目的：探討乳腺癌非激素依賴型逆轉(zhuǎn)為激素依賴型的機制途徑,為臨床上治療非激素依賴性乳腺癌提供理論依據(jù)。方法：(1)將外源性SOCS3基因通過慢病毒轉(zhuǎn)染法入導(dǎo)入非激素依賴型乳腺癌MDA-MB-231細胞,構(gòu)建SOCS3穩(wěn)轉(zhuǎn)乳腺癌細胞株,RT-PCR和免疫熒光檢測細胞中SOCS3 mRNA和蛋白表達。(2)集落形成實驗、MTT法觀察外源性SOCS3基因?qū)θ橄侔┘毎L的影響。(3)細胞粘附實驗、劃痕實驗和Boyden Chamber法觀察SOCS3基因?qū)θ橄侔┘毎掣�、遷移和侵襲能力的影響。(4)Western blot法檢測SOCS3對STAT3、Akt信號分子活性的影響及細胞周期蛋白(cyclinD1、p21)的表達變化；RT-PCR和Western blot分析檢測SOCS3對MAPK、c-fos、c-jun表達的影響。(5)用他莫昔芬治療攜帶SOCS3基因的乳腺癌細胞株,并和未攜帶SOCS3基因的乳腺癌細胞株進行生長速度、細胞凋亡等比較。結(jié)果：(1)構(gòu)建了穩(wěn)定的SOCS3轉(zhuǎn)染細胞模型；(2)SOCS3過表達細胞生長速度比正常細胞慢,具有顯著性差異；(3)SOCS3過表達細胞的粘附、遷移...

【文章頁數(shù)】：77 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
英文縮略詞表
引言
第一章 緒論
    1.1 乳腺癌簡介
        1.1.1 乳腺癌的特征
        1.1.2 乳腺癌的治療方法
        1.1.3 乳腺癌內(nèi)分泌治療簡介
        1.1.4 乳腺癌耐藥性簡介
    1.2 他莫昔芬簡介
    1.3 SOCS家族及SOCS3簡介
    1.4 SOCS3抑制細胞因子信號的分子機制
第二章 理論分析
    2.1 乳腺癌內(nèi)分泌治療產(chǎn)生耐藥性的機制分析
    2.2 SOCS3在疾病中的作用
        2.2.1 SOCS3在炎癥疾病中的作用
        2.2.2 SOCS3在肥胖病中的作用
        2.2.3 SOCS3在病毒感染性疾病中的作用
        2.2.4 SOCS3與生殖的關(guān)系
    2.3 SOCS3在惡性腫瘤中的作用
    2.4 構(gòu)建SOCS3過表達細胞株理論研究
        2.4.1 慢病毒法構(gòu)建SOCS3過表達細胞株
        2.4.2 SOCS3過表達細胞株篩選(雙重篩選)
        2.4.3 SOCS3過表達細胞株培養(yǎng)
    2.5 相關(guān)實驗原理
        2.5.1 細胞集落(克隆)形成實驗
        2.5.2 MTT實驗
        2.5.3 RT-PCR實驗
        2.5.4 蛋白免疫印記法(western blot)
        2.5.5 細胞粘附實驗
        2.5.6 細胞遷移(劃痕)實驗
        2.5.7 細胞侵襲(Boyden Chamber)實驗
第三章 實驗研究
    3.1 材料
        3.1.1 實驗材料
        3.1.2 樣本信息
        3.1.3 儀器設(shè)備
        3.1.4 試劑及耗材
        3.1.5 試劑配制
    3.2 實驗方法
        3.2.1 細胞培養(yǎng)
        3.2.2 SOCS3過表達乳腺癌細胞株的建立
        3.2.3 MTT檢測
        3.2.4 細胞克隆形成率檢測
        3.2.5 細胞粘附
        3.2.6 細胞遷移(劃痕實驗)
        3.2.7 細胞侵襲
        3.2.8 熒光定量PCR檢測相關(guān)基因mRNA水平變化
        3.2.9 免疫印跡檢測相關(guān)基因蛋白水平變化
第四章 數(shù)據(jù)處理與結(jié)果
    4.1 細胞培養(yǎng)
    4.2 SOCS3過表達乳腺癌細胞株的建立
    4.3 細胞增殖的MTT檢測
    4.4 細胞克隆形成能力檢測結(jié)果
    4.5 細胞粘附實驗結(jié)果
    4.6 細胞遷移(劃痕實驗)結(jié)果
    4.7 細胞侵襲結(jié)果
    4.8 熒光定量PCR檢測細胞相關(guān)基因MRNA的水平變化
    4.9 WESTERN BLOT檢測細胞相關(guān)基因蛋白水平的變化
    4.10 討論
第五章 結(jié)論
致謝
參考文獻
附錄A 攻讀碩士期間發(fā)表的論文
附錄B 其它需要說明的內(nèi)容



本文編號：4040780