第一部分及第二部分目的:膀胱腫瘤是泌尿生殖系最常見的腫瘤,尤其在我國,其發(fā)病率和死亡率均占泌尿系腫瘤首位。膀胱癌中90%是移行細(xì)胞癌,且進展率和復(fù)發(fā)率高^[1]。如果腫瘤只局限在原發(fā)部位,經(jīng)手術(shù)切除即可治愈。目前治療失敗的主要原因是發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移或者膀胱壁多發(fā)轉(zhuǎn)移,膀胱癌一旦轉(zhuǎn)移,對放、化療敏感性差,治療起來非常棘手。所以,加強對膀胱癌轉(zhuǎn)移的分子機制的研究尤為迫切。色素框同源物7(Chromobox homolog 7,CBX7)屬于色素框家族,其表達和功能在胰腺癌等多種腫瘤存在顯著異常。本研究擬檢測CBX7基因在膀胱癌組織中的表達,明確其表達發(fā)生改變的原因;構(gòu)建表達載體,上調(diào)膀胱癌T24細(xì)胞中CBX7蛋白的表達,檢測CBX7高表達對T24細(xì)胞侵襲的影響。方法:熒光定量PCR檢測45例膀胱癌組織表達中的CBX7 mRNA表達。Miranda等軟件預(yù)測能夠調(diào)控CBX7基因的microRNA。檢測miR-9前體對CBX7基因表達的影響。熒光定量PCR檢測膀胱癌組織中miR-9表達。應(yīng)用熒光素酶報告基因表達分析明確miR-9是否與CBX7基因3’UTR結(jié)合,負(fù)性調(diào)控CBX7...

【文章頁數(shù)】：59 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
英文縮略語
第一部分 CBX7基因在膀胱癌中表達改變的分子機制
    1 前言
    2 材料和方法
        2.1 實驗材料
            2.1.1 組織標(biāo)本及細(xì)胞系
            2.1.2 相關(guān)分子生物學(xué)實驗材料
            2.1.3 主要儀器
            2.1.4 國際生物學(xué)信息途徑和計算機分析軟件包
        2.2 實驗方法
            2.2.1 TRIZOL法提取總RNA
            2.2.2 總RNA逆轉(zhuǎn)錄為cDNA
            2.2.3 熒光定量PCR
            2.2.4 轉(zhuǎn)染
            2.2.5 實驗分組
            2.2.6 熒光素酶報告基因表達分析
            2.2.7 Westernblotting
            2.2.8 統(tǒng)計分析
    3 實驗結(jié)果
        3.1 CBX7mRNA在膀胱癌組織中的表達
        3.2 miR-9對CBX7基因表達的影響
        3.3 膀胱癌組織中miR-9的表達
        3.4 miR-9與CBX7表達的相關(guān)性分析
        3.5 熒光素酶報告基因表達分析
    4 討論
    5 結(jié)論
第二部分 CBX7基因?qū)Π螂装㏕24細(xì)胞侵襲能力的影響
    1 前言
    2 材料與方法
        2.1 實驗材料
            2.1.1 細(xì)胞系
            2.1.2 相關(guān)分子生物學(xué)實驗材料
            2.1.3 主要儀器
            2.1.4 國際生物學(xué)信息途徑和計算機分析軟件包
        2.2 實驗方法
            2.2.1 轉(zhuǎn)染
            2.2.2 實驗分組
            2.2.3 Westernblotting
            2.2.4 外侵襲實驗
            2.2.5 統(tǒng)計分析
    3 實驗結(jié)果
        3.1 pcDNA-CBX7對T24細(xì)胞中CBX7基因表達的影響
        3.2 CBX7過表達對膀胱癌T24細(xì)胞侵襲能力的影響
        3.3 CBX7過表達對膀胱癌T24細(xì)胞中MMP2和VEGF蛋白表達的影響
    4 討論
    5 結(jié)論
第三部分 長鏈非編碼RNA CDKN2B antisense RNA1抑制膀胱尿路上皮癌對吉西他濱的化療敏感性
    1 前言
    2 材料與方法
        2.1 實驗材料
            2.1.1 細(xì)胞系
            2.1.2 臨床組織標(biāo)本
            2.1.3 相關(guān)分子生物學(xué)實驗材料
            2.1.4 主要儀器
            2.1.5 國際生物學(xué)信息途徑和計算機分析軟件包
        2.2 實驗方法
            2.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)
            2.2.2 實時定量PCR
            2.2.3 細(xì)胞轉(zhuǎn)染
            2.2.4 細(xì)胞增殖實驗
            2.2.5 凋亡率檢測
            2.2.6 藥物敏感性試驗
            2.2.7 Westernblotting
            2.2.8 熒光素酶檢測
            2.2.9 統(tǒng)計分析
    3 實驗結(jié)果
        3.1 CDKN2B-AS基因在BUC中高表達
        3.2 CDKN2B-AS在BUC中的表達與吉西他濱的不良反應(yīng)相關(guān)
        3.3 CDKN2B-AS基因敲除失活Wnt信號通路
        3.4 Wnt信號通路介導(dǎo)了CDKN2B-AS調(diào)控T24/GEM細(xì)胞對吉西他濱敏感性
    4 討論
    5 結(jié)論
本研究創(chuàng)新性的自我評價
參考文獻
綜述
    參考文獻
攻讀學(xué)位期間取得的研究成果
致謝
個人簡歷



本文編號：3931921