腫瘤是一種病因復(fù)雜且異質(zhì)性很高的基因病,但又有一些共同特性,如瓦博格效應(yīng)(Warburg effect)以及對(duì)某些基因成癮。所謂基因成癮,包括癌基因成癮(Oncogene addiction)和非癌基因成癮(Non-oncogene addiction),即腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)和存活過(guò)度依賴于某個(gè)基因的現(xiàn)象,這種依賴性短期內(nèi)難以克服,如被迫終止往往導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞死亡。腺苷酸活化蛋白激酶(AMP-activated protein kinase,AMPK)是細(xì)胞的能量和營(yíng)養(yǎng)感受器,對(duì)細(xì)胞能量穩(wěn)態(tài)和代謝平衡的調(diào)節(jié)起關(guān)鍵性作用。傳統(tǒng)觀點(diǎn)認(rèn)為,AMPK是一個(gè)抑癌基因,在腫瘤發(fā)生早期可以通過(guò)代謝調(diào)控或穩(wěn)定p53、TET2、TSC2等抑癌基因的功能抑制腫瘤進(jìn)展。然而,隨著研究的深入,越來(lái)越多的證據(jù)表明,在多種腫瘤細(xì)胞中存在AMPK過(guò)表達(dá)或過(guò)度激活的現(xiàn)象,并且阻斷AMPK信號(hào)能夠顯著抑制該類腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)或引起腫瘤細(xì)胞死亡,提示腫瘤發(fā)生了 AMPK激酶成癮(非癌基因成癮)。對(duì)于這部分腫瘤,AMPK可能是一個(gè)極具潛力的治療靶點(diǎn)。但截至目前,這一觀點(diǎn)尚缺乏深入的研究和確鑿的實(shí)驗(yàn)證據(jù)。因此,本課題從分子、細(xì)胞水平以...

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【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第1章 引言
    1.1 腫瘤
    1.2 AMPK
    1.3 AMPK與腫瘤
第2章 材料與方法
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 實(shí)驗(yàn)細(xì)胞
        2.1.2 主要試劑及抗體
        2.1.3 主要儀器設(shè)備
        2.1.4 主要溶液配制
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 生物信息學(xué)分析
        2.2.2 MTS法檢測(cè)細(xì)胞活力
        2.2.3 siRNA轉(zhuǎn)染
        2.2.4 RNA抽提
        2.2.5 逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)
        2.2.6 實(shí)時(shí)熒光定量PCR (Realtime PCR)
        2.2.7 RNA測(cè)序(RNA-seq)
        2.2.8 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞死亡
        2.2.9 蛋白免疫印跡法(Western blot)
        2.2.10 Hela細(xì)胞皮下移植瘤裸鼠模型構(gòu)建及治療
        2.2.11 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
第3章 結(jié)果與分析
    3.1 AMPK在多種腫瘤細(xì)胞中表達(dá)上調(diào)或活化增強(qiáng)并維持細(xì)胞生存
    3.2 阻斷AMPK信號(hào)通路促進(jìn)腫瘤細(xì)胞死亡
    3.3 阻斷AMPK顯著抑制Hela裸鼠移植瘤的生長(zhǎng)
    3.4 阻斷AMPK促進(jìn)Caspase活化及其介導(dǎo)的細(xì)胞死亡
    3.5 AMPK阻斷顯著上調(diào)促凋亡蛋白BAD的表達(dá)
    3.6 敲減BAD抑制AMPK阻斷引起的腫瘤細(xì)胞死亡
    3.7 阻斷AMPK導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞中錯(cuò)誤折疊蛋白的水平升高
    3.8 阻斷AMPK增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞對(duì)26S蛋白酶體抑制劑誘導(dǎo)的細(xì)胞死亡的敏感性
    3.9 阻斷AMPK增強(qiáng)26S蛋白酶體抑制劑在小鼠體內(nèi)的抗腫瘤效果
第4章 討論
    4.1 BAD參與AMPK阻斷介導(dǎo)的細(xì)胞死亡
    4.2 AMPK參與腫瘤細(xì)胞蛋白穩(wěn)態(tài)調(diào)控
    4.3 靶向AMPK增強(qiáng)蛋白酶體抑制劑的抗腫瘤效果
第5章 結(jié)論與展望
參考文獻(xiàn)
致謝
作者簡(jiǎn)歷及攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文與研究成果



本文編號(hào)：4042013