發(fā)布時間：2023-04-21 23:41

　　目的:肝細胞癌(HCC)是世界范圍內(nèi)最常見的惡性腫瘤之一,以預(yù)后差,易發(fā)生早期轉(zhuǎn)移為著。從全球范圍來看,慢性乙型肝炎病毒(HBV)以及丙型肝炎病毒(HCV)感染占全世界肝癌患者的75%-80%,其中,撒哈拉以南非洲和東亞是肝細胞癌的重災(zāi)區(qū),中國肝癌患者數(shù)量就達世界患者總數(shù)的50%以上,這與其巨大的HBV感染人群是分不開的。早期浸潤、轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)等生物學行為,使得肝癌的臨床治療成為當今難以攻克的課題,其中上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化(EMT)被認為是腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移的關(guān)鍵步驟,腫瘤細胞通過EMT過程獲取了強大的侵襲和轉(zhuǎn)移能力,可以脫離原發(fā)灶向其他組織和器官運動,而同時,HBV的X基因所表達的X蛋白(HBx)在促進肝細胞癌的上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化過程,參與腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移,推動腫瘤的進展中,發(fā)揮重要作用。為了研究HBx促進肝細胞癌上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化的機制,本課題擬明確HBx是否可以通過circRNA/miRNA/mRNA的內(nèi)源競爭RNA機制(ceRNA)促進肝細胞癌的上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化過程,并找出其中發(fā)揮關(guān)鍵作用的circRNA,研究其促進腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移的具體機制。研究方法:首先選擇HepG2細胞系作為主要研究細胞,并使用慢病...

【文章頁數(shù)】：112 頁

【學位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
英文縮略語
第一部分 :HBx通過誘導(dǎo)HepG2 細胞上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化促進侵襲能力
    1 前言
    2 材料與方法
        2.1 主要試劑和儀器
            2.1.1 主要試劑
            2.1.2 主要實驗儀器
        2.2 研究對象和分組
        2.3 研究方法
            2.3.1 細胞復(fù)蘇
            2.3.2 細胞傳代
            2.3.3 細胞凍存
            2.3.4 過表達載體的構(gòu)建
            2.3.5 慢病毒轉(zhuǎn)染
            2.3.6 穩(wěn)轉(zhuǎn)株篩選
            2.3.7 細胞染色
            2.3.8 Western Bolt
            2.3.9 Transwell侵襲遷移實驗
            2.3.10 統(tǒng)計學處理
    3 結(jié)果
        3.1HBx穩(wěn)定過表達HepG2 細胞發(fā)生上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化,E-cadherin蛋白低表達,N-cadherin和 Vinmentin蛋白高表達,侵襲遷移能力增強
    4.討論
    5.結(jié)論
第二部分 :對HBx過表達HepG2 細胞與對照組細胞高通量測序篩選目的基因,關(guān)聯(lián)分析預(yù)測并驗證
    6 前言
    7 材料與方法
        7.1 主要實驗材料和儀器
            7.1.1 主要試劑
            7.1.2 主要實驗儀器
        7.2 研究對象和分組
        7.3 研究方法
            7.3.1 細胞復(fù)蘇
            7.3.2 細胞傳代
            7.3.3 細胞凍存
            7.3.4 RNA樣品檢測
            7.3.5 文庫構(gòu)建
            7.3.6 庫檢
            7.3.7 上機測序
            7.3.8 測序數(shù)據(jù)質(zhì)量評估
            7.3.9 對比分析
            7.3.10 CircRNA鑒定
            7.3.11 CircRNA定量分析
            7.3.12 CircRNA差異分析
            7.3.13 ceRNA關(guān)聯(lián)分析
            7.3.14 實時熒光定量PCR
            7.3.15 TA克隆測序
            7.3.16 FISH實驗
            7.3.17 雙熒光素酶報告基因?qū)嶒?br>            7.3.18 統(tǒng)計學處理
    8 結(jié)果
        8.1 CircCYP24A1在HBx過表達組表達明顯升高,且與miR-506和Snail2 可能存在ceRNA調(diào)節(jié)機制
    9 討論
    10 結(jié)論
第三部分 :在HBx誘導(dǎo)肝細胞癌上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化過程中,circCYP24A1 發(fā)揮的作用機制研究
    11 前言
    12 材料和方法
        12.1 主要試劑和儀器
            12.1.1 主要試劑
            12.1.2 主要儀器
        12.2 研究細胞
        12.3 研究方法
            12.3.1 細胞復(fù)蘇
            12.3.2 細胞傳代
            12.3.3 細胞凍存
            12.3.4 RNA干擾載體構(gòu)建
            12.3.5 慢病毒轉(zhuǎn)染
            12.3.6 穩(wěn)轉(zhuǎn)株篩選
            12.3.7 過表達載體構(gòu)建
            12.3.8 過表達質(zhì)粒轉(zhuǎn)染
            12.3.9 實時熒光定量PCR
            12.3.10 細胞染色
            12.3.11 Western Bolt
            12.3.12 Transwell侵襲實驗
            12.3.13 統(tǒng)計學處理
    13 結(jié)果
        13.1 在HBx過表達細胞中,干擾circCYP24A1 表達,上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化程度下降
        13.2 Hep G2 細胞過表達circCYP24A1,上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化程度增強,侵襲轉(zhuǎn)移能力增強
    14 討論
    15 結(jié)論
本研究創(chuàng)新性自我評價
參考文獻
文獻綜述
    參考文獻
在學期間科研成績
致謝
個人簡介



本文編號：3796478