乳腺癌是女性患者中最普遍的腫瘤之一,并且在發(fā)達(dá)國(guó)家中是由于癌癥導(dǎo)致死亡的第二大原因。雖然近年來(lái),通過(guò)影像學(xué)的檢測(cè)使乳腺癌的早期診斷有所改善,但是在許多國(guó)家中,乳腺癌的發(fā)病率和死亡率仍然呈上升趨勢(shì)。因此,篩選和鑒定有價(jià)值的生物標(biāo)志物可以提高乳腺癌的診斷率以及預(yù)防乳腺癌的復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移,同時(shí)發(fā)現(xiàn)新的治療靶點(diǎn)對(duì)于有效地控制侵襲性乳腺癌也是極其重要的。蛋白磷酸酶2A的癌性抑制因子(cancerous inhibitor of protein phosphatase2A,CIP2A),也稱(chēng)為KIAA1524或者p90腫瘤相關(guān)抗原,是一個(gè)新發(fā)現(xiàn)的癌蛋白。據(jù)報(bào)道,它在人類(lèi)腫瘤中通過(guò)穩(wěn)定致癌性轉(zhuǎn)錄因子c-Myc的表達(dá),抑制蛋白磷酸酶2A(protein phosphatase 2A,PP2A)的活性。在一些惡性腫瘤細(xì)胞中,下調(diào)p90/CIP2A的表達(dá)可以降低腫瘤細(xì)胞的增殖能力,并且減小異種移植腫瘤的生成。雖然p90/CIP2A在許多腫瘤中呈現(xiàn)高表達(dá),并且其表達(dá)水平與某些腫瘤的預(yù)后相關(guān),但是目前還沒(méi)有完全揭示p90/CIP2A蛋白在腫瘤發(fā)生發(fā)展中的功能和機(jī)制。首先,本研究欲探討抗p90/CIP2A自身抗體是...

【文章頁(yè)數(shù)】：110 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
英文縮略詞索引
引言
第一章 抗p90/CIP2A自身抗體在乳腺癌免疫診斷中的價(jià)值
    前言
    技術(shù)路線
    1 材料
        1.1 臨床樣本
        1.2 主要儀器設(shè)備及相關(guān)材料
        1.3 主要試劑
        1.4 常用試劑的配制
    2 方法
        2.1 純化GST-p90/CIP2A融合蛋白
        2.2 提純p90/CIP2A蛋白
        2.3 酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)
        2.4 間接免疫熒光實(shí)驗(yàn)
        2.5 SDS-PAGE凝膠電泳
        2.6 轉(zhuǎn)膜
        2.7 Western blotting
        2.8 免疫組織化學(xué)實(shí)驗(yàn)
        2.9 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    3 結(jié)果
        3.1 GST-p90/CIP2A融合蛋白的誘導(dǎo)表達(dá)
        3.2 GST-p90/CIP2A融合蛋白的純化
        3.3 GST-p90/CIP2A蛋白的提純
        3.4 Bradford法測(cè)定GST-p90/CIP2A蛋白濃度
        3.5 抗p90/CIP2A自身抗體在乳腺癌血清中陽(yáng)性率的測(cè)定
        3.6 應(yīng)用ROC曲線評(píng)價(jià)抗p90/CIP2A自身抗體對(duì)乳腺癌的診斷價(jià)值
        3.7 p90/CIP2A蛋白在HEp-2 細(xì)胞中的表達(dá)位點(diǎn)
        3.8 p90/CIP2A蛋白在乳腺癌組織中表達(dá)的檢測(cè)
    4 討論
        4.1 抗p90/CIP2A自身抗體在乳腺癌血清中陽(yáng)性率的測(cè)定
        4.2 p90/CIP2A蛋白在HEp-2 細(xì)胞中的表達(dá)位點(diǎn)
        4.3 p90/CIP2A蛋白在乳腺癌組織中表達(dá)水平的檢測(cè)
    小結(jié)
第二章 p90/CIP2A調(diào)控乳腺癌細(xì)胞增殖和凋亡的作用
    前言
    技術(shù)路線
    1 材料
        1.1 細(xì)胞株的選擇
        1.2 慢病毒載體系統(tǒng)
        1.3 主要儀器設(shè)備及相關(guān)實(shí)驗(yàn)材料
        1.4 主要試劑
        1.5 常用試劑的配制
    2 方法
        2.1 慢病毒介導(dǎo)的細(xì)胞轉(zhuǎn)染
        2.2 細(xì)胞計(jì)數(shù)
        2.3 細(xì)胞的傳代培養(yǎng)
        2.4 細(xì)胞的凍存與復(fù)蘇
        2.5 SDS-PAGE電泳
        2.6 轉(zhuǎn)膜
        2.7 Western blotting
        2.8 細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)
        2.9 克隆形成實(shí)驗(yàn)
        2.10 免疫熒光實(shí)驗(yàn)
        2.11 細(xì)胞凋亡的檢測(cè)
        2.12 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    3 結(jié)果
        3.1 p90/CIP2A在不同乳腺癌細(xì)胞系中的表達(dá)
        3.2 RNA干涉抑制p90/CIP2A在乳腺癌細(xì)胞中穩(wěn)定表達(dá)模型的建立
        3.3 p90/CIP2A蛋白在乳腺癌細(xì)胞中表達(dá)的熒光定位
        3.4 沉默p90/CIP2A的表達(dá)抑制乳腺癌細(xì)胞的增殖和克隆形成
        3.5 p90/CIP2A的缺失促進(jìn)由紫杉醇誘導(dǎo)乳腺癌細(xì)胞的凋亡作用
        3.6 抑制p90/CIP2A的表達(dá)下調(diào)c-Myc和ERK1/2 磷酸化
    4 討論
        4.1 沉默p90/CIP2A的表達(dá)抑制乳腺癌細(xì)胞的增殖和克隆形成
        4.2 p90/CIP2A的缺失促進(jìn)由紫杉醇誘導(dǎo)乳腺癌細(xì)胞的凋亡作用
        4.3 抑制p90/CIP2A的表達(dá)下調(diào)c-Myc和ERK1/2 磷酸化
    小結(jié)
本研究的創(chuàng)新點(diǎn)與不足之處
下一步研究計(jì)劃
參考文獻(xiàn)
綜述
    參考文獻(xiàn)
個(gè)人簡(jiǎn)歷、在學(xué)期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文及參與科研項(xiàng)目
致謝



本文編號(hào)：3935447