發(fā)布時間：2023-04-03 01:50

　　研究表明,慢性炎癥與癌癥密切相關(guān),而轉(zhuǎn)錄因子NF-κB和STAT3是連接炎癥和腫瘤發(fā)生的兩個關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄因子。在腫瘤微環(huán)境中,炎性細胞分泌大量的炎癥因子,如TNF-α、IL-6,激活NF-κB和STAT3。激活的NF-κB和STAT3誘導(dǎo)一系列促癌蛋白的表達,促進腫瘤的起始、促進和進展。NF-κB-IL-6-STAT3信號轉(zhuǎn)導(dǎo)已被證實在慢性炎癥介導(dǎo)的腫瘤發(fā)生中起著重要作用。在正常生理條件下,STAT3的激活在多個層面受到多種機制嚴(yán)格的調(diào)控。我們通過大規(guī)模系統(tǒng)篩選人源和鼠源共約13000個cDNA表達克隆尋找新的參與調(diào)控IL-6-STAT3信號通路的分子,并最終鑒定出能夠調(diào)節(jié)STAT3活性的分子PASD1。PASD1是一個新發(fā)現(xiàn)的癌癥／睪丸抗原,其生物學(xué)功能并不清楚。在我們的研究中,PASD1過量表達特異性激活STAT3并促進IL-6誘導(dǎo)的STAT3的激活；而下調(diào)PASD1內(nèi)源基因的表達則顯著抑制IL-6誘導(dǎo)的STAT3激活。接著我們發(fā)現(xiàn),PASD1與STAT3在細胞核里相互作用并調(diào)節(jié)其磷酸化。PASD1過量表達顯著增強IL-6誘導(dǎo)的STAT3磷酸化,而PASD1表達下調(diào)則明顯抑制IL-6誘...

【文章頁數(shù)】：114 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
1. 前言
    1.1 慢性炎癥與腫瘤概述
        1.1.1 慢性炎癥和非可控性炎癥
        1.1.2 炎癥與腫瘤微環(huán)境
        1.1.3 NF-κB-IL-6-STAT3在腫瘤發(fā)生中的作用
    1.2 JAK-STAT信號轉(zhuǎn)導(dǎo)與調(diào)控機制
        1.2.1 JAK-STAT信號通路的發(fā)現(xiàn)
        1.2.2 JAK-STAT信號轉(zhuǎn)導(dǎo)機制
            1.2.2.1 Ⅰ型和Ⅱ型細胞因子受體
            1.2.2.2 JAKs概述
                1.2.2.2.1 JAKs的結(jié)構(gòu)
                1.2.2.2.2 JAKs的功能
            1.2.2.3 STATs概述
                1.2.2.3.1 STATs的結(jié)構(gòu)
                1.2.2.3.2 STATs的功能
        1.2.3 JAK-STAT信號轉(zhuǎn)導(dǎo)調(diào)控機制
            1.2.3.1 受體水平上的調(diào)節(jié)
            1.2.3.2 JAKs水平上的調(diào)節(jié)
                1.2.3.2.1 SOCS家族蛋白
                1.2.3.2.2 蛋白酪氨酸磷酸酶
                1.2.3.2.3 泛素化和ISG化
            1.2.3.3 STATs水平的調(diào)控
                1.2.3.3.1 STATs的翻譯后修飾調(diào)控
                1.2.3.3.2 STATs的泛素化、ISG化和SUMO化修飾
                1.2.3.3.3 PIAS家族蛋白對STATs的調(diào)控
                1.2.3.3.4 蛋白酪氨酸磷酸酶
                1.2.3.3.5 STATs的核質(zhì)穿梭
                1.2.3.3.6 共轉(zhuǎn)錄因子/轉(zhuǎn)錄因子對STAT的調(diào)控
    1.3 癌癥/睪丸抗原概述
        1.3.1 癌癥/睪丸抗原的發(fā)現(xiàn)
        1.3.2 癌癥/睪丸抗原的分類
        1.3.3 癌癥/睪丸抗原的重新激活機制
        1.3.4 癌癥/睪丸抗原的功能
            1.3.4.1 癌癥/睪丸抗原在腫瘤中的作用
            1.3.4.2 癌癥/睪丸抗原在精子發(fā)生過程中的功能
        1.3.5 癌癥/睪丸抗原的臨床應(yīng)用
2. 實驗材料與方法
    2.1 實驗材料
        2.1.1 細胞、細胞培養(yǎng)和細胞因子
        2.1.2 載體構(gòu)建所需材料和試劑
        2.1.3 熒光素酶報告基因?qū)嶒炏嚓P(guān)材料
        2.1.4 實時熒光定量PCR試劑
        2.1.5 免疫共沉淀以及Western Blot實驗相關(guān)材料
        2.1.6 克隆形成實驗和MTT實驗相關(guān)材料
        2.1.7 實驗所用動物
    2.2 實驗方法
        2.2.1 載體構(gòu)建和質(zhì)粒提取
        2.2.2 細胞培養(yǎng)和瞬時轉(zhuǎn)染
        2.2.3 熒光素酶報告基因?qū)嶒?br>        2.2.4 RT-PCR實驗
        2.2.5 免疫共沉淀及Western blot實驗
            2.2.5.1 過量表達蛋白免疫共沉淀實驗
            2.2.5.2 內(nèi)源性蛋白免疫共沉淀實驗
            2.2.5.3 Western blot實驗
        2.2.6 逆轉(zhuǎn)錄病毒介導(dǎo)的RNAi穩(wěn)定細胞系的構(gòu)建
        2.2.7 MTT實驗
        2.2.8 軟瓊脂培養(yǎng)克隆形成實驗
        2.2.9 傷口愈合實驗
        2.2.10 裸鼠成瘤實驗
        2.2.11 重組蛋白的原核表達和純化
3. 實驗結(jié)果與討論
    3.1 立項依據(jù)
    3.2 實驗結(jié)果
        3.2.1 篩選調(diào)控IL-6-STAT3信號通路的候選蛋白
        3.2.2 PASD1的過量表達特異性地激活STAT3信號通路
        3.2.3 PASD1的表達下調(diào)抑制IL-6誘導(dǎo)的STAT3信號轉(zhuǎn)導(dǎo)
        3.2.4 PASD1與STAT3相互作用
        3.2.5 PASD1調(diào)節(jié)STTA3的磷酸化
        3.2.6 PASD1抑制TC45對STAT3的去磷酸化
        3.2.7 PASD1影響腫瘤細胞的增殖、不依賴錨定的生長以及遷移
        3.2.8 PASD1在體內(nèi)促進腫瘤的生長
    3.3 小結(jié)與討論
4. 研究總結(jié)與展望
參考文獻
縮略詞表
作者簡介
發(fā)表論文
致謝



本文編號：3780406