藥物與靶點間的作用關(guān)系直接影響到藥理和藥效。藥物-靶點結(jié)合能力、結(jié)合計量關(guān)系等信息是藥物研發(fā)過程中必需的表征數(shù)據(jù)。人類癌基因c-myb在結(jié)直腸癌等多種癌癥組織中存在過度表達(dá),目前已成為結(jié)直腸癌、白血病等癌癥疾病潛在的治療靶點。位于癌基因c-myb啟動子區(qū)的一段富含鳥嘌呤(G)的DNA序列,通過陽離子的誘導(dǎo)可自發(fā)折疊形成分子內(nèi)G-四鏈體,而小分子的特異性識別可以穩(wěn)定該G-四鏈體,進(jìn)而調(diào)節(jié)基因的轉(zhuǎn)錄和表達(dá)過程。該文采用壓力輔助毛細(xì)管電泳前沿分析(PACE-FA)結(jié)合電噴霧質(zhì)譜(ESI-MS)研究人類癌基因c-myb啟動子G-四鏈體(G4)與天然產(chǎn)物分子間的相互作用。PACE-FA法在毛細(xì)管電泳前沿分析(CE-FA)過程中施加一個與分析物遷移同向的壓力,在保證結(jié)果準(zhǔn)確度的前提下,能夠大大加快分析速度。同時結(jié)合ESI-MS,可快速解析結(jié)合分子與靶點的親合力和化學(xué)計量關(guān)系。首先,利用ESI-MS快速篩選出3種有親合力的天然產(chǎn)物,親合力大小依次為:土荊皮乙酸>丁溴東莨菪堿>荷葉堿�？紤]到溶液相中存在特異性與非特異性結(jié)合,接著用PACE-FA法準(zhǔn)確分析溶液相中結(jié)合的特異性和結(jié)合常數(shù)。結(jié)果...

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圖1G4DNA和篩選出的3種天然產(chǎn)物的結(jié)構(gòu)式

人類癌基因c-myb與在禽白血病病毒中發(fā)現(xiàn)的癌基因V-mybs同源,其編碼的轉(zhuǎn)錄因子在造血系統(tǒng)和胃腸系統(tǒng)的細(xì)胞增殖分化和生長過程中起重要的調(diào)節(jié)作用[1-3]。近些年的研究發(fā)現(xiàn),癌基因c-myb可通過維持細(xì)胞增殖和阻止細(xì)胞終止分化,來影響白血病的發(fā)生[4]。生物醫(yī)學(xué)實驗表明,在結(jié)直....

圖2不同S1DNA(5μmol/L)溶液的CD譜圖

其中,下標(biāo)b、f和t分別表示物質(zhì)在混合溶液中已結(jié)合的、未結(jié)合的以及總的濃度。在PACE-FA實驗中,主體的濃度[H]t保持不變,改變客體的濃度[L]t。電泳曲線中的平臺峰高度與未結(jié)合的客體濃度[L]f相對應(yīng),可根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線確定[L]f。再對I-[L]f進(jìn)行非線性擬合,確定結(jié)合常數(shù)....

圖35μmol/LS1DNA的ESI-MS圖

首先,我們測定了不同濃度的K+存在下的S1DNA溶液(30mmol/LTris-HCl,pH=7.4)的CD譜圖(見圖2)。根據(jù)文獻(xiàn)[34,35]報道,G4DNA溶液的CD譜圖存在特征吸收峰,其位置與DNA鏈間的取向有關(guān)。圖2中265nm附近存在一正峰,240nm附....

圖4S1DNA與不同天然產(chǎn)物混合(物質(zhì)的量之比1∶4,

接著,利用ESI-MS來進(jìn)一步解析c-mybG4DNA的結(jié)構(gòu)和性質(zhì)。由圖3可見,在不含NH4OAc的水溶液中,S1DNA存在一簇帶不同電荷的去氫離子峰[S1-nH+]n-,電荷分布n為7至12。當(dāng)NH4OAc濃度為25mmol/L時,S1DNA的主要離子峰變?yōu)镈NA鏈....

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