研究目的:細(xì)胞周期中CDK2分子的異常激活可以引起多數(shù)腫瘤細(xì)胞持續(xù)增殖,因此,探討CDK2分子的調(diào)節(jié),有助于了解疾病發(fā)生的本質(zhì)。本研究旨在證實(shí)血清饑餓對(duì)CDK2蛋白下調(diào)的作用、評(píng)估其誘導(dǎo)的下調(diào)是否需要PI3K/AKT通路的參與,并探究CDK2蛋白通過(guò)自噬-溶酶體降解的分子機(jī)制。研究方法:1.應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞饑餓處理時(shí)的細(xì)胞周期變化;采用蛋白質(zhì)免疫印跡法檢測(cè)饑餓狀態(tài)下神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞和結(jié)直腸癌細(xì)胞的RB磷酸化水平以及CDK2蛋白;通過(guò)實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)檢測(cè)血清饑餓處理的細(xì)胞CDK2分子的mRNA水平。2.運(yùn)用蛋白質(zhì)免疫印跡法檢測(cè)饑餓處理時(shí)PI3K/AKT信號(hào)通路的分子水平,饑餓處理PIK3CA突變的結(jié)直腸癌細(xì)胞以及PI3K抑制劑、AKT抑制劑、mTOR抑制劑、蛋白質(zhì)合成抑制劑CHX處理神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞時(shí)CDK2蛋白的表達(dá)情況。3.采用蛋白質(zhì)免疫印跡法檢測(cè)饑餓狀態(tài)下加入蛋白酶抑制劑、自噬抑制劑和溶酶體抑制劑處理細(xì)胞后的CDK2蛋白的表達(dá)以及饑餓處理時(shí)自噬調(diào)節(jié)蛋白P62的表達(dá);構(gòu)建ATG7和Beclin-1自噬基因敲除的穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞系,并檢測(cè)饑餓、PI3K抑制劑、AKT抑制劑處理后的C...

【文章頁(yè)數(shù)】：88 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
abstract
中英文縮略詞對(duì)照表
緒論
第一部分 血清饑餓誘導(dǎo)細(xì)胞周期阻滯伴隨CDK2蛋白下調(diào)
    1.引言
    2.材料和方法
    3.結(jié)果
    4.討論
第二部分 PI3Kα/AKT^T308的抑制參與CDK2 蛋白的下調(diào)
    1.引言
    2.材料和方法
    3.結(jié)果
    4.討論
第三部分 抑制PI3Kα/AKT^T308通過(guò)P62/SQSTM1 介導(dǎo)CDK2 蛋白自噬-溶酶體降解
    1.引言
    2.材料和方法
    3.結(jié)果
    4.討論
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝
附錄(一) 綜述
    參考文獻(xiàn)
附錄(二) 發(fā)表論文目錄



本文編號(hào)：3976527