發(fā)布時間：2017-06-25 08:00

  本文關鍵詞：LASS2表達對膀胱癌EJ細胞體內(nèi)致瘤能力的影響及機理探討，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：[目的]建立裸鼠原位膀胱癌種植模型和皮下膀胱癌種植模型；通過觀察瘤灶的部位和數(shù)目,檢測腫瘤中LASS2表達變化,同時檢測增殖、凋亡等指標(Bcl-2、Bcl-xL、 Bax、Bim、caspase3、Ki-67)的變化,明確LASS2表達對膀胱癌EJ細胞體內(nèi)致瘤能力的影響并探討其機制。[方法]1.建立原位膀胱癌裸鼠種植模型和皮下膀胱癌裸鼠種植模型(1)原位膀胱癌裸鼠種植模型：分別對每組的裸鼠常規(guī)消毒并麻醉后,手指擠壓裸鼠下腹部排空膀胱內(nèi)尿液,經(jīng)尿道插入導管,推進約1cm左右即可進入膀胱,用PBS沖洗膀胱,排空膀胱后向膀胱內(nèi)注入胰蛋白酶,夾管保留30min后放出胰蛋白酶并用PBS沖洗。在裸鼠排空膀胱后將EJ單細胞懸液灌注入膀胱,并夾管保留1小時,1小時后拔出導管,膀胱自行排空。DMEM膀胱癌細胞培養(yǎng)基作為對照組(2)膀胱癌細胞皮下注射裸鼠轉移模型：碘伏消毒裸鼠皮膚,EJ細胞株按常規(guī)計數(shù)后,使用EDTA/胰酶進行消化,離心后用生理鹽水重懸。于每只裸鼠左腋皮下注射入膀胱癌EJ細胞。2.觀察裸鼠致瘤情況。一周2次觀察裸鼠的狀態(tài)及飲食情況,通過下腹部觸摸膀胱是否有腫塊或變硬,擠壓膀胱觀察是否有血尿,對癌細胞的致瘤情況進行初步判斷；脫臼處死裸鼠,詳細檢查裸鼠的胸腔、腹腔、盆腔等肉眼可見部位的臟器有無腫瘤的出現(xiàn),據(jù)此初步確定腫瘤的轉移情況。稱取瘤重,繪制腫瘤生長曲線。3.檢測LASS2及增殖、凋亡等指標變化。應用實時定量PCR、western blot和免疫組織化學檢測腫瘤中LASS2變化、檢測增殖、凋亡等指標(Bcl-2、Bcl-xL、 Bax、Bim、caspase3、Ki-67)。[結果]1.成功建立了原位膀胱癌裸鼠種植模型和膀胱癌細胞皮下注射裸鼠轉移模型。2.原位膀胱癌裸鼠種植模型致瘤效果不理想,皮下種植組成瘤率100%。兩組模型中的裸鼠均未發(fā)現(xiàn)體內(nèi)臟器轉移現(xiàn)象。病理切片觀察,皮下移植組和原位移植瘤組均顯示腫瘤組織內(nèi)有大量分化程度低、形態(tài)不規(guī)則、大小不一、胞質(zhì)豐富的深著色細胞,細胞核異型性明顯,同時可見少量細胞核分裂。3.免疫組化染色后,證實LASS2蛋白主要表達于細胞的細胞漿和細胞膜上,少數(shù)細胞核中也可以見著染。LASS2的表達：正常膀胱組原位組皮下組。4.免疫組化對膀胱腫瘤組織和皮下腫瘤組織的Ki67蛋白進行檢測,結果顯示對照組原位組皮下組,差異具有顯著性。5.熒光定量PCR檢測各組間Bc12家族各因子,結果顯示Bcl-2和Bcl-xl呈現(xiàn)高表達,Bcl-2在皮下種植瘤和原位種植瘤組織中的表達明顯較正常膀胱組織高；而Bcl-xl在原位種植瘤組織中的表達高于其他兩組,差異均具有統(tǒng)計學意義；Bax和Bim均呈現(xiàn)低表達,Bax在各組中的表達水平無明顯差異；而Bim在皮下種植瘤的表達水平明顯低于正常膀胱組織,原位種植瘤和正常膀胱組織中的Bim表達也無明顯差異。6.對caspase3、LASS2和ki67進行了mRNA和蛋白水平的檢測,結果顯示：caspase3在各組組織中的表達無統(tǒng)計學差異；LASS2在正常膀胱組織中的表達較其他兩種腫瘤組織中的表達顯著升高,差異具有統(tǒng)計學意義；而ki67在皮下種植瘤組織中的表達較其他兩種腫瘤組織中的表達顯著升高,差異也具有統(tǒng)計學意義。[結論]1.原位膀胱癌裸鼠種植模型致瘤效果不理想,成瘤率極低,而皮下移植瘤成瘤率為100%。兩組模型體內(nèi)均未見重要臟器轉移,轉移能力不確切,LASS2基因對于膀胱癌細胞體內(nèi)轉移能力的影響有待進一步的研究檢測。2.在原位種植組的膀胱組織中,LASS2的表達明顯低于對應的正常膀胱組織組。同皮下實體瘤組織比較,原位種植組的LASS2水平提高。原位種植組腫瘤和皮下種植組腫瘤組織中Ki67的蛋白染色均較對照組的表達顯著升高。這提示我們LASS2的表達可能影響體內(nèi)膀胱癌細胞的成瘤能力,LASS2對腫瘤增殖能力的影響可能與ki67的表達改變有關。
【關鍵詞】：LASS2 膀胱癌 體內(nèi) 致瘤能力 機理
【學位授予單位】：昆明醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R737.14
【目錄】：

• 縮略詞表5-6
• 中文摘要6-9
• 英文摘要9-12
• 前言12-14
• 材料與方法14-25
• 結果25-40
• 討論40-46
• 結論46-47
• 參考文獻47-51
• 綜述51-60
• 參考文獻57-60
• 攻讀學位期間獲得的學術成果60-61
• 致謝61

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