本文關(guān)鍵詞：組蛋白H3精氨酸單ADP核糖基化對大腸癌細胞E-cadherin表達影響的初步研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：研究目的:初步探討大腸癌組蛋白H3精氨酸單ADP核糖基化修飾對大腸癌細胞E-cadherin表達的影響及其可能的機制。方法:本課題分為四部分。1單腺苷二磷酸核糖基化轉(zhuǎn)移酶ARTD8和ARTD14在人大腸腺癌組織中的表達及意義:采用免疫組織化學(xué)方法對65例大腸癌組織標本分別檢測ARTD8和ARTD14在大腸癌組織的表達情況。2不同分化程度大腸癌細胞株組蛋白單ADP核糖基化修飾差異檢測:應(yīng)用四級串聯(lián)質(zhì)譜檢測人大腸癌LOVO細胞株和SW480細胞株中組蛋白單ADP核糖基化修飾的差異。3組蛋白H3第117位精氨酸單ADP核糖基化對大腸癌細胞E-cadherin表達及癌細胞遷移能力的影響:(1)分別將pLenti-H3mut1-IRES-eGFP和p Lenti-H3 mut2-IRES-eGFP慢病毒載體穩(wěn)定轉(zhuǎn)染至人大腸癌LOVO細胞,構(gòu)建穩(wěn)定氨基酸突變細胞株。(2)Western Blot和QPCR分別檢測未轉(zhuǎn)染LOVO細胞組、轉(zhuǎn)染空載體LOVO細胞組(LV-control LOVO細胞組)、H3 R117A LOVO細胞組和H3 R117K LOVO細胞組中E-cadherin蛋白和mRNA水平。(3)細胞劃痕實驗、Transwell遷移能力實驗檢測未轉(zhuǎn)染lovo細胞組、轉(zhuǎn)染空載體lovo細胞組、h3r117alovo細胞組和h3r117klovo細胞組癌細胞遷移能力。4組蛋白h3第117位精氨酸單adp核糖基化對大腸癌細胞e-cadherin影響的分子機制研究:(1)westernblot檢測未轉(zhuǎn)染lovo細胞組、轉(zhuǎn)染空載體lovo細胞組、h3r117alovo細胞組和h3r117klovo細胞組中parp1蛋白水平。(2)westernblot檢測未轉(zhuǎn)染lovo細胞組、轉(zhuǎn)染空載體lovo細胞組、h3r117alovo細胞組和h3r117klovo細胞組中h3k9甲基化水平。(3)qpcr檢測未轉(zhuǎn)染lovo細胞組、轉(zhuǎn)染空載體lovo細胞組、h3r117alovo細胞組和h3r117klovo細胞組中fbp1的mrna的轉(zhuǎn)錄水平。結(jié)果:1單腺苷二磷酸核糖基化轉(zhuǎn)移酶artd8和artd14在人大腸腺癌組織中的表達及意義。(1)artd8在大腸腺癌和正常大腸組織中均有表達,在大腸腺癌細胞,artd8主要分布于細胞質(zhì)中,同時見于部分細胞核中;在正常大腸黏膜腺體,則僅分布于細胞質(zhì)中。artd8在大腸腺癌組織中表達強度高于正常大腸黏膜細胞(p0.05)。直腸腺癌細胞artd8核陽性表達率高于正常大腸黏膜(p0.05),同時高于結(jié)腸腺癌細胞核陽性表達率(p0.05)。(2)artd14在大腸腺癌和正常大腸組織中均有表達,在大腸腺癌細胞,artd14主要分布于細胞質(zhì)中,同時見于部分細胞核中;在正常大腸黏膜腺體,則僅分布于細胞質(zhì)中。artd14在大腸腺癌組織中表達強度高于正常大腸黏膜細胞(p0.05),并與腫瘤的分化程度存在相關(guān)性(p0.05)。結(jié)腸腺癌細胞artd14核陽性表達率高于正常大腸黏膜(p0.05)。2不同分化程度人大腸癌細胞株中組蛋白單adp核糖基化修飾的檢測:四級串聯(lián)質(zhì)譜檢測結(jié)果顯示,lovo細胞組蛋白h3的第117位精氨酸存在單adp核糖基化修飾,而sw480細胞組蛋白h3第117位則不存在這一修飾。3組蛋白h3第117位精氨酸單adp核糖基化對大腸癌細胞e-cadherin表達及癌細胞遷移能力的影響。(1)將plenti-h3mut1-ires-egfp和plenti-h3mut2-ires-egfp慢病毒載體分別轉(zhuǎn)染至人大腸癌lovo細胞,熒光顯微鏡下觀察,轉(zhuǎn)染空載體lovo細胞、h3r117alovo細胞和h3r117klovo細胞均可以見到綠色熒光,而且熒光細胞達到總細胞數(shù)的80%。(2)westernblot、qpcr結(jié)果顯示h3r117alovo細胞組和h3r117klovo細胞組e-cadherin蛋白和mrna水平較未轉(zhuǎn)染lovo細胞組、轉(zhuǎn)染空載體lovo細胞組e-cadherin蛋白和mrna水平明顯增加。未轉(zhuǎn)染lovo細胞組與轉(zhuǎn)染空載體lovo細胞組無明顯差異,h3r117alovo細胞組和h3r117klovo細胞組無差異。