發(fā)布時(shí)間：2024-03-20 00:41

　　目的研究lncRNA H19作為新型生物標(biāo)志物對多發(fā)性骨髓瘤診斷、監(jiān)測及預(yù)后的臨床應(yīng)用價(jià)值,并探索H19參與誘導(dǎo)硼替佐米耐藥的分子機(jī)制。方法收集初診多發(fā)性骨髓瘤患者血清標(biāo)本80例、正常體檢者血清67例,采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測H19在兩組標(biāo)本中的表達(dá)差異;并與患者的相關(guān)臨床指標(biāo)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析;PCR檢測骨髓瘤細(xì)胞中H19的表達(dá)情況,再通過小室、CCK8及流式等技術(shù)分別進(jìn)行細(xì)胞遷移、增殖、凋亡等功能試驗(yàn);應(yīng)用生物信息學(xué)軟件預(yù)測H19的靶分子miR-29b-3p,并利用熒光素酶報(bào)告基因進(jìn)行確證后進(jìn)行miR-29b-3p及共轉(zhuǎn)染后的功能試驗(yàn);生物信息學(xué)軟件預(yù)測miR-29b-3p的靶蛋白MCL-1且發(fā)現(xiàn)與耐藥相關(guān),運(yùn)用Western Blot檢測藥物處理后相關(guān)凋亡蛋白的變化。結(jié)果H19在初診患者血清中高表達(dá),臨床資料分析顯示H19表達(dá)與骨損傷和總蛋白水平相關(guān)同時(shí)有助于輔助臨床分期;并且在耐藥復(fù)發(fā)患者中H19顯著高于非耐藥復(fù)發(fā)患者;細(xì)胞功能表明H19的上調(diào)促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的遷移、增殖和周期而抑制凋亡;熒光素酶報(bào)告基因顯示H19可與miR-29b-3p結(jié)合,從而促進(jìn)了miR-29b-3p靶蛋白MC...

【文章頁數(shù)】：69 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第一章 緒論
    1.1 課題來源、研究的目的和意義
    1.2 國內(nèi)外研究概況
    1.3 論文的主要研究內(nèi)容
第二章 材料與方法
    2.1 研究資料及儀器設(shè)備
        2.1.1 研究對象
        2.1.2 主要儀器與試劑
    2.2 實(shí)驗(yàn)流程與方法
        2.2.1 骨髓磁珠分選CD138+細(xì)胞
        2.2.2 血清標(biāo)本收集和處理
        2.2.3 血清和細(xì)胞總RNA提取
        2.2.4 逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)
        2.2.5 實(shí)時(shí)熒光定量PCR
        2.2.6 臨床血清標(biāo)本中H19、miR-29b-3p和MCL-1的檢測
        2.2.7 瓊脂糖凝膠電泳
        2.2.8 懸浮細(xì)胞培養(yǎng)
        2.2.9 細(xì)胞轉(zhuǎn)染
        2.2.10 細(xì)胞功能試驗(yàn)
        2.2.11 總蛋白提取
        2.2.12 蛋白免疫印跡
        2.2.13 核漿分離
        2.2.14 FISH
        2.2.15 雙熒光素酶報(bào)告基因
        2.2.16 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
第三章 結(jié)果
    3.1 H19的血清表達(dá)及方法學(xué)評價(jià)
        3.1.1 H19在血清和細(xì)胞中的表達(dá)水平
        3.1.2 H19檢測的方法學(xué)評價(jià)
        3.1.3 H19的表達(dá)與臨床相關(guān)指標(biāo)的相關(guān)性
        3.1.4 血清H19臨床分期的應(yīng)用
        3.1.5 血清中H19對MM的動態(tài)監(jiān)測
        3.1.6 對血清H19作為MM相關(guān)診斷指標(biāo)的評價(jià)
    3.2 H19對MM細(xì)胞功能的影響
        3.2.1 H19在MM細(xì)胞中的轉(zhuǎn)染效率
        3.2.2 H19促進(jìn)MM細(xì)胞的遷移
        3.2.3 H19促進(jìn)MM細(xì)胞的增殖
        3.2.4 H19延長S期加快細(xì)胞周期進(jìn)程
        3.2.5 H19抑制MM細(xì)胞凋亡
        3.2.6 細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白檢測結(jié)果
    3.3 H19靶miRNA的預(yù)測及驗(yàn)證
        3.3.1 H19在MM細(xì)胞中的定位
        3.3.2 miR-29b-3p作為H19的靶miRNA
        3.3.3 miR-29b-3p在MM細(xì)胞和血清中的表達(dá)水平
        3.3.4 H19與miR-29b-3p在血清中的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)
        3.3.5 雙熒光素酶報(bào)告基因證實(shí)H19與miR-29b-3p的結(jié)合
    3.4 miR-29b-3p對MM細(xì)胞的功能影響
        3.4.1 miR-29b-3p在MM細(xì)胞中的轉(zhuǎn)染效率
        3.4.2 miR-29b-3p抑制MM細(xì)胞的惡性表型
        3.4.3 細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白檢測結(jié)果
    3.5 H19競爭結(jié)合miR-29b-3p對MM細(xì)胞遷移、增殖和凋亡的影響
        3.5.1 H19競爭結(jié)合miR-29b-3p而促進(jìn)MM細(xì)胞遷移
        3.5.2 H19競爭結(jié)合miR-29b-3p而促進(jìn)MM細(xì)胞增殖
        3.5.3 H19競爭結(jié)合miR-29b-3p而抑制MM細(xì)胞凋亡
        3.5.4 細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白檢測結(jié)果
    3.6 MCL-1的異常增多誘導(dǎo)骨髓瘤細(xì)胞對硼替佐米的耐藥
        3.6.1 miR-29b-3p靶蛋白的MCL-1
        3.6.2 BTZ耐藥的MM患者血清中H19/miR-29b-3p/MCL-1的表達(dá)
        3.6.3 MCL-1的mRNA和蛋白水平的驗(yàn)證
        3.6.4 H19/miR-29b-3p調(diào)控MCL-1的表達(dá)
        3.6.5 H19/miR-29b-3p/MCL-1調(diào)控網(wǎng)參與調(diào)控MM細(xì)胞對BTZ的耐藥
        3.6.6 不同濃度BTZ對細(xì)胞增殖的影響
        3.6.7 H19/miR-29b-3p/MCL-1調(diào)控網(wǎng)抑制凋亡而降低細(xì)胞對BTZ敏感性
        3.6.8 凋亡相關(guān)蛋白的檢測結(jié)果
第四章 討論
第五章 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
英文縮寫詞表
綜述
    綜述參考文獻(xiàn)
在攻讀碩士學(xué)位期間公開發(fā)表的論文與參加的項(xiàng)目
    A：在國內(nèi)外刊物上發(fā)表的論文
    B：所參加的項(xiàng)目
致謝



本文編號：3932696