目的:結(jié)直腸癌肝轉(zhuǎn)移與腫瘤微環(huán)境關(guān)系密切,相互影響。轉(zhuǎn)移至肝臟的腸癌細(xì)胞需要建立起適合自身生長的微環(huán)境才能生存,同時肝臟微環(huán)境中的多種細(xì)胞和非細(xì)胞成分也促進(jìn)腫瘤生長。肝星狀細(xì)胞(HSC)是肝臟基質(zhì)中主要組成細(xì)胞之一,活化后的HSC可以分泌多種物質(zhì),包括豐富的細(xì)胞外基質(zhì)成分,肝細(xì)胞生長因子、軟骨寡聚基質(zhì)蛋白等,從而促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移。然而,HSC如何促進(jìn)腸癌細(xì)胞肝轉(zhuǎn)移的機(jī)制尚不十分清楚。因此本研究在建立腸癌肝轉(zhuǎn)移模型基礎(chǔ)上,探討肝臟微環(huán)境中HSC與腸癌細(xì)胞肝轉(zhuǎn)移之間的關(guān)系。研究方法:1、選取Caco2、RKO細(xì)胞采用脾臟注射(保脾法)法建立腸癌肝轉(zhuǎn)移模型,并分離出兩株腸癌肝轉(zhuǎn)移細(xì)胞系Caco2-H,RKO-H;2、腫瘤細(xì)胞的COL6A3基因mRNA的表達(dá)水平應(yīng)用RT-qPCR技術(shù);3、脂質(zhì)體介導(dǎo)siRNA轉(zhuǎn)染,沉默COL6A3基因表達(dá);4、細(xì)胞短期增殖能力(0、24、48、72小時)利用MTT檢測細(xì)胞活力方法測定;5、細(xì)胞遷移能力應(yīng)用Transwell法檢測;6、腸癌細(xì)胞長期增殖能力利用集落形成實(shí)驗(yàn)檢測;7、細(xì)胞與細(xì)胞外基質(zhì)粘附能力應(yīng)用細(xì)胞-細(xì)胞外基質(zhì)粘附實(shí)驗(yàn)檢測;8、細(xì)胞蛋白表達(dá)...

【文章頁數(shù)】：73 頁

【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

圖3.3Caco2-H、RKO-H發(fā)生上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化（EMT）

中國醫(yī)科大學(xué)博士學(xué)位論文8 A：種入400個細(xì)胞/孔，培養(yǎng)14天后收集集落，Caco2-H、RKO-H增殖能力明顯增加；B：3x104個Caco2、Caco2-H、RKO、RKO-H加入鋪好預(yù)制膠的孔板中，45分鐘后收集粘附細(xì)胞數(shù)目，顯示出Caco2-H、RKO-H粘附能力明顯增....

圖13.2COL6A3在Caco2-H、RKO-H細(xì)胞的裸鼠肝臟成瘤中高表達(dá)02COL6RKO-HN=3RKON=3

中國醫(yī)科大學(xué)博士學(xué)位論文25 A：（左側(cè)）兩個火山圖顯示Caco2-H與Caco2相比，RKO-H與RKO相比的差異mRNA表達(dá)，（右側(cè)）柱狀圖顯示兩組細(xì)胞差異mRNA改變數(shù)目；B（左側(cè)）韋恩圖顯示兩組測序結(jié)果分別下調(diào)/上調(diào)mRNA取交集，（右側(cè)）圖表顯示COL6A3差異顯著；C....

圖18.1腸癌肝轉(zhuǎn)移患者血漿中COL6A3蛋白表達(dá)升高1520re1520re20p<0.05B05101520NumberofCOL6Ascorepositiv

浞治狢OL6A3高表達(dá)和COL6A3低表達(dá)數(shù)據(jù)，用limma包進(jìn)行差異分析；將樣本依據(jù)IGSF10表達(dá)高低進(jìn)行分組后，利用coxph函數(shù)在各個臨床亞分類中進(jìn)行HR和p.value的計算；對COL6A3高低表達(dá)分組進(jìn)行生存曲線的繪制，對COL6A3高低表達(dá)分組、分期、年齡、性別進(jìn)行....

圖18.2免疫組化顯示COL6A3在肝轉(zhuǎn)移灶表達(dá)高于原發(fā)灶I(lǐng)HCScore:2IHCScore:0IHCScore:8IHCScore:0400x

中國醫(yī)科大學(xué)博士學(xué)位論文37 A：ELISA檢測肝轉(zhuǎn)移患者外周血COL6A3表達(dá)明顯高于無肝轉(zhuǎn)移患者，p<0.05。B:無遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移腸癌患者和肝轉(zhuǎn)移患者ROC曲線分析，曲線下AUC面積0.6654。18.2患者免疫組化結(jié)果顯示COL6A3在肝轉(zhuǎn)移灶表達(dá)高于原發(fā)灶30對病例納入標(biāo)準(zhǔn)：....

本文編號：3972895