本文關(guān)鍵詞：真核翻譯起始因子5A2（eIF5A2）通過(guò)活性氧相關(guān)通路調(diào)控肝癌細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：背景：肝細(xì)胞癌(hepatocellular carcinoma, HCC)是世界范圍內(nèi)最常見(jiàn)的惡性腫瘤之一,具有很高的發(fā)病率和死亡率,尤其是在東亞發(fā)展中國(guó)家。每年超過(guò)600000人死于肝細(xì)胞癌,且每年約有750000例新病例被診斷為肝細(xì)胞癌。肝細(xì)胞癌總體預(yù)后較差,總體5年生存率不到5%,這可能與術(shù)后的高轉(zhuǎn)移復(fù)發(fā)率有關(guān)。由于缺乏有效的治療方法,學(xué)者們致力于肝癌的侵襲和轉(zhuǎn)移等機(jī)制的研究,以尋找新的治療途徑。越來(lái)越多的研究表明,真核翻譯起始因子5A2 (eIF5A2)是腫瘤轉(zhuǎn)移侵襲過(guò)程中的一個(gè)關(guān)鍵潛在靶基因。活性氧(ROS)在癌細(xì)胞增殖和遷移中也作為信號(hào)分子發(fā)揮著重要作用。然而,eIF5A2和ROS之間的潛在機(jī)制尚不清楚。目的：用相關(guān)分子生物學(xué)技術(shù)分析eIF5A2基因和ROS在肝細(xì)胞癌的侵襲和轉(zhuǎn)移中的可能作用,探究eIF5A2調(diào)控肝癌細(xì)胞的侵襲轉(zhuǎn)移是否與ROS相關(guān)通路有關(guān),尋找肝細(xì)胞癌新的治療靶點(diǎn)。方法：選取90例肝癌患者的癌組織和癌旁組織,組成肝癌180點(diǎn)組織芯片,利用免疫組化技術(shù),檢測(cè)組織中的eIF5A2蛋白表達(dá)信息,并進(jìn)行生存統(tǒng)計(jì)分析,探究eIF5A2蛋白表達(dá)與患者預(yù)后的關(guān)系；用基因芯片技術(shù)探究GC7抑制eIF5A2的活性后,對(duì)肝細(xì)胞癌基因表達(dá)譜的改變,探究eIF5A2調(diào)控肝細(xì)胞癌的分子機(jī)制；用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)肝癌細(xì)胞在不同藥物條件下的ROS水平；用小RNA干擾技術(shù)對(duì)特定基因進(jìn)行抑制,沉默其基因表達(dá),阻斷eIF5A2基因的表達(dá),為后續(xù)實(shí)驗(yàn)提供細(xì)胞模型；用transwell侵襲法和劃痕愈合實(shí)驗(yàn)檢測(cè)肝癌在不同藥物條件下侵襲轉(zhuǎn)移能力的改變,觀察eIF5A2和ROS水平改變對(duì)肝癌細(xì)胞侵襲和轉(zhuǎn)移能力是否有調(diào)控作用；用Western blot和免疫熒光技術(shù)檢測(cè)不同藥物條件下肝癌的上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化(EMT)蛋白標(biāo)志物的表達(dá)信息和siRNA干擾效率,探究eIF5A2是否與肝癌細(xì)胞的EMT相關(guān)。結(jié)果：基因芯片結(jié)果分析表明,GC7抑制eIF5A2后引起ROS相關(guān)基因的表達(dá)水平下調(diào)；肝癌組織的免疫組化結(jié)果顯示,eIF5A2在癌組織中的表達(dá)顯著高于癌旁組織,Kaplan-Meier生存曲線顯示eIF5A2表達(dá)的高低與總生存數(shù)相關(guān),與預(yù)后密切相關(guān)；流式細(xì)胞術(shù)分析發(fā)現(xiàn),6種肝癌細(xì)胞系在GC7抑制eIF5A2后均能使胞內(nèi)ROS水平降低；Transwell實(shí)驗(yàn)和劃痕愈合實(shí)驗(yàn)顯示,抑制eIF5A2后肝癌細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移能力顯著降低；GC7作用之后,肝癌細(xì)胞胞內(nèi)的ROS水平降低；用NAC阻斷ROS后,肝癌的侵襲和轉(zhuǎn)移能力也顯著降低,再加入GC7作用之后,GC7不能進(jìn)一步抑制肝癌的侵襲轉(zhuǎn)移能力；抑制eIF5A2和下調(diào)ROS水平可逆轉(zhuǎn)肝癌的EMT進(jìn)程；阻斷肝癌細(xì)胞EMT之后,GC7和NAC對(duì)肝癌細(xì)胞的侵襲轉(zhuǎn)移調(diào)控作用減弱。結(jié)論：真核翻譯起始因子eIF5A2可能通過(guò)ROS相關(guān)通路調(diào)控肝癌細(xì)胞的EMT和侵襲轉(zhuǎn)移。eIF5A2和ROS可能是肝癌侵襲轉(zhuǎn)移潛在的預(yù)測(cè)指標(biāo)和重要靶點(diǎn)。
【關(guān)鍵詞】：肝細(xì)胞癌 真核翻譯起始因子5A2(eIF5A2) 活性氧(ROS) 上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化(EMT) 侵襲 轉(zhuǎn)移 預(yù)后
【學(xué)位授予單位】：浙江大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R735.7
【目錄】：

