本文關(guān)鍵詞：崗田酸聯(lián)合順鉑對(duì)人肺腺癌A549細(xì)胞增殖和凋亡的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：研究背景:過(guò)去三十年,我國(guó)肺癌患者死亡率大幅度攀升。未來(lái)十年,我國(guó)肺癌病人數(shù)可能成為世界第一,肺癌的預(yù)防和治療刻不容緩。傳統(tǒng)上肺癌的治療分為:化學(xué)治療、放射治療和外科治療。其中,化療為90%以上肺癌患者需接受的治療方法,臨床上順鉑是最常用的化療藥物。近年以來(lái),隨著受體化療耐藥性的增強(qiáng),鉑類化療效果不理想。故尋找高效、低毒的藥物來(lái)聯(lián)合順鉑以增強(qiáng)化療效果。本文選取海洋藻毒素崗田酸與傳統(tǒng)老藥順鉑,探討兩藥單獨(dú)及聯(lián)合對(duì)人肺腺癌A549細(xì)胞增殖的影響,分析兩藥相互作用關(guān)系并初步探究誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的機(jī)制,以期為尋找臨床化療調(diào)節(jié)劑提供新的理論依據(jù)。研究方法:1.MTT法檢測(cè)細(xì)胞增殖抑制率,分析順鉑、崗田酸及兩藥聯(lián)合對(duì)A549細(xì)胞增殖的影響。金正均公式分析崗田酸與順鉑兩藥在抑制A549細(xì)胞增殖上的相互關(guān)系。2.臺(tái)盼藍(lán)拒染實(shí)驗(yàn)進(jìn)行活細(xì)胞數(shù)量的測(cè)定,透射電鏡觀察、倒置相差顯微鏡觀察、Giemsa染色法、吖啶橙染色法觀察藥物對(duì)A549細(xì)胞形態(tài)學(xué)影響。3.瓊脂糖凝膠電泳法、考馬斯亮藍(lán)G250染色法檢測(cè)藥物對(duì)A549細(xì)胞遺傳物質(zhì)DNA和胞內(nèi)蛋白的影響。4.熒光分光光度法測(cè)定ROS含量和線粒體去極化,倒置相差熒光顯微鏡觀察線粒體膜電位變化,MTT檢測(cè)外源Ca2+對(duì)藥物處理下A549細(xì)胞存活率的影響。研究結(jié)果:1.MTT實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:一定濃度范圍內(nèi),崗田酸和順鉑對(duì)A549細(xì)胞的增殖均存在抑制作用,抑制作用隨著時(shí)間延長(zhǎng)和劑量升高而加強(qiáng)。雙藥聯(lián)合對(duì)細(xì)胞增殖產(chǎn)生抑制,抑制效果好于單藥作用,聯(lián)合作用也呈現(xiàn)出時(shí)間和劑量依賴性抑制。金正均公式計(jì)算結(jié)果顯示:崗田酸聯(lián)合順鉑處理A549細(xì)胞,崗田酸與順鉑表現(xiàn)出相加或協(xié)同的作用效果。2.臺(tái)盼藍(lán)拒染實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:經(jīng)20ng/ml崗田酸、1μg/ml順鉑、20ng/ml崗田酸+1μg/ml順鉑處理A549細(xì)胞后,活細(xì)胞數(shù)目呈現(xiàn)時(shí)間依賴性減少,雙藥聯(lián)合作用效果明顯好于單藥。形態(tài)學(xué)觀察結(jié)果顯示:20ng/ml崗田酸、1μg/ml順鉑、20ng/ml崗田酸+1μg/ml順鉑處理A549細(xì)胞48h后,細(xì)胞間接觸消失,細(xì)胞形態(tài)變圓,細(xì)胞體積縮小,細(xì)胞內(nèi)染色質(zhì)凝集,細(xì)胞空泡化嚴(yán)重,細(xì)胞周圍密布凋亡小體、部分細(xì)胞破碎解體,雙藥聯(lián)合細(xì)胞凋亡現(xiàn)象比單藥更嚴(yán)重。3.瓊脂糖凝膠電泳結(jié)果顯示:20ng/ml崗田酸、1μg/ml順鉑、20ng/ml崗田酸+1μg/ml順鉑處理A549細(xì)胞48h后,DNA受損出現(xiàn)階梯狀光亮條帶,聯(lián)合處理組DNA條帶更長(zhǎng)、更亮,說(shuō)明藥物作用下A549細(xì)胞發(fā)生凋亡�？捡R斯亮藍(lán)G250染色結(jié)果顯示:藥物作用下A549細(xì)胞內(nèi)總蛋白含量降低,藥物聯(lián)合處理組蛋白含量是低于順鉑處理組和崗田酸處理組,聯(lián)合處理組與對(duì)照相比具有顯著性差異。4.藥物引起A549細(xì)胞凋亡可能是通過(guò)ROS、Ca2+、線粒體參與的胞內(nèi)信號(hào)通路。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:藥物作用下細(xì)胞內(nèi)ROS含量升高,添加外源Ca2+能加劇細(xì)胞凋亡,線粒體膜電位有顯著性的變化。
