EB病毒(Epstein-Barr virus,EBV)是一種雙鏈DNA病毒,與多種腫瘤的發(fā)生相關。約有90%以上的健康人群在幼兒時期曾感染EBV,呈持續(xù)性潛伏感染狀態(tài),且在其體內均可檢測到EBV抗體。EBV相關胃癌(EBV associated gastric carcinoma,EBVaGC)約占胃癌總數(shù)的3%-8%,臨床病理學特征與其他胃癌不同,其發(fā)病機制尚未明了。CXCR4屬于高度保守的7次跨膜G蛋白偶聯(lián)受體,已有研究發(fā)現(xiàn)CXCR4在多種腫瘤組織中表達升高,可影響多種腫瘤的發(fā)生發(fā)展過程,如促進細胞增殖、抑制細胞凋亡、誘導細胞遷移和侵襲以及上皮間質轉化等多種生物學活性。CXCR4與病毒感染密切相關,如CXCR4可作為共受體輔助HIV感染并進入宿主細胞。CXCL12可與CXCR4的N端特異性結合,并與CXCR4的第2胞外環(huán)相互作用后啟動下游信號通路,調控相關腫瘤的發(fā)生和發(fā)展。目的:明確CXCR4在EBVaGC組織中的表達及其調控機制,并探討CXCR4在EBVaGC發(fā)生發(fā)展中的作用以及可能的作用機制,為進一步闡明EBV在EBVaGC發(fā)生發(fā)展過程中的作用提供理論基礎。材料和方法:(1)...

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【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
引言
材料與方法
    1.1 儀器、試劑和耗材
        1.1.1 主要儀器
        1.1.2 主要試劑和耗材
        1.1.3 常用試劑配制
    1.2 細胞系及胃癌組織標本的選擇
        1.2.1 細胞系的選擇
        1.2.2 胃癌組織標本的選擇
    1.3 細胞處理
        1.3.1 實驗前準備
        1.3.2 細胞復蘇
        1.3.3 培養(yǎng)液的更換
        1.3.4 細胞傳代
    1.4 CXCR4 及相關基因m RNA檢測
        1.4.1 細胞系RNA提取
        1.4.2 cDNA合成
        1.4.3 實時熒光定量PCR(Real-time qPCR)
        1.4.4 microRNA逆轉錄
        1.4.5 microRNA表達水平檢測
        1.4.6 Real-time qPCR結果數(shù)據(jù)分析
    1.5 CXCR4及相關蛋白檢測
        1.5.1 細胞系總蛋白的提取
        1.5.2 蛋白濃度的測量
        1.5.3 Western blott 檢測細胞系中蛋白的表達
        1.5.4 PI3K通路抑制劑LY294002作用后檢測蛋白表達變化
        1.5.5 免疫組織化學染色(SP法)檢測胃癌組織中CXCR4 蛋白的表達
        1.5.6 免疫熒光檢測胃癌細胞中蛋白亞定位
    1.6 CXCR4甲基化狀態(tài)檢測
        1.6.1 細胞系DNA提取
        1.6.2 DNA樣本的焦亞硫酸鹽修飾
        1.6.3 亞硫酸鹽基因組測序
    1.7 細胞轉染
        1.7.1 LMP1 和 LMP2A 過表達細胞模型的建立
        1.7.2 siRNA轉染
    1.8 細胞生物學表型實驗的檢測
        1.8.1 細胞凋亡實驗
        1.8.2 細胞周期實驗檢測
    1.9 細胞自噬的檢測
        1.9.1 透射電鏡檢測自噬體的形成
        1.9.2 共聚焦顯微鏡檢測自噬體的形成
    1.10 統(tǒng)計學和圖像分析
結果
    2.1 GSE51575 數(shù)據(jù)集中CXCR4 的轉錄表達
    2.2 胃癌細胞系中CXCR4及相關基因的轉錄表達
    2.3 胃癌細胞系及組織中 CXCR4 蛋白表達
    2.4 CXCR4 啟動子和第 1 外顯子甲基化狀態(tài)檢測結果
    2.5 LMP1對CXCR4 表達的調控作用
    2.6 EBV相關胃癌細胞中microRNA-146a的轉錄表達
    2.7 microRNA-146a潛在靶基因的預測
    2.8 microRNA-146a對 CXCR4 表達的調控作用
    2.9 AGS 和 AGS-EBV 細胞系中 PI3K/AKT 表達
    2.10 LY294002 通路抑制劑作用后CXCR4 蛋白表達變化
    2.11 LMP2A對 CXCR4 表達的調控作用
    2.12 CXCR4蛋白對細胞自噬的調控作用
    2.13 CXCR4對細胞凋亡和周期的影響
    2.14 CXCR4 和自噬在EBV潛伏期的作用
討論
結論
參考文獻
綜述
    綜述參考文獻
攻讀學位期間的研究成果
附錄或縮略詞表
致謝



本文編號：3833054