目的:外泌體(Exosomes)是介導細胞間信息交流的又一新的載體,其介導的細胞間信息傳遞在免疫反應、炎癥和腫瘤等過程中發(fā)揮重要作用。本實驗擬分離、鑒定幽門螺桿菌(Helicobacter pylori,H.pylori)誘導的人胃癌SGC-7901細胞源性外泌體,使用miRNA芯片篩選其中差異表達微小RNA(microRNA,miRNA),通過生物信息學分析其潛在的靶基因及可能參與的信號通路,為進一步闡明H.pylori的致癌機制提供新線索。方法:使用H.pylori活菌體外刺激人胃癌SGC-7901細胞24h,以空白處理組為對照,采用超高速離心法和外泌體提取試劑盒提取兩組細胞釋放的外泌體,并采用透射電子顯微鏡、納米粒子跟蹤分析和Western-blot蛋白印跡實驗進行鑒定;熒光染料PKH67標記外泌體,與THP-1源性巨噬細胞共孵育,共聚焦顯微鏡下觀察巨噬細胞攝入外泌體的情況;采用microRNA基因芯片對兩組細胞外泌體中含有的miRNA的表達譜進行差異分析,并采用實時熒光定量PCR(qRT-PCR)對其中四個差異表達miRNA進行驗證;生物信息學軟件mirdbv6和targets...

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【學位級別】：碩士

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摘要
Abstract
中英文對照縮略詞表
第1章 緒論
第2章 實驗材料
    2.1 主要實驗儀器
    2.2 細胞株
    2.3 實驗試劑
第3章 實驗方法
    3.1 人胃癌SGC-7901細胞的復蘇、培養(yǎng)、傳代及保存
    3.2 THP-1 細胞復蘇、培養(yǎng)及PMA誘導分化
    3.3 H.pylori的復蘇、培養(yǎng)及凍存
    3.4 超速離心法分離外泌體
    3.5 SBI Exo Quick-TC試劑盒提取外泌體
    3.6 NTA粒徑檢測
    3.7 透射電子顯微鏡觀察外泌體形態(tài)
    3.8 Western-blot法檢測CD63、CD9、TSG101和Calnexin標志蛋白的表達
    3.9 激光共聚焦檢測THP-1細胞內(nèi)吞外泌體
    3.10 基因芯片篩選差異表達miRNA
    3.11 qRT-PCR驗證miR-10a-5p、miR-382-5p、miR-520f-3p和miR-3178的表達情況
    3.12 靶基因網(wǎng)絡構建
    3.13 數(shù)據(jù)分析
第4章 實驗結果
    4.1 H.pylori誘導的SGC-7901源性外泌體的分離及鑒定
    4.2 PMA誘導的THP-1 巨噬細胞內(nèi)吞外泌體
    4.3 miRNA芯片掃描
    4.4 外泌體中差異表達miRNA的篩選
    4.5 靶基因預測及GO、KEGG Pathway富集分析
    4.6 miR-10a-5p、 mi R-382-5p、 mi R-520f-3p和 mi R-3178 在Hp-7901-exo中的表達情況
    4.7 miR-10a-5p、miR-382-5p、miR-520f-3p和 mi R-3178 靶基因網(wǎng)絡的構建
第5章 討論
第6章 結論
參考文獻
綜述
    參考文獻
基金項目
碩士在讀期間發(fā)表的科研成果
致謝



本文編號：3801381