癌癥是一種非常可怕的疾病,對人類的生活和社會的發(fā)展都有一定的影響,每年都會有數(shù)百萬人因此失去生命,且逐年遞增。為了提高癌癥患者的生存率,對癌癥的早期診斷尤為重要。因此,研究人員將重心放在了對腫瘤標志物的超靈敏早期檢測,從而診斷腫瘤細胞上。然而,由于假陰性或陽性結(jié)果的存在,僅檢測一種腫瘤標志物容易引起誤診,所以同時檢測兩種或兩種以上的標志物就具有十分重要的意義。近年來,越來越多的研究著眼于對腫瘤細胞的早期檢測,并開發(fā)創(chuàng)新了許多強大的監(jiān)測平臺,簡化分析過程,提高靈敏度、保持穩(wěn)定性和廣泛適用性等方面的基本優(yōu)勢。例如實時聚合酶鏈反應(yīng)(real-time polymerase chain reaction,RT-PCR),酶聯(lián)免疫吸附法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)微陣列分析(microarray analysis),熒光分析(fluorescence analysis)等,但這些方法需要復雜的操作程序、昂貴的儀器和專業(yè)的操作人員。目前,電化學分析(electrochemical analysis)中的分子信標技術(shù)因其快速且便攜,儀器簡單,成本...

【文章頁數(shù)】：139 頁

【學位級別】：博士

【文章目錄】：
內(nèi)容摘要
Abstract
試劑列表
儀器列表
第一章 緒論
    1 癌癥及其診斷
        1.1 癌癥
        1.2 癌癥的診斷
        1.3 腫瘤標志物在癌癥檢測中的意義
    2 分子信標及其對腫瘤標志物檢測的研究
        2.1 分子信標
        2.2 新型電化學活性開關(guān)分子信標的應(yīng)用
        2.3 分子信標對腫瘤標志物檢測的研究
    3 信號擴增技術(shù)的研究
        3.1.鏈置換擴增技術(shù)
        3.2.滾環(huán)擴增技術(shù)
        3.3.酶的信號擴增技術(shù)
        3.4.無酶信號擴增技術(shù)
    4 多目標/多信號生物傳感器的研究
        4.1.多目標生物傳感器
        4.2.多信號生物傳感器
    5 本論文的研究意義和主要內(nèi)容
    參考文獻
第二章 分裂引物連接誘導分子信標構(gòu)象的改變用于高特異性檢測肝癌細胞的相關(guān)mRNA:TK1(胸苷激酶1)和c-myc(原癌基因)
    2.1 引言
    2.2 實驗部分
        2.2.1 電化學檢測體系
        2.2.2 DNA的合成
        2.2.3 二茂鐵分子信標的合成
        2.2.4 連接反應(yīng)
        2.2.5 凝膠電泳
        2.2.6 檢測HepG2和HL-7702細胞中TK1和c-myc
    2.3 結(jié)果與討論
        2.3.1 TK1和c-myc mRNA檢測的傳感機理
        2.3.2 分裂引物連接誘導分子信標構(gòu)象改變的可行性
        2.3.3 條件優(yōu)化實驗
        2.3.4 Tk1和c-myc的定量檢測
        2.3.5 傳感器的特異性
        2.3.6 對肝癌細胞(HepG2)和正常肝細胞(HL-7702)的檢測
    2.4 結(jié)論
    參考文獻
第三章 分裂引物連接觸發(fā)8-17酶輔助級聯(lián)滾環(huán)擴增用于高效特異性檢測肝癌細胞的相關(guān)mRNA:胸苷激酶1(TK1)和原癌基因(c-myc)
    3.1 引言
    3.2 實驗部分
        3.2.1 電化學檢測體系
        3.2.2 DNA的合成
        3.2.3 二茂鐵分子信標的合成
        3.2.4 連接反應(yīng)
        3.2.5 滾換擴增反應(yīng)
        3.2.6 凝膠電泳
        3.2.7 檢測HepG2和HL-7702細胞中TK1和c-myc
    3.3 結(jié)果與討論
        3.3.1 TK1和c-myc mRNA檢測的傳感機理
        3.3.2 分裂引物連接誘導的8-17 DNAzyme輔助級聯(lián)滾環(huán)擴增的可行性
        3.3.3 條件優(yōu)化實驗
        3.3.4 Tk1和c-myc的定量檢測
        3.3.5 傳感器的特異性
        3.3.6 對肝癌細胞(HepG2)和正常肝細胞(HL-7702)的檢測
    3.4 結(jié)論
    參考文獻
第四章 基于分裂引物連接觸發(fā)催化發(fā)夾自組裝反應(yīng)的雙信號電化學傳感器對癌細胞的檢測
    4.1 引言
    4.2 實驗部分
        4.2.1 電化學檢測體系
        4.2.2 DNA的合成
        4.2.3 二茂鐵分子信標的合成
        4.2.4 連接反應(yīng)
        4.2.5 催化發(fā)夾白組裝反應(yīng)
        4.2.6 凝膠電泳
        4.2.7 檢測HepG2,HL-7702,MCF-7和MCF-10A細胞中的mRNA
    4.3 結(jié)果與討論
        4.3.1 TK1和c-myc mRNA檢測的傳感機理
        4.3.2 分裂引物連接誘導催化發(fā)夾自組裝反應(yīng)的可行性
        4.3.3 條件優(yōu)化實驗
        4.3.4 兩組癌癥標志物的定量檢測
        4.3.5 傳感器的特異性
        4.3.6 對四種細胞實樣的檢測
        4.3.7 建立對于四種細胞檢測的邏輯門
    4.4 結(jié)論
    參考文獻
第五章 基于空間阻滯和分子信標構(gòu)象改變用于高特異性檢測肝癌細胞的相關(guān)mRNA: TK1(胸苷激酶1)和c-myc(原癌基因)
    5.1 引言
    5.2 實驗部分
        5.2.1 電化學檢測體系
        5.2.2 DNA的合成
        5.2.3 二茂鐵分子信標的合成
        5.2.4 電極的組裝
        5.2.5 檢測HepG2和HL-7702細胞中TK1和c-myc
    5.3 結(jié)果與討論
        5.3.1 TK1和c-myc mRNA檢測的傳感機理
        5.3.2 基于空間阻滯和分子信標構(gòu)象改變誘導電化學信號改變的可行性
        5.3.3 條件優(yōu)化實驗
        5.3.4 Tk1和c-myc的定量檢測
        5.3.5 傳感器的特異性
        5.3.6 對肝癌細胞(HepG2)和正常肝細胞(HL-7702)的檢測
    5.4 結(jié)論
    參考文獻
第六章 結(jié)論與展望
    6.1 結(jié)論
    6.2 展望
附錄 博士期間科研成果
致謝



本文編號：3824049