目的:通過觀察白花蛇舌草(HDW)對大腸癌轉(zhuǎn)移及VEGF-C表達(dá)的影響,并基于VEGF-C介導(dǎo)的PI3K/AKT信號通路調(diào)控探討HDW對淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞淋巴管新生的影響,以期闡明HDW抑制大腸癌淋巴管新生及其轉(zhuǎn)移的分子機(jī)制,為其臨床治療腫瘤奠定實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。方法:(1)采用乙醇回流提取方法制備白花蛇舌草乙醇提取物(EEHDW),并體外干預(yù)培養(yǎng)的人大腸癌細(xì)胞株HCT116、HCT-8,采用MTT法檢測細(xì)胞活力,集落形成實(shí)驗(yàn)檢測細(xì)胞集落形成能力,劃痕實(shí)驗(yàn)及Transwell實(shí)驗(yàn)觀察細(xì)胞遷移能力,Western Blot檢測VEGF-C蛋白表達(dá);(2)人淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞(HLEC)經(jīng)EEHDW干預(yù)后,采用MTT法檢測細(xì)胞活力,集落形成實(shí)驗(yàn)檢測細(xì)胞存活能力,流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞周期及細(xì)胞凋亡,Transwell實(shí)驗(yàn)觀察細(xì)胞遷移,Tube formation檢測淋巴管腔形成;(3)進(jìn)一步用外源性VEGF-C刺激HLEC后,再加入EEHDW進(jìn)行干預(yù),采用MTT法檢測細(xì)胞活力,流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞周期及細(xì)胞凋亡,Transwell實(shí)驗(yàn)觀察細(xì)胞遷移,Tube formation檢測淋巴管腔形成,Western B...

【文章頁數(shù)】：63 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
英文縮略詞表
中文摘要
Abstract
引言
實(shí)驗(yàn)材料與方法
    1 細(xì)胞株
    2 藥物、試劑、耗材及儀器
        2.1 藥物購買
        2.2 主要試劑及耗材
        2.3 主要儀器
    3 藥物及常用試劑的配制
        3.1 白花蛇舌草乙醇提取物的配制
        3.2 完全培養(yǎng)基的配制
        3.3 MTT溶液的配制
    4 細(xì)胞實(shí)驗(yàn)方法
        4.1 細(xì)胞培養(yǎng)
        4.2 EEHDW對大腸癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移的影響
        4.3 EEHDW對HLEC淋巴管新生的影響
    5 數(shù)據(jù)處理方法
實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    1 EEHDW對大腸癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移的影響
        1.1 MTT實(shí)驗(yàn)檢測大腸癌細(xì)胞活力
        1.2 集落形成實(shí)驗(yàn)檢測大腸癌細(xì)胞集落形成能力
        1.3 劃痕(修復(fù))實(shí)驗(yàn)檢測EEHDW對大腸癌細(xì)胞遷移的影響
        1.4 Transwell實(shí)驗(yàn)觀察EEHDW大腸癌細(xì)胞遷移能力的影響
        1.5 Western Blot檢測EEHDW對大腸癌細(xì)胞VEGF-C蛋白表達(dá)的影響
    2 EEHDW對淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞淋巴管新生的影響
        2.1 MTT法檢測EEHDW對HLEC細(xì)胞活力的影響
        2.2 集落形成實(shí)驗(yàn)檢測HLEC細(xì)胞集落形成能力
        2.3 細(xì)胞周期實(shí)驗(yàn)檢測EEHDW對HLEC增殖的影響
        2.4 AnnexinV/PI染色檢測細(xì)胞凋亡
        2.5 Transwell實(shí)驗(yàn)觀察EEHDW對HLEC遷移能力的影響
        2.6 Tube Formation實(shí)驗(yàn)觀察EEHDW對HLEC管腔形成能力的影響
    3 EEHDW對VEGF-C介導(dǎo)的淋巴管生成及PI3K/AKT信號通路活化的影響
        3.1 MTT法檢測EEHDW對VEGF-C誘導(dǎo)的HLEC活力的影響
        3.2 集落形成實(shí)驗(yàn)觀察EEHDW對VEGF-C誘導(dǎo)的HLEC集落形成能力的影響
        3.3 細(xì)胞周期檢測EEHDW對VEGF-C誘導(dǎo)的HLEC增殖的影響
        3.4 Annexin V/PI檢測細(xì)胞凋亡
        3.5 Transwell觀察EEHDW對VEGF-C誘導(dǎo)的HLEC遷移能力的影響
        3.6 Tube Formation實(shí)驗(yàn)觀察EEHDW對VEGF-C誘導(dǎo)的HLEC管腔形成能力的影響
        3.7 Western Blot檢測EEHDW對VEGF-C誘導(dǎo)的HIEC的PI3K/AKT信號通路蛋白表達(dá)影響
討論
結(jié)論
問題與展望
參考文獻(xiàn)
文獻(xiàn)綜述
    參考文獻(xiàn)
致謝
作者簡歷



本文編號：3954571