本文關(guān)鍵詞：IP6對(duì)裸鼠上皮性卵巢癌移植瘤的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:卵巢癌是最常見的三大婦科惡性腫瘤之一,因?yàn)樵诮馄式Y(jié)構(gòu)上卵巢接近于盆腔最深部,早期的病變不易被察覺,而一旦出現(xiàn)了臨床癥狀,已多屬晚期。其中上皮性卵巢癌比例最高,達(dá)90%,近年來,隨著醫(yī)學(xué)的進(jìn)步,盡管在全面腫瘤細(xì)胞減滅術(shù)聯(lián)合化療方面醫(yī)療技術(shù)較前有了很大的提高,使得卵巢生殖細(xì)胞腫瘤等類別生存率較前有了大幅提高,但上皮性癌的5年生存率卻未見明顯改善,仍停留在20%~30%,一直處于死亡率最高、預(yù)后最差的婦科惡性腫瘤的首位。目前,仍以鉑類為基礎(chǔ)的聯(lián)合化療作為手術(shù)治療卵巢癌的主要輔助方法,但是化療藥物在心理及生理上給患者所帶來的一系列不良反應(yīng),一定程度上影響了癌癥的預(yù)后。因此尋找一種既可以降低毒性而又能提高療效的治療方法至關(guān)重要。近年來,科學(xué)家在對(duì)膳食纖維的研究過程中發(fā)現(xiàn)了一種物質(zhì)——肌醇六磷酸(inositol hexaphosphate,IP6)——對(duì)于腫瘤有著很大的防治作用。美國(guó)馬里蘭大學(xué)的Abulkalam M.Shamsuddin博士與美國(guó)國(guó)家癌癥研究院的研究員們經(jīng)過多年努力,發(fā)現(xiàn)IP6具有防治多種疾病的功效。它能抑制腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng),減小癌灶體積;抗氧化,抑制并殺死自由基;防止生成腎結(jié)石;降低血脂濃度;保護(hù)心肌細(xì)胞免于心臟病發(fā)造成猝死;防止動(dòng)脈發(fā)生硬化等。大量文獻(xiàn)報(bào)道,IP6可以通過調(diào)節(jié)細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路,或促進(jìn)或抑制某些基因及蛋白的表達(dá)來發(fā)揮抗癌作用。但是IP6須與肌醇結(jié)合后,才可達(dá)到其最佳療效,因IP6與肌醇作用可以產(chǎn)生IP3,從而進(jìn)一步發(fā)揮抗腫瘤作用。目前已有其對(duì)大腸癌、結(jié)腸癌、肝癌、前列腺癌、乳腺癌等抑瘤作用的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的相關(guān)研究及報(bào)道,并取得了顯著療效。但I(xiàn)P 6聯(lián)合肌醇能否在卵巢癌的治療中發(fā)揮作用,目前國(guó)內(nèi)外并未見相關(guān)報(bào)道,對(duì)此我們尚不清楚。本課題研究的主要目的就是通過觀察IP6聯(lián)合肌醇及其與順鉑聯(lián)用對(duì)人上皮性卵巢癌裸鼠皮下移植瘤的影響,進(jìn)一步分析IP6聯(lián)合肌醇對(duì)上皮性卵巢癌生長(zhǎng)的抑制作用及其對(duì)凋亡相關(guān)蛋白Bax及基因mi RNA-21表達(dá)的影響,探討IP6聯(lián)合肌醇誘導(dǎo)上皮性卵巢癌凋亡的作用機(jī)理。方法:1細(xì)胞培養(yǎng):運(yùn)用常規(guī)細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù),培養(yǎng)人上皮性卵巢癌細(xì)胞株SKOV3,用來建立裸鼠皮下移植瘤模型。2裸鼠皮下移植瘤模型的建立及實(shí)驗(yàn)分組:選取4-6周齡,重16-18g的BALB/c Nude雌性裸小鼠,飼養(yǎng)于SPF級(jí)環(huán)境中備用。選取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的SKOV3細(xì)胞,消化,制成單細(xì)胞懸液,濃度大約為2.5×107個(gè)/ml,于無菌環(huán)境中接種在裸鼠皮下,每只裸鼠接種0.2ml細(xì)胞懸液(約合細(xì)胞數(shù)5×106個(gè)/只)(Fig.1)。接種5天后,選取移植瘤生長(zhǎng)良好,直徑在3-5mm的裸鼠進(jìn)行隨機(jī)分組(Fig.2),每組均設(shè)六只,分別為對(duì)照組,IP6+肌醇組,順鉑組及IP6+肌醇聯(lián)合順鉑組(聯(lián)合用藥組)。3實(shí)驗(yàn)用藥的制備:實(shí)驗(yàn)所需的所有藥物均用0.9%的氯化鈉溶解,現(xiàn)用現(xiàn)配。4給藥方法:IP6+肌醇組按照300mg/kg的濃度予以灌胃,每天一次,連續(xù)28天;順鉑組予以3mg/kg/d腹腔注射,連續(xù)7天;對(duì)照組每天分別予以同實(shí)驗(yàn)組相同劑量的生理鹽水灌胃及腹腔注射;聯(lián)合用藥組則為IP6+肌醇300mg/kg灌胃,同時(shí)予以3mg/kg/d順鉑腹腔注射。5裸鼠重量及移植瘤重量及體積的測(cè)量:實(shí)驗(yàn)開始每天觀察裸鼠一般狀況,包括精神狀態(tài)、進(jìn)食水及排便情況等,分別于用藥前及用藥后每周稱量裸鼠的重量并測(cè)量皮下移植瘤的最長(zhǎng)徑線(a)及最短徑線(b),單位為mm,并按照公式V(mm3)=πab2/6計(jì)算移植瘤的體積。于停藥后24小時(shí)終止觀察,用脫頸法處死裸鼠,剝?nèi)∑は铝鼋M織,稱重,并計(jì)算腫瘤抑制率IR(%)=(1-治療組腫瘤平均體積/對(duì)照組腫瘤平均體積)×100%。6免疫組織化學(xué)染色檢測(cè)裸鼠皮下移植瘤組織中Bax蛋白的表達(dá)情況:取經(jīng)4%多聚甲醛固定的移植瘤組織(小于0.5cm×0.5cm×0.1cm)進(jìn)行免疫組織化學(xué)染色,研究移植瘤組織中促凋亡蛋白Bax的表達(dá)。7 RT-PCR技術(shù)檢測(cè)移植瘤組織中mi RNA-21的表達(dá):取保存于-80℃冰箱未經(jīng)任何試劑處理的移植瘤組織,用RT-PCR技術(shù)檢測(cè)其中mi RNA-21的表達(dá)。8統(tǒng)計(jì)學(xué)方法:采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件處理實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。