(3)細胞劃痕實驗、transwell遷移實驗結(jié)果顯示,h3r117alovo細胞組和h3r117klovo細胞組中細胞的遷移能力比未轉(zhuǎn)染lovo細胞組、轉(zhuǎn)染空載體lovo細胞組低。未轉(zhuǎn)染lovo細胞組與轉(zhuǎn)染空載體lovo細胞組無明顯差異,h3r117alovo細胞組和h3r117klovo細胞組無差異。4組蛋白h3第117位精氨酸單adp核糖基化對大腸癌細胞e-cadherin影響的分子機制研究(1)westernblot結(jié)果顯示h3r117alovo細胞組和h3r117klovo細胞組中parp1蛋白水平較未轉(zhuǎn)染lovo細胞組、轉(zhuǎn)染空載體lovo細胞組明顯降低。未轉(zhuǎn)染lovo細胞組與轉(zhuǎn)染空載體lovo細胞組無明顯差異,h3r117alovo細胞組和h3r117klovo細胞組無差異。(2)westernblot結(jié)果顯示h3r117alovo細胞組和h3r117klovo細胞組中h3k9me2水平較未轉(zhuǎn)染lovo細胞組、轉(zhuǎn)染空載體lovo細胞組明顯下降。未轉(zhuǎn)染lovo細胞組與轉(zhuǎn)染空載體lovo細胞組無明顯差異,h3r117alovo細胞組和h3r117klovo細胞組無差異。(3)qpcr結(jié)果顯示h3r117alovo細胞組和h3r117klovo細胞組中fbp1mrna水平較未轉(zhuǎn)染lovo細胞組、轉(zhuǎn)染空載體lovo細胞組明顯增加。未轉(zhuǎn)染lovo細胞組與轉(zhuǎn)染空載體lovo細胞組無明顯差異,h3r117alovo細胞組和h3r117klovo細胞組無差異。結(jié)論:1.artd8和artd14在大腸癌組織表達強度較正常大腸組織高,artd14表達與大腸癌分化程度存在相關(guān)性,提示artd8和artd14可能與大腸癌發(fā)生發(fā)展有關(guān);直腸腺癌細胞artd8核陽性表達率高于正常大腸黏膜、結(jié)腸腺癌細胞artd14核陽性表達率高于正常大腸黏膜,提示大腸癌核內(nèi)也存在著單adp核糖基化作用,artd8和artd14可能影響組蛋白單adp核糖基化修飾對大腸癌發(fā)揮調(diào)節(jié)作用,但具體作用氨基酸位點尚有待進一步研究。2.組蛋白h3第117位精氨酸單adp核糖基化作用可以影響LOVO細胞E-cadherin的表達和癌細胞遷移能力。3.組蛋白H3第117位精氨酸單ADP核糖基化作用可通過調(diào)節(jié)PARP1引起組蛋白H3K9me2水平變化,影響FBP1的轉(zhuǎn)錄,從而引起E-cadherin的表達發(fā)生變化,最終導(dǎo)致細胞的遷移能力增加。
【關(guān)鍵詞】：組蛋白精氨酸單ADP核糖基化 E-cadherin 組蛋白甲基化
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R735.34
【目錄】：

• 英漢縮略語名詞對照4-5
• 中文摘要5-10
• 英文摘要10-16
• 前言16-19
• 參考文獻17-19
• 第一部分 單腺苷二磷酸核糖基化轉(zhuǎn)移酶ARTD8和ARTD14在大腸腺癌中的表達及意義19-29
• 1 材料和方法19-20
• 2 實驗結(jié)果20-25
• 3 討論25-27
• 參考文獻27-29
• 第二部分 不同分化程度人大腸癌細胞株中組蛋白單ADP核糖基化修飾的檢測29-35
• 1 材料和方法29-32
• 2 實驗結(jié)果32
• 3 討論32-33
• 參考文獻33-35
• 第三部分 組蛋白H3第117位精氨酸單ADP核糖基化對大腸癌細胞E-cadherin表達和癌細胞遷移的影響35-49
• 1 材料和方法35-41
• 2 實驗結(jié)果41-46
• 3 討論46-48
• 參考文獻48-49
• 第四部分 組蛋白H3第117位精氨酸單ADP核糖基化對大腸癌細胞E-cadherin影響的分子機制研究49-56
• 1 材料和方法49-50
• 2 實驗結(jié)果50-53
• 3 討論53-55
• 參考文獻55-56
• 全文總結(jié)56-58
• 文獻綜述58-67
• 參考文獻63-67
• 致謝67-68
• 碩士期間發(fā)表論文情況68

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  本文關(guān)鍵詞：組蛋白H3精氨酸單ADP核糖基化對大腸癌細胞E-cadherin表達影響的初步研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：454477