發(fā)布時(shí)間：2023-04-28 00:33

　　胃癌是全球第三大癌癥死亡原因,嚴(yán)重危害人類的生命健康。中國的胃癌病例數(shù)量約占全球的50%以上,并且胃癌的發(fā)病率和死亡率仍在逐年上升。雖然大多數(shù)胃癌病例是散發(fā)性的,但仍有約10%的病例表現(xiàn)為家族聚集,其中僅有部分家系的遺傳易感原因是已知的,通常是由于基因突變引起的蛋白質(zhì)功能缺失。在本研究中我們調(diào)查了1個(gè)胃癌家系,并且旨在鑒定該家系的胃癌易感基因。我們采集了該家系的外周血樣本,選取其中的3例胃癌患者和1例正常樣本進(jìn)行全外顯子組測序,并對測序數(shù)據(jù)進(jìn)行了生物信息分析,共得到822905個(gè)SNV突變位點(diǎn)和208617個(gè)In Del突變位點(diǎn)。然后進(jìn)行易感基因篩選,最終得到了12個(gè)SNV突變位點(diǎn)和9個(gè)In Del突變位點(diǎn)作為候選易感基因。其中SAMD9L在多種癌癥中作為抑癌基因調(diào)控細(xì)胞增殖,而SAMD9L p.T832fs突變可能導(dǎo)致該基因功能缺失。我們在胃癌SGC-7901細(xì)胞中使用si RNA對SAMD9L進(jìn)行敲減,發(fā)現(xiàn)SAMD9L基因表達(dá)水平的降低顯著增強(qiáng)了SGC-7901細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲能力。接下來在SGC-7901細(xì)胞中轉(zhuǎn)染SAMD9L p.T832fs突變型過表達(dá)質(zhì)粒,發(fā)現(xiàn)對SGC...

【文章頁數(shù)】：62 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
縮略語對照表
第一章 緒論
    1.1 胃癌的流行病學(xué)概述
    1.2 胃癌的主要分子機(jī)制
        1.2.1 胃癌中的基因突變
        1.2.2 表觀遺傳改變
        1.2.3 非編碼RNA的作用
    1.3 家族性胃癌研究進(jìn)展
    1.4 全外顯子組測序簡介
    1.5 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)與意義
第二章 全外顯子組測序及易感基因篩選
    2.1 前言
    2.2 材料和設(shè)備
        2.2.1 主要試劑
        2.2.2 主要儀器
    2.3 實(shí)驗(yàn)方法
        2.3.1 全外顯子組測序
        2.3.2 測序數(shù)據(jù)分析
        2.3.3 外周血基因組DNA提取
        2.3.4 測序結(jié)果驗(yàn)證
    2.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        2.4.1 全外顯子組測序分析結(jié)果
        2.4.2 易感基因篩選結(jié)果
        2.4.3 一代測序驗(yàn)證結(jié)果
第三章 SAMD9L基因功能驗(yàn)證
    3.1 前言
    3.2 材料和設(shè)備
        3.2.1 細(xì)胞株
        3.2.2 主要儀器
        3.2.3 主要試劑
        3.2.4 主要溶液的配制
    3.3 實(shí)驗(yàn)方法
        3.3.1 細(xì)胞復(fù)蘇
        3.3.2 細(xì)胞傳代
        3.3.3 細(xì)胞凍存
        3.3.4 SAMD9L基因敲減
        3.3.5 細(xì)胞總RNA提取
        3.3.6 q RT-PCR驗(yàn)證基因表達(dá)
        3.3.7 CCK-8檢測細(xì)胞增殖
        3.3.8 平板克隆形成實(shí)驗(yàn)
        3.3.9 劃痕實(shí)驗(yàn)
        3.3.10 細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)
        3.3.11 細(xì)胞侵襲實(shí)驗(yàn)
        3.3.12 細(xì)胞凋亡實(shí)驗(yàn)
    3.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.4.1 q RT-PCR驗(yàn)證SAMD9L基因敲減結(jié)果
        3.4.2 敲減SAMD9L促進(jìn)胃癌細(xì)胞增殖和克隆形成
        3.4.3 敲減SAMD9L促進(jìn)胃癌細(xì)胞遷移和侵襲
        3.4.4 敲減SAMD9L對細(xì)胞凋亡的影響
第四章 SAMD9L p.T832fs突變功能驗(yàn)證
    4.1 前言
    4.2 材料和設(shè)備
        4.2.1 主要試劑
        4.2.2 主要儀器
    4.3 實(shí)驗(yàn)方法
        4.3.1 過表達(dá)載體構(gòu)建
        4.3.2 質(zhì)粒提取
        4.3.3 質(zhì)粒轉(zhuǎn)染
        4.3.4 q RT-PCR驗(yàn)證過表達(dá)效率
    4.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        4.4.1 q RT-PCR驗(yàn)證過表達(dá)結(jié)果
        4.4.2 過表達(dá)突變型SAMD9L質(zhì)粒對SGC-7901 細(xì)胞無顯著影響
結(jié)論與討論
參考文獻(xiàn)
致謝
攻讀碩士學(xué)位期間取得的科研成果



本文編號：3803385