本文探討綠側(cè)花�？�(Anthopleura anjunae)抗前列腺癌酶解寡肽制備與工藝優(yōu)化。以綠側(cè)花�？鉃樵线M(jìn)行酶解,篩選最佳蛋白酶,通過正交實(shí)驗(yàn)優(yōu)化酶解條件,并通過超濾、陰離子交換層析、G-25凝膠過濾和反相高效液相色譜(RP-HPLC)分離純化,通過LC-MS和氨基酸序列測(cè)定鑒定寡肽的氨基酸序列,并以MTT法檢測(cè)產(chǎn)物對(duì)前列腺癌細(xì)胞系DU-145增殖抑制率,以確定活性最強(qiáng)組分,最后通過倒置顯微鏡觀察純化肽的抗前列腺癌活性。結(jié)果表明,堿性蛋白酶為最佳酶種;工藝條件為:最適料液比1︰5、最適p H=11、最適加酶量2000U/g、最適溫度35oC、最適酶解時(shí)間6h;經(jīng)高效液相純化得到由五個(gè)氨基酸組成的綠側(cè)花�？骨傲邢侔┕央�,其氨基酸序列為:Tyr-Val-Pro-Gly-Pro(AAP-H);倒置顯微鏡結(jié)果顯示經(jīng)AAP-H作用24h后的DU-145細(xì)胞具有明顯的凋亡形態(tài)學(xué)特征。結(jié)論:采用堿性蛋白酶酶解并通過超濾和色譜分離技術(shù)能從綠側(cè)花海葵肉中制備抗腫瘤活性肽;且AAP-H對(duì)DU-145細(xì)胞的增殖抑制作用呈時(shí)間與劑量依賴關(guān)系,作用后細(xì)胞出現(xiàn)了凋亡的形態(tài)學(xué)特征。因此,AAP-H能明顯...

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