重復(fù)測(cè)量數(shù)據(jù)用重復(fù)測(cè)量方差分析,多樣本均數(shù)間比較采用單因素方差分析,兩樣本均數(shù)間比較用t檢驗(yàn),實(shí)驗(yàn)結(jié)果均以(?)±S表示,等級(jí)資料采用K-W-H秩和檢驗(yàn),以P0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果:1實(shí)驗(yàn)過程順利。細(xì)胞培養(yǎng)過程瘤細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好,取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞成功建立裸鼠皮下移植瘤模型。實(shí)驗(yàn)進(jìn)行中各組裸鼠的一般狀況,主要為精神狀態(tài),用藥開始各組均較用藥前精神變差,但隨著用藥時(shí)間的延長(zhǎng),除順鉑組外均較用藥開始時(shí)有所好轉(zhuǎn),實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)各組由好變差依次為:對(duì)照組、IP6+肌醇組、聯(lián)合用藥組、順鉑組。順鉑組及聯(lián)合用藥組在實(shí)驗(yàn)開始時(shí)體重有所下降,但隨著給藥時(shí)間的延長(zhǎng),最終各組的裸鼠體重較前均有所增長(zhǎng),順鉑組較對(duì)照組增長(zhǎng)緩慢,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),其余兩組與對(duì)照組無明顯差異。移植瘤體積各組亦是逐漸增長(zhǎng),各治療組體積均明顯小于對(duì)照組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,且聯(lián)合用藥組體積明顯小于兩單獨(dú)用藥組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。實(shí)驗(yàn)第29天測(cè)得移植瘤重量,各治療組均小于對(duì)照組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,且聯(lián)合用藥組瘤重明顯小于兩單獨(dú)用藥組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。2移植瘤組織中Bax蛋白的表達(dá)情況:IP6+肌醇組、順鉑組及聯(lián)合用藥組移植瘤組織中Bax蛋白表達(dá)量均高于對(duì)照組,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義且聯(lián)合用藥組明顯高于IP6+肌醇組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。而聯(lián)合用藥組與順鉑組間無明顯差異。3移植瘤組織中mi RNA-21的表達(dá)情況:IP6+肌醇組及聯(lián)合用藥組移植瘤組織中mi RNA-21表達(dá)量均低于對(duì)照組,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),而順鉑組與對(duì)照組相比無明顯差異。結(jié)論:1 IP6+肌醇組移植瘤的體積及重量小于對(duì)照組,且差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,說明IP6+肌醇對(duì)上皮性卵巢癌具有抑制作用。并且聯(lián)合用藥組瘤組織的體積及重量均明顯小于順鉑組,說明二者具有協(xié)同的抗癌作用。2 IP6+肌醇組及聯(lián)合用藥組對(duì)裸鼠精神狀態(tài)等一般情況以及對(duì)裸鼠體重的影響均小于順鉑組,表明IP6具有低毒副作用的特點(diǎn),且聯(lián)合用藥能減輕化療副反應(yīng)。3 IP6+肌醇組、順鉑組及聯(lián)合用藥組移植瘤組織中Bax蛋白表達(dá)均高于對(duì)照組,聯(lián)合用藥組高于IP6+肌醇組,且差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,表明其可能通過增加促凋亡蛋白Bax的表達(dá)量促進(jìn)癌細(xì)胞的凋亡而發(fā)揮抗癌作用,但二者在增加Bax蛋白表達(dá)方面是否有協(xié)同作用還需進(jìn)一步研究。4 IP6+肌醇組及聯(lián)合用藥組移植瘤組織中mi RNA-21表達(dá)均低于對(duì)照組,且差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,表明其可能通過下調(diào)mi RNA-21的表達(dá)來發(fā)揮抑瘤作用。
【關(guān)鍵詞】：IP6+肌醇 卵巢癌 SKOV3 Bax miRNA-21
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R737.31
【目錄】：

• 中文摘要4-8
• 英文摘要8-13
• 前言13-14
• 材料與方法14-21
• 結(jié)果21-23
• 附圖23-28
• 附表28-33
• 討論33-35
• 結(jié)論35-36
• 參考文獻(xiàn)36-39
• 綜述 miRNA-21在惡性腫瘤中作用的研究進(jìn)展39-47
• 參考文獻(xiàn)42-47
• 致謝47-48
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷48

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中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 呂艷茹;IP6對(duì)裸鼠上皮性卵巢癌移植瘤的影響[D];河北醫(yī)科大學(xué);2016年

  本文關(guān)鍵詞：IP6對(duì)裸鼠上皮性卵巢癌移植瘤的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

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本文編號(hào)：407803