【關(guān)鍵詞】：崗田酸 順鉑 A549細(xì)胞 聯(lián)合 細(xì)胞增殖 細(xì)胞凋亡
【學(xué)位授予單位】：曲阜師范大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R734.2
【目錄】：

• 摘要3-5
• Abstract5-10
• 第一部分 前言10-13
• 1.1 研究背景10-11
• 1.1.1 肺癌的危害和現(xiàn)狀10
• 1.1.2 肺癌的治療及前景10-11
• 1.2 研究的目的和意義11-13
• 第二部分 實(shí)驗(yàn)儀器與試劑13-15
• 2.1 實(shí)驗(yàn)材料13
• 2.1.1 實(shí)驗(yàn)采用的細(xì)胞系13
• 2.1.2 實(shí)驗(yàn)藥物13
• 2.2 主要的藥品13
• 2.3 主要的實(shí)驗(yàn)儀器13-15
• 第三部分 基礎(chǔ)準(zhǔn)備實(shí)驗(yàn)15-19
• 3.1 準(zhǔn)備實(shí)驗(yàn)15-17
• 3.2 基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)17-19
• 3.2.1 細(xì)胞復(fù)蘇17
• 3.2.2 細(xì)胞傳代17-18
• 3.2.3 細(xì)胞凍存18-19
• 第四部分MTT實(shí)驗(yàn)檢測(cè)單藥及雙藥聯(lián)合對(duì)A549細(xì)胞增殖影響19-28
• 4.1 藥品的配制19-20
• 4.1.1 順鉑的配制19
• 4.1.2 崗田酸的配制19
• 4.1.3 MTT工作液19-20
• 4.2 實(shí)驗(yàn)方法20-21
• 4.2.1 MTT實(shí)驗(yàn)檢測(cè)順鉑對(duì)A549細(xì)胞增殖抑制率20
• 4.2.2 MTT實(shí)驗(yàn)檢測(cè)崗田酸對(duì)A549細(xì)胞增殖抑制率20
• 4.2.3 MTT實(shí)驗(yàn)檢測(cè)崗田酸聯(lián)合順鉑對(duì)A549細(xì)胞增殖抑制率20-21
• 4.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果21-27
• 4.3.1 MTT實(shí)驗(yàn)檢測(cè)順鉑對(duì)A549細(xì)胞增殖抑制率21-23
• 4.3.2 MTT實(shí)驗(yàn)檢測(cè)崗田酸對(duì)A549細(xì)胞增殖抑制率23-24
• 4.3.3 MTT實(shí)驗(yàn)檢測(cè)崗田酸聯(lián)合順鉑對(duì)A549細(xì)胞的增殖抑制率24-27
• 4.4 討論與分析27-28
• 第五部分 藥物作用下A549細(xì)胞數(shù)量及顯微形態(tài)的變化28-36
• 5.1 藥品的配制28
• 5.1.1 臺(tái)盼藍(lán)染液28
• 5.1.2 Giemsa染液28
• 5.1.3 吖叮橙染液28
• 5.2 實(shí)驗(yàn)方法28-30
• 5.2.1 臺(tái)盼藍(lán)染色檢測(cè)藥物作用下A549細(xì)胞數(shù)量的變化28-29
• 5.2.2 倒置相差顯微鏡下觀察藥物作用下A549細(xì)胞形態(tài)變化29
• 5.2.3 Giemsa染色觀察A549細(xì)胞在藥物處理下的形態(tài)變化29
• 5.2.4 吖叮橙染色觀察A549細(xì)胞在藥物處理下的核形態(tài)變化29-30
• 5.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果30-35
• 5.3.1 臺(tái)盼藍(lán)染色檢測(cè)藥物作用下A549細(xì)胞數(shù)量的變化30