• 致謝4-6
• 摘要6-8
• ABSTRACT8-10
• 英文縮略詞10-14
• 1 引言14-18
• 2 實(shí)驗(yàn)材料與方法18-29
• 2.1 主要材料和試劑18-19
• 2.1.1 細(xì)胞來(lái)源18
• 2.1.2 主要試劑18-19
• 2.2 主要儀器19-21
• 2.3 實(shí)驗(yàn)方法21-29
• 2.3.1 細(xì)胞培養(yǎng)21-22
• 2.3.2 流式細(xì)胞儀測(cè)定細(xì)胞內(nèi)ROS水平22
• 2.3.3 細(xì)胞總蛋白的提取與蛋白濃度測(cè)定22-23
• 2.3.4 Western Blot檢測(cè)不同蛋白在不同條件下表達(dá)水平的變化23-26
• 2.3.5 小RNA轉(zhuǎn)染26-27
• 2.3.6 Transwell法檢測(cè)肝癌細(xì)胞的侵襲能為的變化27-28
• 2.3.7 劃痕愈合實(shí)驗(yàn)檢測(cè)肝癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移能力的變化28
• 2.3.8 免疫熒光技術(shù)觀察肝癌細(xì)胞特定蛋白的定位及其表達(dá)水平的變化28-29
• 3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果29-51
• 3.1 EIF5A2與肝癌細(xì)胞ROS相關(guān)基因的聯(lián)系29-30
• 3.2 EIF5A2在肝癌組織中的表達(dá)情況及其與預(yù)后的關(guān)系30-35
• 3.3 EIF5A2對(duì)肝癌細(xì)胞的侵襲轉(zhuǎn)移的調(diào)控作用35-37
• 3.4 GC7可降低胞內(nèi)ROS水平37-38
• 3.5 NAC對(duì)肝癌細(xì)胞的侵襲轉(zhuǎn)移能力的調(diào)控作用38-41
• 3.6 GC7逆轉(zhuǎn)EMT進(jìn)程,阻斷EMT后,GC7對(duì)肝癌細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移調(diào)控減弱41-45
• 3.6.1 GC7可逆轉(zhuǎn)肝癌細(xì)胞EMT進(jìn)程41-43
• 3.6.2 阻斷EMT后,GC7對(duì)肝癌細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移調(diào)控減弱43-45
• 3.6.3 WB驗(yàn)證twist siRNA的轉(zhuǎn)染效率45
• 3.7 NAC逆轉(zhuǎn)EMT進(jìn)程,阻斷EMT后,NAC對(duì)肝癌細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移調(diào)控減弱45-51
• 3.7.1 NAC可逆轉(zhuǎn)肝癌細(xì)胞EMT進(jìn)程45-48
• 3.7.2 阻斷EMT后,NAC對(duì)肝癌細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移調(diào)控減弱48-50
• 3.7.3 WB驗(yàn)證twist siRNA的轉(zhuǎn)染效率50-51
• 4 討論51-54
• 5 結(jié)論54-55
• 參考文獻(xiàn)55-61
• 綜述61-70
• 參考文獻(xiàn)66-70
• 個(gè)人簡(jiǎn)介及碩士學(xué)習(xí)期間發(fā)表的論文70-71

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前3條

1 Shu-Bo Tian;Jian-Chun Yu;Yu-Qin Liu;Wei-Ming Kang;Zhi-Qiang Ma;Xin Ye;Chao Yan;;MiR-30b suppresses tumor migration and invasion by targeting EIF5A2 in gastric cancer[J];World Journal of Gastroenterology;2015年31期

2 孟慶彬;于健春;康維明;馬志強(qiáng);周立;葉欣;曹戰(zhàn)江;田樹(shù)波;;小干擾RNA抑制真核翻譯起始因子5A2對(duì)MKN28胃癌細(xì)胞惡性生物學(xué)行為的影響[J];中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院學(xué)報(bào);2014年05期

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  本文關(guān)鍵詞：真核翻譯起始因子5A2（eIF5A2）通過(guò)活性氧相關(guān)通路調(diào)控肝癌細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：432646