本文關鍵詞：真核翻譯起始因子5A2（eIF5A2）通過活性氧相關通路調控肝癌細胞的侵襲和轉移，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：背景：肝細胞癌(hepatocellular carcinoma, HCC)是世界范圍內(nèi)最常見的惡性腫瘤之一,具有很高的發(fā)病率和死亡率,尤其是在東亞發(fā)展中國家。每年超過600000人死于肝細胞癌,且每年約有750000例新病例被診斷為肝細胞癌。肝細胞癌總體預后較差,總體5年生存率不到5%,這可能與術后的高轉移復發(fā)率有關。由于缺乏有效的治療方法,學者們致力于肝癌的侵襲和轉移等機制的研究,以尋找新的治療途徑。越來越多的研究表明,真核翻譯起始因子5A2 (eIF5A2)是腫瘤轉移侵襲過程中的一個關鍵潛在靶基因�；钚匝�(ROS)在癌細胞增殖和遷移中也作為信號分子發(fā)揮著重要作用。然而,eIF5A2和ROS之間的潛在機制尚不清楚。目的：用相關分子生物學技術分析eIF5A2基因和ROS在肝細胞癌的侵襲和轉移中的可能作用,探究eIF5A2調控肝癌細胞的侵襲轉移是否與ROS相關通路有關,尋找肝細胞癌新的治療靶點。方法：選取90例肝癌患者的癌組織和癌旁組織,組成肝癌180點組織芯片,利用免疫組化技術,檢測組織中的eIF5A2蛋白表達信息,并進行生存統(tǒng)計分析,探究eIF5A2蛋白表達與患者預后的關系；用基因芯片技術探究GC7抑制eIF5A2的活性后,對肝細胞癌基因表達譜的改變,探究eIF5A2調控肝細胞癌的分子機制；用流式細胞術檢測肝癌細胞在不同藥物條件下的ROS水平；用小RNA干擾技術對特定基因進行抑制,沉默其基因表達,阻斷eIF5A2基因的表達,為后續(xù)實驗提供細胞模型；用transwell侵襲法和劃痕愈合實驗檢測肝癌在不同藥物條件下侵襲轉移能力的改變,觀察eIF5A2和ROS水平改變對肝癌細胞侵襲和轉移能力是否有調控作用；用Western blot和免疫熒光技術檢測不同藥物條件下肝癌的上皮間質轉化(EMT)蛋白標志物的表達信息和siRNA干擾效率,探究eIF5A2是否與肝癌細胞的EMT相關。結果：基因芯片結果分析表明,GC7抑制eIF5A2后引起ROS相關基因的表達水平下調；肝癌組織的免疫組化結果顯示,eIF5A2在癌組織中的表達顯著高于癌旁組織,Kaplan-Meier生存曲線顯示eIF5A2表達的高低與總生存數(shù)相關,與預后密切相關；流式細胞術分析發(fā)現(xiàn),6種肝癌細胞系在GC7抑制eIF5A2后均能使胞內(nèi)ROS水平降低；Transwell實驗和劃痕愈合實驗顯示,抑制eIF5A2后肝癌細胞的侵襲和轉移能力顯著降低；GC7作用之后,肝癌細胞胞內(nèi)的ROS水平降低；用NAC阻斷ROS后,肝癌的侵襲和轉移能力也顯著降低,再加入GC7作用之后,GC7不能進一步抑制肝癌的侵襲轉移能力；抑制eIF5A2和下調ROS水平可逆轉肝癌的EMT進程；阻斷肝癌細胞EMT之后,GC7和NAC對肝癌細胞的侵襲轉移調控作用減弱。結論：真核翻譯起始因子eIF5A2可能通過ROS相關通路調控肝癌細胞的EMT和侵襲轉移。eIF5A2和ROS可能是肝癌侵襲轉移潛在的預測指標和重要靶點。
【關鍵詞】：肝細胞癌 真核翻譯起始因子5A2(eIF5A2) 活性氧(ROS) 上皮間質轉化(EMT) 侵襲 轉移 預后
【學位授予單位】：浙江大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R735.7
【目錄】：

• 致謝4-6
• 摘要6-8
• ABSTRACT8-10
• 英文縮略詞10-14
• 1 引言14-18
• 2 實驗材料與方法18-29
• 2.1 主要材料和試劑18-19
• 2.1.1 細胞來源18
• 2.1.2 主要試劑18-19
• 2.2 主要儀器19-21
• 2.3 實驗方法21-29
• 2.3.1 細胞培養(yǎng)21-22
• 2.3.2 流式細胞儀測定細胞內(nèi)ROS水平22
• 2.3.3 細胞總蛋白的提取與蛋白濃度測定22-23
• 2.3.4 Western Blot檢測不同蛋白在不同條件下表達水平的變化23-26
• 2.3.5 小RNA轉染26-27
• 2.3.6 Transwell法檢測肝癌細胞的侵襲能為的變化27-28
• 2.3.7 劃痕愈合實驗檢測肝癌細胞的轉移能力的變化28
• 2.3.8 免疫熒光技術觀察肝癌細胞特定蛋白的定位及其表達水平的變化28-29
• 3 實驗結果29-51
• 3.1 EIF5A2與肝癌細胞ROS相關基因的聯(lián)系29-30
• 3.2 EIF5A2在肝癌組織中的表達情況及其與預后的關系30-35
• 3.3 EIF5A2對肝癌細胞的侵襲轉移的調控作用35-37
• 3.4 GC7可降低胞內(nèi)ROS水平37-38
• 3.5 NAC對肝癌細胞的侵襲轉移能力的調控作用38-41
• 3.6 GC7逆轉EMT進程,阻斷EMT后,GC7對肝癌細胞侵襲轉移調控減弱41-45
• 3.6.1 GC7可逆轉肝癌細胞EMT進程41-43
• 3.6.2 阻斷EMT后,GC7對肝癌細胞侵襲轉移調控減弱43-45
• 3.6.3 WB驗證twist siRNA的轉染效率45
• 3.7 NAC逆轉EMT進程,阻斷EMT后,NAC對肝癌細胞侵襲轉移調控減弱45-51
• 3.7.1 NAC可逆轉肝癌細胞EMT進程45-48
• 3.7.2 阻斷EMT后,NAC對肝癌細胞侵襲轉移調控減弱48-50
• 3.7.3 WB驗證twist siRNA的轉染效率50-51
• 4 討論51-54
• 5 結論54-55
• 參考文獻55-61
• 綜述61-70
• 參考文獻66-70
• 個人簡介及碩士學習期間發(fā)表的論文70-71

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前3條

1 Shu-Bo Tian;Jian-Chun Yu;Yu-Qin Liu;Wei-Ming Kang;Zhi-Qiang Ma;Xin Ye;Chao Yan;;MiR-30b suppresses tumor migration and invasion by targeting EIF5A2 in gastric cancer[J];World Journal of Gastroenterology;2015年31期

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  本文關鍵詞：真核翻譯起始因子5A2（eIF5A2）通過活性氧相關通路調控肝癌細胞的侵襲和轉移，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：432646