發(fā)布時(shí)間：2023-04-26 00:38

　　目的:外泌體(Exosomes)是介導(dǎo)細(xì)胞間信息交流的又一新的載體,其介導(dǎo)的細(xì)胞間信息傳遞在免疫反應(yīng)、炎癥和腫瘤等過程中發(fā)揮重要作用。本實(shí)驗(yàn)擬分離、鑒定幽門螺桿菌(Helicobacter pylori,H.pylori)誘導(dǎo)的人胃癌SGC-7901細(xì)胞源性外泌體,使用miRNA芯片篩選其中差異表達(dá)微小RNA(microRNA,miRNA),通過生物信息學(xué)分析其潛在的靶基因及可能參與的信號通路,為進(jìn)一步闡明H.pylori的致癌機(jī)制提供新線索。方法:使用H.pylori活菌體外刺激人胃癌SGC-7901細(xì)胞24h,以空白處理組為對照,采用超高速離心法和外泌體提取試劑盒提取兩組細(xì)胞釋放的外泌體,并采用透射電子顯微鏡、納米粒子跟蹤分析和Western-blot蛋白印跡實(shí)驗(yàn)進(jìn)行鑒定;熒光染料PKH67標(biāo)記外泌體,與THP-1源性巨噬細(xì)胞共孵育,共聚焦顯微鏡下觀察巨噬細(xì)胞攝入外泌體的情況;采用microRNA基因芯片對兩組細(xì)胞外泌體中含有的miRNA的表達(dá)譜進(jìn)行差異分析,并采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR(qRT-PCR)對其中四個差異表達(dá)miRNA進(jìn)行驗(yàn)證;生物信息學(xué)軟件mirdbv6和targets...

【文章頁數(shù)】：77 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
中英文對照縮略詞表
第1章 緒論
第2章 實(shí)驗(yàn)材料
    2.1 主要實(shí)驗(yàn)儀器
    2.2 細(xì)胞株
    2.3 實(shí)驗(yàn)試劑
第3章 實(shí)驗(yàn)方法
    3.1 人胃癌SGC-7901細(xì)胞的復(fù)蘇、培養(yǎng)、傳代及保存
    3.2 THP-1 細(xì)胞復(fù)蘇、培養(yǎng)及PMA誘導(dǎo)分化
    3.3 H.pylori的復(fù)蘇、培養(yǎng)及凍存
    3.4 超速離心法分離外泌體
    3.5 SBI Exo Quick-TC試劑盒提取外泌體
    3.6 NTA粒徑檢測
    3.7 透射電子顯微鏡觀察外泌體形態(tài)
    3.8 Western-blot法檢測CD63、CD9、TSG101和Calnexin標(biāo)志蛋白的表達(dá)
    3.9 激光共聚焦檢測THP-1細(xì)胞內(nèi)吞外泌體
    3.10 基因芯片篩選差異表達(dá)miRNA
    3.11 qRT-PCR驗(yàn)證miR-10a-5p、miR-382-5p、miR-520f-3p和miR-3178的表達(dá)情況
    3.12 靶基因網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建
    3.13 數(shù)據(jù)分析
第4章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    4.1 H.pylori誘導(dǎo)的SGC-7901源性外泌體的分離及鑒定
    4.2 PMA誘導(dǎo)的THP-1 巨噬細(xì)胞內(nèi)吞外泌體
    4.3 miRNA芯片掃描
    4.4 外泌體中差異表達(dá)miRNA的篩選
    4.5 靶基因預(yù)測及GO、KEGG Pathway富集分析
    4.6 miR-10a-5p、 mi R-382-5p、 mi R-520f-3p和 mi R-3178 在Hp-7901-exo中的表達(dá)情況
    4.7 miR-10a-5p、miR-382-5p、miR-520f-3p和 mi R-3178 靶基因網(wǎng)絡(luò)的構(gòu)建
第5章 討論
第6章 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
綜述
    參考文獻(xiàn)
基金項(xiàng)目
碩士在讀期間發(fā)表的科研成果
致謝



本文編號：3801381