本文關(guān)鍵詞：胰腺癌細胞對基質(zhì)成纖維細胞的影響及機制研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：背景近年來研究顯示腫瘤的發(fā)生和發(fā)展與由多種基質(zhì)細胞、細胞因子、趨化因子等組成的腫瘤微環(huán)境密切相關(guān),其中癌相關(guān)成纖維細胞(cancer associated fibroblasts,CAFs)越來越受到關(guān)注。胰腺癌中基質(zhì)細胞含量豐富,尤其是CAFs,大量研究認為胰腺癌中的CAFs可促進癌細胞的增殖遷移等生物學功能,但對于癌細胞在CAFs的產(chǎn)生過程中所發(fā)揮的作用及其機制的研究相對較少。目的1.觀察胰腺癌細胞系與正常成纖維細胞(normal fibroblasts,NFs)共培養(yǎng)、癌細胞中的微囊泡(microvesicles,MVs)刺激NFs兩種方式能否誘導NFs活化成CAFs,以及上述刺激對成纖維細胞生物學行為的影響。2.初步探索胰腺癌細胞促進NFs活化成CAFs的發(fā)生機制。方法1.原代分離培養(yǎng)野生型C57小鼠胰腺組織中的NFs,將其與胰腺癌細胞系BXPC-3、SW1990進行共培養(yǎng),運用western方法檢測共培養(yǎng)后成纖維細胞中α-SMA、FAP含量,并采用edu方法檢測成纖維細胞增殖能力變化。2.采用超速離心法提取上述胰腺癌細胞系中的MVs并分別用其刺激NFs,同樣方法檢測相應蛋白含量以及成纖維細胞增殖能力。3.采用Trizol試劑盒法提取成纖維細胞中的RNA,后進行逆轉(zhuǎn)錄以及qRT-PCR實驗檢測12種miRNA含量,并采用同樣方法提取MVs以及相應量MV-free中上述miRNA含量;4.根據(jù)前述結(jié)果,在NFs中轉(zhuǎn)染miR-155類似物(即pre-miR-155),同樣檢測α-SMA、FAP含量以及成纖維細胞增殖能力。5.在胰腺癌細胞株中轉(zhuǎn)染miR-155抑制劑(即anti-miR-155),收集MVs并刺激NFs,然后檢測α-SMA、FAP含量以及成纖維細胞增殖能力。6.選取miR-155的下游靶基因TP53inp1,western方法檢測共培養(yǎng)前后、MVs刺激前后、在nfs中轉(zhuǎn)染pre-mir-155前后、敲除mir-155的mvs刺激前后的成纖維細胞中tp53inp1蛋白含量變化。7.在nfs中轉(zhuǎn)染tp53inp1基因的干擾rna,同樣采用western方法檢測干擾前后的成纖維細胞中α-sma、fap含量變化以及其增殖能力變化。結(jié)果1.nfs分別與胰腺癌細胞系bxpc-3、sw1990共培養(yǎng)后,其中cafs標志蛋白α-sma含量分別提高了(84.70±0.36)%、(69.11±0.26)%(p0.05),fap蛋白含量分別升高了(59.82±0.49)%,(42.17±0.11)%(p0.05),共培養(yǎng)后cafs增殖能力分別提高了(57.33±0.08)%,(48±0.12)%(p0.05)。2.從bxpc-3、sw1990細胞中提取的mvs刺激nfs,可見刺激之后的成纖維細胞中α-sma含量分別提高了(61.06±0.12)%,(54.47±0.20)%(p0.05),fap蛋白含量分別升高(85.46±0.67)%,(49±0.24)%(p0.05),刺激之后的cafs增殖能力分別提高了(3.47±0.44)倍,(4.65±0.60)倍(p0.05)。3.在所選取的12種mirna中,mir-155在nfs與bxpc-3、sw1990共培養(yǎng)之后的成纖維細胞中分別升高了(1.50±0.45)倍、(1.95±0.65)倍(p0.05),同時mir-155在bxpc-3細胞的mvs以及sw1990細胞的mvs刺激后的成纖維細胞中分別升高了(1.11±0.35)倍,(87.90±0.27)%(p0.05),并且mir-155在bxpc-3細胞的mvs以及sw1990細胞的mvs中富集量分別是相應mv-free的(7.37±0.66)倍,(7.85±0.62)倍(p0.05)。4.在nfs中轉(zhuǎn)染pre-mir-155后,成纖維細胞中α-sma、fap蛋白含量分別升高了(1.52±0.11)倍,(1.71±0.67)倍(p0.05),轉(zhuǎn)染后的成纖維細胞增殖能力提高了(94.11±0.17)%(p0.05)。5.敲除了mir-155的胰腺癌細胞系的mvs刺激nfs后,與陰性對照相比,成纖維細胞中α-sma、fap蛋白含量無明顯差別;同樣地,成纖維細胞增殖能力在刺激前后無明顯變化。6.nfs與bxpc-3,sw1990細胞共培養(yǎng)后,其中tp53inp1蛋白含量分別降低了(49.15±0.09)%,(27.54±0.10)%(p0.05);同時,bxpc-3,sw1990細胞的MVs刺激NFs后,其中TP53inp1蛋白含量分別降低了(78.80±0.12)%,(67.95±0.14)%(P0.05);在NFs中轉(zhuǎn)染pre-miR-155后TP53inp1蛋白含量降低了(35.82±0.02)%(P0.05);但是在敲除了miR-155的胰腺癌細胞MVs刺激NFs后,該蛋白含量較陰性對照無明顯變化。7.NFs中轉(zhuǎn)染TP53inp1基因的干擾RNA之后,其中α-SMA、FAP蛋白含量分別升高了(90.28±0.11)%,(94.64±0.29)%(P0.05),且轉(zhuǎn)染后的成纖維細胞增殖能力提高了(92.27±0.30)%(P0.05)。結(jié)論1.胰腺癌細胞可以促進癌周圍基質(zhì)中NFs活化成CAFs,且活化后的CAFs增殖能力明顯增強。2.在胰腺癌周圍基質(zhì)的NFs活化過程中,癌細胞中的miR-155可能通過其自身分泌的MVs包裹運輸?shù)竭_NFs細胞中,并在NFs中靶向TP53inp1蛋白發(fā)揮促進NFs活化作用。
【關(guān)鍵詞】：胰腺癌細胞 成纖維細胞 微囊泡 miRNA
【學位授予單位】：安徽醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R735.9
【目錄】：

• 英文縮略詞表5-6
• 中文摘要6-9
• 英文摘要9-13
• 前言13-16
• 第一部分 胰腺癌細胞對基質(zhì)成纖維細胞影響的研究前言16-27
• 1.材料與法16-22
• 2.結(jié)果22-25
• 3.討論25-27
• 第二部分 胰腺癌細胞促進基質(zhì)成纖維細胞活化的機制研究前言27-43
• 1.材料與方法27-31
• 2.結(jié)果31-41
• 3.討論41-43
• 總結(jié)43-44
• 結(jié)論44-45
• 參考文獻45-48
• 個人簡歷48-49
• 致謝49-50
• 綜述50-56
• 參考文獻53-56

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9 朱sヨ

本文編號：482288