目的:結直腸癌肝轉移與腫瘤微環(huán)境關系密切,相互影響。轉移至肝臟的腸癌細胞需要建立起適合自身生長的微環(huán)境才能生存,同時肝臟微環(huán)境中的多種細胞和非細胞成分也促進腫瘤生長。肝星狀細胞(HSC)是肝臟基質(zhì)中主要組成細胞之一,活化后的HSC可以分泌多種物質(zhì),包括豐富的細胞外基質(zhì)成分,肝細胞生長因子、軟骨寡聚基質(zhì)蛋白等,從而促進腫瘤細胞的侵襲和轉移。然而,HSC如何促進腸癌細胞肝轉移的機制尚不十分清楚。因此本研究在建立腸癌肝轉移模型基礎上,探討肝臟微環(huán)境中HSC與腸癌細胞肝轉移之間的關系。研究方法:1、選取Caco2、RKO細胞采用脾臟注射(保脾法)法建立腸癌肝轉移模型,并分離出兩株腸癌肝轉移細胞系Caco2-H,RKO-H;2、腫瘤細胞的COL6A3基因mRNA的表達水平應用RT-qPCR技術;3、脂質(zhì)體介導siRNA轉染,沉默COL6A3基因表達;4、細胞短期增殖能力(0、24、48、72小時)利用MTT檢測細胞活力方法測定;5、細胞遷移能力應用Transwell法檢測;6、腸癌細胞長期增殖能力利用集落形成實驗檢測;7、細胞與細胞外基質(zhì)粘附能力應用細胞-細胞外基質(zhì)粘附實驗檢測;8、細胞蛋白表達...

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【學位級別】：博士

【部分圖文】：

圖3.3Caco2-H、RKO-H發(fā)生上皮間質(zhì)轉化（EMT）

中國醫(yī)科大學博士學位論文8 A：種入400個細胞/孔，培養(yǎng)14天后收集集落，Caco2-H、RKO-H增殖能力明顯增加；B：3x104個Caco2、Caco2-H、RKO、RKO-H加入鋪好預制膠的孔板中，45分鐘后收集粘附細胞數(shù)目，顯示出Caco2-H、RKO-H粘附能力明顯增....

圖13.2COL6A3在Caco2-H、RKO-H細胞的裸鼠肝臟成瘤中高表達02COL6RKO-HN=3RKON=3

中國醫(yī)科大學博士學位論文25 A：（左側）兩個火山圖顯示Caco2-H與Caco2相比，RKO-H與RKO相比的差異mRNA表達，（右側）柱狀圖顯示兩組細胞差異mRNA改變數(shù)目；B（左側）韋恩圖顯示兩組測序結果分別下調(diào)/上調(diào)mRNA取交集，（右側）圖表顯示COL6A3差異顯著；C....

圖18.1腸癌肝轉移患者血漿中COL6A3蛋白表達升高1520re1520re20p<0.05B05101520NumberofCOL6Ascorepositiv

浞治狢OL6A3高表達和COL6A3低表達數(shù)據(jù)，用limma包進行差異分析；將樣本依據(jù)IGSF10表達高低進行分組后，利用coxph函數(shù)在各個臨床亞分類中進行HR和p.value的計算；對COL6A3高低表達分組進行生存曲線的繪制，對COL6A3高低表達分組、分期、年齡、性別進行....

圖18.2免疫組化顯示COL6A3在肝轉移灶表達高于原發(fā)灶IHCScore:2IHCScore:0IHCScore:8IHCScore:0400x

中國醫(yī)科大學博士學位論文37 A：ELISA檢測肝轉移患者外周血COL6A3表達明顯高于無肝轉移患者，p<0.05。B:無遠處轉移腸癌患者和肝轉移患者ROC曲線分析，曲線下AUC面積0.6654。18.2患者免疫組化結果顯示COL6A3在肝轉移灶表達高于原發(fā)灶30對病例納入標準：....

本文編號：3972895