為證明Lin28B/let-7通路與肝癌紫杉醇耐藥密切相關和采用濃度梯度間歇刺激法建立Hep3B/PTX耐藥細胞系。通過四甲基偶氮唑鹽比色(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)分析Guava微流式分析對Hep3B/PTX耐藥細胞系進行鑒定,realtime PCR檢測耐藥細胞中Lin28B及l(fā)et-7表達水平。經(jīng)過6個月的誘導,Hep3B/PTX耐藥細胞系對紫杉醇的耐藥指數(shù)為13.55;與親本細胞相比,Hep3B/PTX處于G0/G1期的細胞比例較高,S期的細胞比例較低;0.2μmol/L紫杉醇處理親本細胞24h后,有(41.73±1.80)%細胞發(fā)生凋亡,而Hep3B/PTX細胞凋亡率只有(17.21±3.60)%;real-time PCR發(fā)現(xiàn),Hep3B/PTX與親本細胞相比,Lin28B基因表達水平升高了49倍,而Lin28B調控的let-7家族成員表達水平均有不同程度的降低。Hep3B/PTX細胞中Lin28B基因和let-7家族成員表達量的變化揭示了肝癌細胞對紫杉醇的耐藥與Lin28B/let-7通路相關,Lin28B基因可能通過影響let-7...

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【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 藥物與試劑
    1.2 耐藥細胞系的篩選
    1.3 MTT法檢測紫杉醇對Hep3B/PTX細胞增殖的IC50
    1.4 Guava easyCyte Flow Cytometers檢測細胞周期
    1.5 Guava easyCyte Flow Cytometers檢測細胞凋亡
    1.6 real-time PCR檢測Lin28B基因的表達
    1.7 real-time PCR檢測let-7家族的表達
    1.8 統(tǒng)計學分析
2 結果
    2.1 人肝癌耐藥細胞系Hep3B/PTX的建立
    2.2 Hep3B與Hep3B/PTX的細胞周期檢測
    2.3 紫杉醇誘導的Hep3B及Hep3B/PTX細胞凋亡檢測
    2.4 Lin28B基因在Hep3B/PTX細胞中的表達
    2.5 Hep3B和Hep3B/PTX細胞中l(wèi)et-7家族各成員表達的差異
3 討論
4 結論



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