背景肝細(xì)胞癌(HCC)是位列世界第四的惡性腫瘤,死亡率極高,迄今肝癌發(fā)生發(fā)展的分子機(jī)制尚未系統(tǒng)性闡明。細(xì)胞色素P450氧化酶(CYP)2E1是重要的肝臟藥物代謝酶,主要參與前致癌物及環(huán)境毒物代謝。CYP2E1在肝癌中的作用,以往的研究主要集中在CYP2E1在體內(nèi)代謝活化前致癌物如乙醇、亞硝胺,生成致癌物質(zhì),導(dǎo)致基因突變誘發(fā)癌癥。然而,隨著肝癌的進(jìn)展,癌組織中的CYP2E1表達(dá)逐漸下降,并且CYP2E1低表達(dá)與肝癌的惡性生物學(xué)特征及患者短的生存期相關(guān)。CYP2E1在肝癌惡性進(jìn)展過程中是否發(fā)揮特定的生物學(xué)功能以及通過何種機(jī)制發(fā)揮作用,尚不清楚。肝癌的發(fā)生與多種信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路失調(diào)密切相關(guān),Wnt/β-catenin信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路是肝癌最常見的失調(diào)信號通路,Wnt信號的異�；罨c肝癌起始、發(fā)展、侵襲、轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)密切相關(guān)。有關(guān)CYP2E1和Wnt/β-catenin信號通路之間的研究鮮見報道。目的1.CYP2E1在肝癌組織中的表達(dá)及其對肝癌細(xì)胞惡性生物學(xué)行為的影響;2.CYP2E1抑制肝癌細(xì)胞增殖及侵襲轉(zhuǎn)移的機(jī)制研究。方法1 CYP2E1在肝癌組織中的表達(dá)及其對肝癌細(xì)胞惡性生物學(xué)行為的影響1.1應(yīng)用...

【文章頁數(shù)】：77 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
中英文縮略詞表
第一部分 CYP2E1在肝癌組織中的表達(dá)及其對肝癌細(xì)胞惡性生物學(xué)行為的影響
    前言
    1 主要材料及儀器
        1.1 人肝組織來源及其相關(guān)試劑
        1.2 細(xì)胞來源及其相關(guān)試劑
        1.3 裸鼠來源及其相關(guān)試劑
        1.4 其他試劑
        1.5 實(shí)驗(yàn)主要儀器
    2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.1 qRT-PCR
        2.2 Western Blotting
        2.3 細(xì)胞培養(yǎng)
        2.4 質(zhì)粒的擴(kuò)增
        2.5 慢病毒制備
        2.6 細(xì)胞功能試驗(yàn)
            2.6.1 劃痕修復(fù)實(shí)驗(yàn)
            2.6.2 CCK-8實(shí)驗(yàn)
            2.6.3 Transwell實(shí)驗(yàn)
        2.7 動物實(shí)驗(yàn)
            2.7.1 裸鼠皮下成瘤
            2.7.2 裸鼠肺轉(zhuǎn)移模型
            2.7.3 裸鼠肝原位移植瘤
            2.7.4 H&E染色
        2.8 統(tǒng)計(jì)方法
    3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.1 人肝組織標(biāo)本統(tǒng)計(jì)分析
            3.1.1 人肝樣本基本信息
            3.1.2 CYP2E1在人肝組織中的表達(dá)及臨床病理學(xué)意義
        3.2 過表達(dá)CYP2E1抑制肝癌細(xì)胞體外遷移、增殖及侵襲能力
            3.2.1 構(gòu)建過表達(dá)CYP2E1的肝癌細(xì)胞系
            3.2.2 過表達(dá)CYP2E1對細(xì)胞遷移、增殖及侵襲能力的影響
        3.3 過表達(dá)CYP2E1抑制肝癌細(xì)胞體內(nèi)增殖及侵襲轉(zhuǎn)移能力
            3.3.1 過表達(dá)CYP2E1對裸鼠皮下成瘤能力的影響
            3.3.2 過表達(dá)CYP2E1對裸鼠肺轉(zhuǎn)移能力的影響
            3.3.3 過表達(dá)CYP2E1對裸鼠肝原位移植瘤形成能力的影響
    4 討論
    5 結(jié)論
第二部分 CYP2E1抑制肝癌細(xì)胞增殖及侵襲轉(zhuǎn)移的機(jī)制研究
    前言
    1 實(shí)驗(yàn)材料及儀器
        1.1 細(xì)胞來源及其相關(guān)培養(yǎng)試劑
        1.2 細(xì)胞qRT-PCR及Western Blotting實(shí)驗(yàn)相關(guān)試劑
        1.3 其他試劑材料
        1.4 主要抗體
        1.5 主要儀器
    2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.1 qRT-PCR
        2.2 主要引物序列
        2.3 Western Blotting
        2.4 活性氧(Reactive oxygen species, ROS)檢測
        2.5 雙熒光素酶報告基因檢測
        2.6 免疫共沉淀(Co-IP)實(shí)驗(yàn)
    3 結(jié)果
        3.1 過表達(dá)CYP2E1抑制Wnt/β-catenin信號通路
        3.2 過表達(dá)CYP2E1抑制EMT
        3.3 CYP2E1促進(jìn)Dvl-2泛素化降解
        3.4 CYP2E1增強(qiáng)KLHL12與Dvl-2之間的相互作用促進(jìn)Dvl-2泛素化降解
        3.5 CYP2E1通過細(xì)胞內(nèi)ROS的生成調(diào)控Wn/β-catenin信號通路
    4 討論
    5 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
綜述 ROS在肝癌發(fā)生發(fā)展中的作用
    參考文獻(xiàn)
個人簡歷
致謝



本文編號：3934001