黑色素瘤是一種惡性腫瘤,具有很強(qiáng)的轉(zhuǎn)移能力和極高的致死率。紫外線是黑色素瘤形成中最主要的外源性致癌因素。近年的研究表明,腫瘤的發(fā)展不是一個(gè)獨(dú)立事件,腫瘤與腫瘤微環(huán)境中間質(zhì)細(xì)胞的相互作用在腫瘤的發(fā)展中起著重要作用。外泌體是一種細(xì)胞主動(dòng)分泌的納米級(jí)囊泡,直徑約為50¹50 nm,具有脂質(zhì)雙層膜結(jié)構(gòu),可以從不同的細(xì)胞類型中釋放,內(nèi)含完整的m RNA、mi RNA、蛋白質(zhì)、脂質(zhì)等分子。由于腫瘤外泌體可以介導(dǎo)這些信息分子從腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移到正常間質(zhì)細(xì)胞中,并發(fā)揮多種促癌功能,因此腫瘤外泌體被認(rèn)為是致癌信息的細(xì)胞間傳遞介質(zhì),可以介導(dǎo)腫瘤細(xì)胞對(duì)腫瘤微環(huán)境的調(diào)控作用。成纖維細(xì)胞(MEF)是腫瘤微環(huán)境中主要的組成成分,大量研究表明,腫瘤微環(huán)境中的成纖維細(xì)胞通過分泌MMP2、MMP9進(jìn)行基質(zhì)重塑,有利于腫瘤進(jìn)展,但腫瘤細(xì)胞如何實(shí)現(xiàn)這一效果還未得到合理解釋。還有研究報(bào)道,高轉(zhuǎn)移性黑色素瘤細(xì)胞可以通過外泌體將其侵襲潛能傳遞給低轉(zhuǎn)移性的黑色素瘤細(xì)胞。由此,我們提出科學(xué)假設(shè):黑色素瘤細(xì)胞分泌的外泌體可能作為重要信息傳遞介質(zhì),將黑色素瘤細(xì)胞的侵襲潛能傳遞給MEF細(xì)胞,促進(jìn)MEF細(xì)胞MMP2、MMP...

【文章頁數(shù)】：61 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
縮略詞表
摘要
ABSTRACT
第一章 文獻(xiàn)綜述
    1.1 黑色素瘤
    1.2 黑色素瘤外泌體研究進(jìn)展
        1.2.1 黑色素瘤外泌體的特征
        1.2.2 黑色素瘤外泌體介導(dǎo)的轉(zhuǎn)移性傳遞
        1.2.3 黑色素瘤外泌體介導(dǎo)的血管生成
        1.2.4 黑色素瘤外泌體介導(dǎo)的免疫調(diào)節(jié)
        1.2.5 黑色素瘤外泌體介導(dǎo)的轉(zhuǎn)移前生態(tài)位形成
        1.2.6 黑色素瘤外泌體介導(dǎo)的耐藥性
    1.3 成纖維細(xì)胞在腫瘤進(jìn)展中的作用
        1.3.1 成纖維細(xì)胞參與的腫瘤發(fā)生
        1.3.2 成纖維細(xì)胞參與的腫瘤生長(zhǎng)
        1.3.3 成纖維細(xì)胞參與的腫瘤血管生成
        1.3.4 成纖維細(xì)胞參與的腫瘤侵襲遷移
        1.3.5 成纖維細(xì)胞參與的腫瘤免疫調(diào)節(jié)
        1.3.6 成纖維細(xì)胞參與的腫瘤耐藥
        1.3.7 成纖維細(xì)胞參與的抗腫瘤作用
        1.3.8 靶向成纖維細(xì)胞進(jìn)行腫瘤治療
        1.3.9 成纖維細(xì)胞參與黑色素瘤的進(jìn)展
    1.4 MMP2、MMP9 在細(xì)胞侵襲遷移中的作用
    1.5 結(jié)語
第二章 引言
    2.1 研究背景和意義
    2.2 研究?jī)?nèi)容
第三章 B16F10細(xì)胞外泌體的提取與鑒定
    3.1 實(shí)驗(yàn)材料及設(shè)備
        3.1.1 細(xì)胞培養(yǎng)
        3.1.2 實(shí)驗(yàn)試劑
        3.1.3 實(shí)驗(yàn)儀器
    3.2 實(shí)驗(yàn)方法
        3.2.1 超速離心法提取黑色素瘤細(xì)胞外泌體
        3.2.2 電鏡負(fù)染色觀察外泌體形態(tài)結(jié)構(gòu)
        3.2.3 粒度儀檢測(cè)外泌體粒徑分布
        3.2.4 BCA法測(cè)定蛋白濃度
        3.2.5 Western blot檢測(cè)外泌體標(biāo)志蛋白
    3.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.3.1 外泌體形態(tài)結(jié)構(gòu)
        3.3.2 外泌體粒徑分布
        3.3.3 外泌體濃度檢測(cè)
        3.3.4 外泌體標(biāo)志蛋白檢測(cè)
    3.4 討論
第四章 黑色素瘤外泌體對(duì)MEF細(xì)胞MMP2、MMP9 表達(dá)的影響
    4.1 實(shí)驗(yàn)材料及設(shè)備
        4.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        4.1.2 細(xì)胞培養(yǎng)
        4.1.3 實(shí)驗(yàn)試劑
        4.1.4 實(shí)驗(yàn)儀器
    4.2 實(shí)驗(yàn)方法
        4.2.1 熒光共聚焦觀察MEF對(duì)外泌體的攝取情況
        4.2.2 流式細(xì)胞儀檢測(cè)MEF細(xì)胞陽性率
        4.2.3 Western blot檢測(cè)MEF細(xì)胞MMP2、MMP9 的表達(dá)
        4.2.4 免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)MEF細(xì)胞MMP2、MMP9 表達(dá)
        4.2.5 qRT-PCR檢測(cè)MEF細(xì)胞MMP2、MMP9 的表達(dá)
        4.2.6 Transwell檢測(cè)MEF細(xì)胞的侵襲能力
    4.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        4.3.1 MEF細(xì)胞形態(tài)觀察
        4.3.2 熒光共聚焦與流式細(xì)胞儀檢測(cè)MEF細(xì)胞對(duì)外泌體的攝取
        4.3.3 Western blot檢測(cè)不同濃度外泌體處理后MEF細(xì)胞MMP2、MMP9 的表達(dá)
        4.3.4 Western blot檢測(cè)外泌體處理不同時(shí)間后MEF細(xì)胞MMP2、MMP9 的表達(dá)
        4.3.5 免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)外泌體處理后MEF細(xì)胞MMP2、MMP9 表達(dá)
        4.3.6 qRT-PCR檢測(cè)外泌體對(duì)MEF細(xì)胞中MMP2、MMP9的mRNA水平影響
        4.3.7 Transwell檢測(cè)外泌體對(duì)MEF細(xì)胞侵襲能力的影響
    4.4 討論
第五章 總結(jié)
參考文獻(xiàn)
致謝
讀研期間發(fā)表的文章



本文編號(hào)：3969784