AKT Substrate 1 (AKT1S1)又名富含脯氨酸AKT1底物蛋白(proline-rich AKT1 substrate of 40 kDa,PRAS40)。作為經(jīng)典的AKT1激酶底物,其在腫瘤生成過程中發(fā)揮著重要功能。為研究AKT1S1具體的相互作用蛋白以及作用通路,通過逆轉(zhuǎn)錄的方法獲得了來自293T細胞的cDNA庫。通過基因克隆的方法,成功克隆到AKT1S1基因,并將該基因插入至重組逆轉(zhuǎn)錄病毒載體pBABE-Flag質(zhì)粒中,構(gòu)建了Flag-AKT1S1-pBABE質(zhì)粒。在輔助質(zhì)粒的幫助下,在p293T細胞中包裝病毒,侵染293T細胞,使用嘌呤霉素篩選目標細胞,經(jīng)過蛋白質(zhì)免疫印跡試驗鑒定,獲得了Flag-AKT1S1-pBABE穩(wěn)定過表達細胞系,為下一步開展AKT1S1相互作用蛋白的質(zhì)譜鑒定及其在腫瘤發(fā)生中的研究打下堅實基礎(chǔ)。

【文章頁數(shù)】：4 頁

【文章目錄】：
1 試驗方法
    1.1 質(zhì)粒構(gòu)建
    1.2 細胞培養(yǎng)
    1.3 AKT1S1穩(wěn)定過表達細胞系的構(gòu)建
    1.4 蛋白質(zhì)免疫印跡試驗(Western Blot)檢測目標蛋白的表達
2 試驗結(jié)果
    2.1 cDNA的獲得和AKT1S1基因的克隆
    2.2 載體構(gòu)建
    2.3 穩(wěn)定過表達細胞系的篩選
3 分析與討論
4 結(jié)論



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