• 5.3.2 倒置相差顯微鏡下觀察藥物作用下A549細(xì)胞形態(tài)變化30-32
• 5.3.3 Giemsa染色觀察A549細(xì)胞在藥物處理下的形態(tài)變化32-33
• 5.3.4 吖叮橙染色觀察A549細(xì)胞在藥物處理下的核形態(tài)變化33-35
• 5.4 分析與討論35-36
• 第六部分 藥物聯(lián)合作用對(duì)A549細(xì)胞亞顯微結(jié)構(gòu)的影響36-39
• 6.1 實(shí)驗(yàn)方法36
• 6.2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果36-38
• 6.2.1 細(xì)胞全貌變化36-37
• 6.2.2 細(xì)胞膜及核變化37-38
• 6.3 討論與分析38-39
• 第七部分 藥物聯(lián)合作用下A549細(xì)胞遺傳物質(zhì)DNA的變化39-44
• 7.1 藥品的配制39-41
• 7.1.1 蛋白酶K（10mg/ml）39
• 7.1.2 乙酸鈉（NaAc, 3mol/l）39
• 7.1.3 Rnase（10mg/ml，無(wú)Dnase）39
• 7.1.4 10% SDS39-40
• 7.1.5 EDTA（0.5mol/l, PH=8.0）40
• 7.1.6 TE緩沖液（PH=8.0）40
• 7.1.7 50×TAE緩沖液40-41
• 7.1.8 6×Loading Buffer41
• 7.1.9 DNA裂解液41
• 7.2 實(shí)驗(yàn)方法41-42
• 7.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果42-43
• 7.4 討論與分析43-44
• 第八部分 藥物作用下A549細(xì)胞總蛋白含量的變化44-48
• 8.1 藥品的配制44-45
• 8.1.1 PMSF（10mmol/l）44
• 8.1.2 細(xì)胞裂解液44
• 8.1.3 考馬斯亮藍(lán)G250染液44
• 8.1.4 0.1mg/ml牛血清白蛋白（BSA）44-45
• 8.2 實(shí)驗(yàn)方法45-46
• 8.2.1 細(xì)胞總蛋白的提取45
• 8.2.2 蛋白含量的測(cè)定45-46
• 8.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果46-47
• 8.3.1 蛋白標(biāo)準(zhǔn)曲線46
• 8.3.2 藥物作用后細(xì)胞總蛋白的檢測(cè)46-47
• 8.4 討論與分析47-48
• 第九部分 藥物作用下細(xì)胞凋亡機(jī)制探討48-56
• 9.1 藥品配制48-49
• 9.1.1 Rhodamine 12348
• 9.1.2 外源Ca2+48-49
• 9.2 實(shí)驗(yàn)方法49-50
• 9.2.1 活性氧試劑盒檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)活性氧水平49
• 9.2.2 外源型Ca2+對(duì)藥物作用下A549細(xì)胞凋亡的影響49-50
• 9.2.3 Rhodamine 123檢測(cè)線粒體膜電位的變化50
• 9.2.4 Jc-1 試劑盒檢測(cè)線粒體去極化50
• 9.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果50-54
• 9.3.1 活性氧試劑盒檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)活性氧水平50-51
• 9.3.2 外源型Ca2+對(duì)藥物作用下A549細(xì)胞凋亡的影響51-53
• 9.3.3 Rhodamine 123檢測(cè)線粒體膜電位的變化53-54
• 9.3.4 Jc-1 試劑盒檢測(cè)線粒體去極化54
• 9.4 討論與分析54-56
• 第十部分 結(jié)論與展望56-57
• 10.1 結(jié)論56
• 10.2 展望56-57
• 附錄57-58
• 參考文獻(xiàn)58-64
• 致謝64

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本文編號(hào)：430404