目的:構(gòu)建人源CK2催化亞基pET-28a(+)-hcsnk2a1和pET-28a(+)-hcsnk2a2重組質(zhì)粒,并進(jìn)行原核表達(dá)純化得到高純度融合蛋白,為進(jìn)一步開(kāi)展CK2生理病理機(jī)制研究以及CK2作為腫瘤抑制靶點(diǎn)相關(guān)抑制劑的篩選和評(píng)價(jià)提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。方法:利用合成的人源csnk2a1和csnk2a2目的基因片段,將酶切連接得到的重組質(zhì)粒經(jīng)測(cè)序驗(yàn)證后,進(jìn)行大腸桿菌感受態(tài)BL21 (DE3)/Transetta (DE3)轉(zhuǎn)化。使用合適濃度IPTG誘導(dǎo)融合蛋白的表達(dá)以得到可溶性的融合蛋白,并應(yīng)用AKTA avant蛋白純化儀和Ni2+-NTA預(yù)裝柱進(jìn)行純化,蛋白純度最后經(jīng)SDS-PAGE膠分離后考馬斯亮藍(lán)染色和Western Blot檢測(cè)鑒定。結(jié)果:測(cè)序結(jié)果表明pET-28a(+)-hcsnk2a1和pET-28a(+)-hcsnk2a2質(zhì)粒均成功被構(gòu)建;經(jīng)轉(zhuǎn)化誘導(dǎo)表達(dá)后,成功純化得到相對(duì)分子量為42KD的his-hcsnk2a1和38KD的his-hcsnk2a2目的融合蛋白。結(jié)論:首次成功構(gòu)建得到pET-28a(+)-hcsnk2a1和pET-28a(+)-hcsnk2a2質(zhì)粒;并表達(dá)...

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【文章目錄】：
前言
1 材料與方法
    1.1 材料
    1.2 方法
        1.2.1 p ET-28a(+)-hcsnk2a1/pET-28a(+)-hcsnk2a2質(zhì)粒的構(gòu)建
        1.2.2 原核融合蛋白的預(yù)表達(dá)
        1.2.3 原核融合蛋白的純化
        1.2.4 His-tag融合蛋白的檢測(cè)
2 結(jié)果
    2.1 pET-28a(+)hcsnk2a1質(zhì)粒的構(gòu)建
    2.2 原核融合蛋白的預(yù)表達(dá)
        2.2.1 pET-28a(+)hcsnk2a1的預(yù)表達(dá)
        2.2.2 p ET-28a(+)hcsnk2a2的預(yù)表達(dá)
    2.3 融合蛋白的純化與檢測(cè)
        2.3.1 p ET-28a(+)hcsnk2a1的純化與檢測(cè)
        2.3.2 pET-28a(+)hcsnk2a2的純化與檢測(cè)
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