發(fā)布時(shí)間：2023-06-10 14:46

　　EB病毒(Epstein-Barr virus,EBV)是一種雙鏈DNA病毒,與多種腫瘤的發(fā)生相關(guān)。約有90%以上的健康人群在幼兒時(shí)期曾感染EBV,呈持續(xù)性潛伏感染狀態(tài),且在其體內(nèi)均可檢測(cè)到EBV抗體。EBV相關(guān)胃癌(EBV associated gastric carcinoma,EBVaGC)約占胃癌總數(shù)的3%-8%,臨床病理學(xué)特征與其他胃癌不同,其發(fā)病機(jī)制尚未明了。CXCR4屬于高度保守的7次跨膜G蛋白偶聯(lián)受體,已有研究發(fā)現(xiàn)CXCR4在多種腫瘤組織中表達(dá)升高,可影響多種腫瘤的發(fā)生發(fā)展過程,如促進(jìn)細(xì)胞增殖、抑制細(xì)胞凋亡、誘導(dǎo)細(xì)胞遷移和侵襲以及上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化等多種生物學(xué)活性。CXCR4與病毒感染密切相關(guān),如CXCR4可作為共受體輔助HIV感染并進(jìn)入宿主細(xì)胞。CXCL12可與CXCR4的N端特異性結(jié)合,并與CXCR4的第2胞外環(huán)相互作用后啟動(dòng)下游信號(hào)通路,調(diào)控相關(guān)腫瘤的發(fā)生和發(fā)展。目的:明確CXCR4在EBVaGC組織中的表達(dá)及其調(diào)控機(jī)制,并探討CXCR4在EBVaGC發(fā)生發(fā)展中的作用以及可能的作用機(jī)制,為進(jìn)一步闡明EBV在EBVaGC發(fā)生發(fā)展過程中的作用提供理論基礎(chǔ)。材料和方法:(1)...

【文章頁數(shù)】：73 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
引言
材料與方法
    1.1 儀器、試劑和耗材
        1.1.1 主要儀器
        1.1.2 主要試劑和耗材
        1.1.3 常用試劑配制
    1.2 細(xì)胞系及胃癌組織標(biāo)本的選擇
        1.2.1 細(xì)胞系的選擇
        1.2.2 胃癌組織標(biāo)本的選擇
    1.3 細(xì)胞處理
        1.3.1 實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備
        1.3.2 細(xì)胞復(fù)蘇
        1.3.3 培養(yǎng)液的更換
        1.3.4 細(xì)胞傳代
    1.4 CXCR4 及相關(guān)基因m RNA檢測(cè)
        1.4.1 細(xì)胞系RNA提取
        1.4.2 cDNA合成
        1.4.3 實(shí)時(shí)熒光定量PCR(Real-time qPCR)
        1.4.4 microRNA逆轉(zhuǎn)錄
        1.4.5 microRNA表達(dá)水平檢測(cè)
        1.4.6 Real-time qPCR結(jié)果數(shù)據(jù)分析
    1.5 CXCR4及相關(guān)蛋白檢測(cè)
        1.5.1 細(xì)胞系總蛋白的提取
        1.5.2 蛋白濃度的測(cè)量
        1.5.3 Western blott 檢測(cè)細(xì)胞系中蛋白的表達(dá)
        1.5.4 PI3K通路抑制劑LY294002作用后檢測(cè)蛋白表達(dá)變化
        1.5.5 免疫組織化學(xué)染色(SP法)檢測(cè)胃癌組織中CXCR4 蛋白的表達(dá)
        1.5.6 免疫熒光檢測(cè)胃癌細(xì)胞中蛋白亞定位
    1.6 CXCR4甲基化狀態(tài)檢測(cè)
        1.6.1 細(xì)胞系DNA提取
        1.6.2 DNA樣本的焦亞硫酸鹽修飾
        1.6.3 亞硫酸鹽基因組測(cè)序
    1.7 細(xì)胞轉(zhuǎn)染
        1.7.1 LMP1 和 LMP2A 過表達(dá)細(xì)胞模型的建立
        1.7.2 siRNA轉(zhuǎn)染
    1.8 細(xì)胞生物學(xué)表型實(shí)驗(yàn)的檢測(cè)
        1.8.1 細(xì)胞凋亡實(shí)驗(yàn)
        1.8.2 細(xì)胞周期實(shí)驗(yàn)檢測(cè)
    1.9 細(xì)胞自噬的檢測(cè)
        1.9.1 透射電鏡檢測(cè)自噬體的形成
        1.9.2 共聚焦顯微鏡檢測(cè)自噬體的形成
    1.10 統(tǒng)計(jì)學(xué)和圖像分析
結(jié)果
    2.1 GSE51575 數(shù)據(jù)集中CXCR4 的轉(zhuǎn)錄表達(dá)
    2.2 胃癌細(xì)胞系中CXCR4及相關(guān)基因的轉(zhuǎn)錄表達(dá)
    2.3 胃癌細(xì)胞系及組織中 CXCR4 蛋白表達(dá)
    2.4 CXCR4 啟動(dòng)子和第 1 外顯子甲基化狀態(tài)檢測(cè)結(jié)果
    2.5 LMP1對(duì)CXCR4 表達(dá)的調(diào)控作用
    2.6 EBV相關(guān)胃癌細(xì)胞中microRNA-146a的轉(zhuǎn)錄表達(dá)
    2.7 microRNA-146a潛在靶基因的預(yù)測(cè)
    2.8 microRNA-146a對(duì) CXCR4 表達(dá)的調(diào)控作用
    2.9 AGS 和 AGS-EBV 細(xì)胞系中 PI3K/AKT 表達(dá)
    2.10 LY294002 通路抑制劑作用后CXCR4 蛋白表達(dá)變化
    2.11 LMP2A對(duì) CXCR4 表達(dá)的調(diào)控作用
    2.12 CXCR4蛋白對(duì)細(xì)胞自噬的調(diào)控作用
    2.13 CXCR4對(duì)細(xì)胞凋亡和周期的影響
    2.14 CXCR4 和自噬在EBV潛伏期的作用
討論
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
綜述
    綜述參考文獻(xiàn)
攻讀學(xué)位期間的研究成果
附錄或縮略詞表
致謝



本文編號(hào)：3833054