本文關(guān)鍵詞：EPO通過Akt通路促進(jìn)膠質(zhì)母細(xì)胞瘤體外快速增殖的作用研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的本研究擬通過膠質(zhì)母細(xì)胞瘤的體外實(shí)驗(yàn),研究促紅細(xì)胞生成素(erythropoietin,EPO)是否存在促進(jìn)膠質(zhì)母細(xì)胞瘤快速增殖的作用,并探討AKT信號(hào)通路和細(xì)胞周期關(guān)鍵蛋白CyclinD1表達(dá)的調(diào)節(jié)是否為其關(guān)鍵的作用靶點(diǎn)。方法本研究采用膠質(zhì)母細(xì)胞瘤U87細(xì)胞株,在體外成功培養(yǎng)后分為對(duì)照組、EPO處理組及EPO+蛋白激酶B(Protein Kinase B,Akt)抑制劑組。EPO處理組:在U87細(xì)胞的培養(yǎng)基中加入EPO(0.1U/ml)處理7天;對(duì)照組:用等體積PBS替代EPO;EPO+Akt抑制劑組:U87細(xì)胞的培養(yǎng)基中同時(shí)加入EPO(0.1U/ml)及Akt抑制劑(81.3μM)共處理7天。采用Cell Counting Kit-8(CCK-8)法測(cè)生長(zhǎng)曲線、細(xì)胞倍增時(shí)間和克隆形成檢測(cè)各組細(xì)胞增殖速度,通過以上檢測(cè)EPO對(duì)膠質(zhì)母細(xì)胞瘤U87細(xì)胞株增殖的影響;采用反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)PCR(Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction,RT-PCR)、蛋白質(zhì)印跡(Western blotting,WB)和細(xì)胞免疫熒光法(immunofluorescence,IF)測(cè)定CyclinD1的mRNA和蛋白質(zhì)表達(dá)變化,通過以上檢測(cè)EPO對(duì)膠質(zhì)母細(xì)胞瘤中細(xì)胞周期關(guān)鍵蛋白CyclinD1表達(dá)的影響;采用流式細(xì)胞儀檢測(cè)EPO對(duì)膠質(zhì)母細(xì)胞瘤U87細(xì)胞株細(xì)胞增殖周期的影響。結(jié)果與對(duì)照組相比,EPO處理組中U87細(xì)胞生長(zhǎng)速度明顯增快(P生長(zhǎng)曲線3天/5天/7天=0.020/0.028/0.007,P倍增時(shí)間=0.0269,P克隆形成=0.0010),細(xì)胞中CyclinD1 mRNA及蛋白的表達(dá)水平均較對(duì)照組明顯升高(PRT-PCR=0.0186,P P-Akt=0.0020,Pβ-Cantenin=0.0026,P CyclinD1=0.0022,PIF=0.0099),流式細(xì)胞儀檢測(cè)發(fā)現(xiàn)U87細(xì)胞的增殖指數(shù)也明顯升高(P=0.0028);與EPO處理組相比,EPO+Akt抑制劑組細(xì)胞CyclinD1 mRNA及蛋白的表達(dá)水平明顯降低(PRT-PCR=0.0029,P P-Akt0.0001,Pβ-Cantenin=0.0003,P CyclinD10.0001,PIF=0.0007),細(xì)胞增殖指數(shù)則有顯著下降(P=0.0036),同時(shí)細(xì)胞增殖能力和速度較EPO處理組顯著降低(P生長(zhǎng)曲線3天/5天/7天=0.000/0.001/0.000,P倍增時(shí)間=0.0010,P克隆形成=0.0017)。結(jié)論本研究發(fā)現(xiàn)EPO可顯著促進(jìn)膠質(zhì)母細(xì)胞瘤的體外增殖,上調(diào)細(xì)胞周期關(guān)鍵蛋白CyclinD1的表達(dá),加快細(xì)胞增殖周期可能是重要的分子機(jī)制。
【關(guān)鍵詞】：EPO 膠質(zhì)母細(xì)胞瘤 細(xì)胞周期 增殖 蛋白激酶B抑制劑
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R739.4
【目錄】：

• 英漢縮略語名詞對(duì)照4-6
• 中文摘要6-8
• 英文摘要8-10
• 前言10-15
• 參考文獻(xiàn)12-15
• 第一部分 促紅細(xì)胞生成素在膠質(zhì)母細(xì)胞瘤細(xì)胞快速增殖中的作用研究15-30
• 1 材料與方法15-22
• 2 結(jié)果22-25
• 3 討論25-27
• 4 小結(jié)27-28
• 參考文獻(xiàn)28-30
• 第二部分EPO通過Akt通路調(diào)節(jié)Cyclin D1表達(dá)促進(jìn)膠質(zhì)母細(xì)胞瘤體外快速增殖的研究30-51
• 1 材料與方法31-39
• 2 結(jié)果39-46
• 3 討論46-47
• 4 小結(jié)47-48
• 參考文獻(xiàn)48-51
• 全文總結(jié)51-53
• 文獻(xiàn)綜述：促紅細(xì)胞生成素在腫瘤發(fā)展中的相關(guān)研究53-60
• 參考文獻(xiàn)56-60
• 致謝60-61
• 攻讀學(xué)位期間的研究成果及發(fā)表的學(xué)術(shù)論文目錄61

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  本文關(guān)鍵詞：EPO通過Akt通路促進(jìn)膠質(zhì)母細(xì)胞瘤體外快速增殖的作用研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：431700