1細胞上調(diào)c-jun后,細胞多聚乳糖胺表達升高;與對照組相比,HepG2細胞干擾c-jun后,細胞多聚乳糖胺表達下降;(5)Transwell及細胞劃痕損傷修復(fù)實驗表明,與對照組相比,SK-Hep-1細胞上調(diào)c-jun后,細胞侵襲、遷移能力上升;HepG2細胞干擾c-jun后,細胞侵襲、遷移能力下降;(6)Western blot檢測SK-Hep-1與SMMC7721β3GnT8穩(wěn)轉(zhuǎn)細胞株蛋白表達,與對照組相比,β3GnT8表達顯著升高,HG-CD147表達升高,Lectin blot實驗表明,細胞多聚乳糖胺表達顯著升高,Transwell實驗表明,細胞侵襲遷移能力上升;Western blot檢測SK-Hep-1與SMMC7721β3GnT8穩(wěn)轉(zhuǎn)細胞株轉(zhuǎn)染c-jun干擾載體后蛋白表達,與穩(wěn)轉(zhuǎn)細胞株相比,β3GnT8表達下降,HG-CD147表達下降,Lectin blot實驗表明,細胞多聚乳糖胺表達下降,Transwell實驗表明,細胞侵襲遷移能力下降。結(jié)論:(1)β3GnT8可通過改變多聚乳糖胺的表達和糖蛋白CD147糖基化水平影響細胞功能,在肝癌細胞侵襲、遷移過程中發(fā)揮重要作用,過表達β3GnT8可提高肝癌細胞侵襲、遷移能力。(2)c-Jun作為轉(zhuǎn)錄因子在SK-Hep-1和HepG2細胞中調(diào)控β3GnT8的表達,該作用可能是c-Jun調(diào)控肝癌細胞侵襲、遷移能力的機制之一。
【關(guān)鍵詞】：β3GnT8 侵襲遷移 CD147 多聚乳糖胺 轉(zhuǎn)錄因子c-Jun 肝癌
【學位授予單位】：蘇州大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R735.7
【目錄】：

• 摘要4-6
• Abstract6-9
• 前言9-25
• 參考文獻17-25
• 1.引言25-26
• 2.材料與方法26-41
• 3.實驗結(jié)果41-59
• 4.討論59-63
• 參考文獻63-66
• 全文總結(jié)66-67
• 綜述：肝癌中轉(zhuǎn)錄因子c-Jun的作用研究67-75
• 參考文獻71-75
• 攻讀學位期間本人出版或公開發(fā)表的論文75-76
• 受資助的基金項目76-77
• 附錄Ⅰ 中英文縮略詞表77-79
• 致謝79-80

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本文編號：483798