發(fā)布時(shí)間：2023-05-26 21:47

　　目的:課題組前期運(yùn)用蛋白質(zhì)組學(xué)方法篩選鑒定絲氨酸蛋白酶抑制蛋白A3(SERPINA3)在胃粘膜癌變過程中表達(dá)下調(diào),了解其在胃粘膜癌變過程中的功能,將為闡明胃粘膜癌變的分子機(jī)制提供理論依據(jù)。方法:1、構(gòu)建SERPINA3干擾載體,轉(zhuǎn)染GES1細(xì)胞,篩選后建立SERPINA3低表達(dá)GES1細(xì)胞系(GES1-miR-SERPINA3);2、采用免疫熒光和Western-blot方法檢測GES1-miR-SERPINA3細(xì)胞中SERPINA3蛋白的表達(dá)情況;3、通過繪制細(xì)胞生長曲線、軟瓊脂集落形成實(shí)驗(yàn)、平皿克隆形成實(shí)驗(yàn)和流式細(xì)胞儀等方法,觀察SERPINA3低表達(dá)對GES1細(xì)胞生長增殖的影響。4、Western-blot檢測GES1-miR-SERPINA3細(xì)胞中Wnt1與β-catenin的表達(dá)。結(jié)果:1、GES1-miR-SERPINA3細(xì)胞的生長速度較對照組細(xì)胞(GES1與GES1-pcDNA6.2)明顯加快(P<0.01),細(xì)胞生長曲線結(jié)果說明,SERPINA3低表達(dá)后GES1細(xì)胞生長能力增強(qiáng);2、GES1、GES1-pcDNA6.2與GES1-miR-SERPINA3細(xì)胞克隆數(shù)...

【文章頁數(shù)】：62 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
主要縮略語英文索引
第1章 前言
技術(shù)路線
第2章 材料和方法
    2.1 材料
        2.1.1 細(xì)胞系
        2.1.2 菌株和質(zhì)粒
        2.1.3 引物
        2.1.4 主要試劑
        2.1.5 主要儀器
    2.2 方法
        2.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)
        2.2.2 基因轉(zhuǎn)染
        2.2.3 免疫熒光
        2.2.4 Western-blot檢測
        2.2.5 細(xì)胞生長曲線
        2.2.6 平皿克隆形成實(shí)驗(yàn)
        2.2.7 軟瓊脂集落形成實(shí)驗(yàn)
        2.2.8 流式細(xì)胞儀(FCM)檢測
        2.2.9 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
第3章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    3.1 建立SERPINA3 低表達(dá)GES1 細(xì)胞系
    3.2 SERPINA3 低表達(dá)對GES1 細(xì)胞生長的影響
    3.3 SERPINA3 低表達(dá)對GES1 細(xì)胞克隆形成的影響
    3.4 SERPINA3 低表達(dá)對GES1 細(xì)胞集落形成的影響
    3.5 SERPINA3 低表達(dá)對GES1 細(xì)胞周期分布的影響
    3.6 SERPINA3 低表達(dá)對GES1 細(xì)胞凋亡的影響
    3.7 SERPINA3 低表達(dá)對Wnt1/β-catenin通路的影響
第4章 討論
第5章 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
綜述
    參考文獻(xiàn)
作者攻讀學(xué)位期間發(fā)表的科研論文
致謝



本文編號：3823315