目的:肝細(xì)胞癌(HCC)是世界范圍內(nèi)最常見的惡性腫瘤之一,以預(yù)后差,易發(fā)生早期轉(zhuǎn)移為著。從全球范圍來看,慢性乙型肝炎病毒(HBV)以及丙型肝炎病毒(HCV)感染占全世界肝癌患者的75%-80%,其中,撒哈拉以南非洲和東亞是肝細(xì)胞癌的重災(zāi)區(qū),中國(guó)肝癌患者數(shù)量就達(dá)世界患者總數(shù)的50%以上,這與其巨大的HBV感染人群是分不開的。早期浸潤(rùn)、轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)等生物學(xué)行為,使得肝癌的臨床治療成為當(dāng)今難以攻克的課題,其中上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化(EMT)被認(rèn)為是腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移的關(guān)鍵步驟,腫瘤細(xì)胞通過EMT過程獲取了強(qiáng)大的侵襲和轉(zhuǎn)移能力,可以脫離原發(fā)灶向其他組織和器官運(yùn)動(dòng),而同時(shí),HBV的X基因所表達(dá)的X蛋白(HBx)在促進(jìn)肝細(xì)胞癌的上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化過程,參與腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移,推動(dòng)腫瘤的進(jìn)展中,發(fā)揮重要作用。為了研究HBx促進(jìn)肝細(xì)胞癌上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化的機(jī)制,本課題擬明確HBx是否可以通過circRNA/miRNA/mRNA的內(nèi)源競(jìng)爭(zhēng)RNA機(jī)制(ceRNA)促進(jìn)肝細(xì)胞癌的上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化過程,并找出其中發(fā)揮關(guān)鍵作用的circRNA,研究其促進(jìn)腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移的具體機(jī)制。研究方法:首先選擇HepG2細(xì)胞系作為主要研究細(xì)胞,并使用慢病...

【文章頁(yè)數(shù)】：112 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
英文縮略語(yǔ)
第一部分 :HBx通過誘導(dǎo)HepG2 細(xì)胞上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化促進(jìn)侵襲能力
    1 前言
    2 材料與方法
        2.1 主要試劑和儀器
            2.1.1 主要試劑
            2.1.2 主要實(shí)驗(yàn)儀器
        2.2 研究對(duì)象和分組
        2.3 研究方法
            2.3.1 細(xì)胞復(fù)蘇
            2.3.2 細(xì)胞傳代
            2.3.3 細(xì)胞凍存
            2.3.4 過表達(dá)載體的構(gòu)建
            2.3.5 慢病毒轉(zhuǎn)染
            2.3.6 穩(wěn)轉(zhuǎn)株篩選
            2.3.7 細(xì)胞染色
            2.3.8 Western Bolt
            2.3.9 Transwell侵襲遷移實(shí)驗(yàn)
            2.3.10 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理
    3 結(jié)果
        3.1HBx穩(wěn)定過表達(dá)HepG2 細(xì)胞發(fā)生上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化,E-cadherin蛋白低表達(dá),N-cadherin和 Vinmentin蛋白高表達(dá),侵襲遷移能力增強(qiáng)
    4.討論
    5.結(jié)論
第二部分 :對(duì)HBx過表達(dá)HepG2 細(xì)胞與對(duì)照組細(xì)胞高通量測(cè)序篩選目的基因,關(guān)聯(lián)分析預(yù)測(cè)并驗(yàn)證
    6 前言
    7 材料與方法
        7.1 主要實(shí)驗(yàn)材料和儀器
            7.1.1 主要試劑
            7.1.2 主要實(shí)驗(yàn)儀器
        7.2 研究對(duì)象和分組
        7.3 研究方法
            7.3.1 細(xì)胞復(fù)蘇
            7.3.2 細(xì)胞傳代
            7.3.3 細(xì)胞凍存
            7.3.4 RNA樣品檢測(cè)
            7.3.5 文庫(kù)構(gòu)建
            7.3.6 庫(kù)檢
            7.3.7 上機(jī)測(cè)序
            7.3.8 測(cè)序數(shù)據(jù)質(zhì)量評(píng)估
            7.3.9 對(duì)比分析
            7.3.10 CircRNA鑒定
            7.3.11 CircRNA定量分析
            7.3.12 CircRNA差異分析
            7.3.13 ceRNA關(guān)聯(lián)分析
            7.3.14 實(shí)時(shí)熒光定量PCR
            7.3.15 TA克隆測(cè)序
            7.3.16 FISH實(shí)驗(yàn)
            7.3.17 雙熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)
            7.3.18 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理
    8 結(jié)果
        8.1 CircCYP24A1在HBx過表達(dá)組表達(dá)明顯升高,且與miR-506和Snail2 可能存在ceRNA調(diào)節(jié)機(jī)制
    9 討論
    10 結(jié)論
第三部分 :在HBx誘導(dǎo)肝細(xì)胞癌上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化過程中,circCYP24A1 發(fā)揮的作用機(jī)制研究
    11 前言
    12 材料和方法
        12.1 主要試劑和儀器
            12.1.1 主要試劑
            12.1.2 主要儀器
        12.2 研究細(xì)胞
        12.3 研究方法
            12.3.1 細(xì)胞復(fù)蘇
            12.3.2 細(xì)胞傳代
            12.3.3 細(xì)胞凍存
            12.3.4 RNA干擾載體構(gòu)建
            12.3.5 慢病毒轉(zhuǎn)染
            12.3.6 穩(wěn)轉(zhuǎn)株篩選
            12.3.7 過表達(dá)載體構(gòu)建
            12.3.8 過表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染
            12.3.9 實(shí)時(shí)熒光定量PCR
            12.3.10 細(xì)胞染色
            12.3.11 Western Bolt
            12.3.12 Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)
            12.3.13 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理
    13 結(jié)果
        13.1 在HBx過表達(dá)細(xì)胞中,干擾circCYP24A1 表達(dá),上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化程度下降
        13.2 Hep G2 細(xì)胞過表達(dá)circCYP24A1,上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化程度增強(qiáng),侵襲轉(zhuǎn)移能力增強(qiáng)
    14 討論
    15 結(jié)論
本研究創(chuàng)新性自我評(píng)價(jià)
參考文獻(xiàn)
文獻(xiàn)綜述
    參考文獻(xiàn)
在學(xué)期間科研成績(jī)
致謝
個(gè)人簡(jiǎn)介



本文編號(hào)：3796478