研究表明,慢性炎癥與癌癥密切相關(guān),而轉(zhuǎn)錄因子NF-κB和STAT3是連接炎癥和腫瘤發(fā)生的兩個(gè)關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄因子。在腫瘤微環(huán)境中,炎性細(xì)胞分泌大量的炎癥因子,如TNF-α、IL-6,激活NF-κB和STAT3。激活的NF-κB和STAT3誘導(dǎo)一系列促癌蛋白的表達(dá),促進(jìn)腫瘤的起始、促進(jìn)和進(jìn)展。NF-κB-IL-6-STAT3信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)已被證實(shí)在慢性炎癥介導(dǎo)的腫瘤發(fā)生中起著重要作用。在正常生理?xiàng)l件下,STAT3的激活在多個(gè)層面受到多種機(jī)制嚴(yán)格的調(diào)控。我們通過大規(guī)模系統(tǒng)篩選人源和鼠源共約13000個(gè)cDNA表達(dá)克隆尋找新的參與調(diào)控IL-6-STAT3信號(hào)通路的分子,并最終鑒定出能夠調(diào)節(jié)STAT3活性的分子PASD1。PASD1是一個(gè)新發(fā)現(xiàn)的癌癥／睪丸抗原,其生物學(xué)功能并不清楚。在我們的研究中,PASD1過量表達(dá)特異性激活STAT3并促進(jìn)IL-6誘導(dǎo)的STAT3的激活；而下調(diào)PASD1內(nèi)源基因的表達(dá)則顯著抑制IL-6誘導(dǎo)的STAT3激活。接著我們發(fā)現(xiàn),PASD1與STAT3在細(xì)胞核里相互作用并調(diào)節(jié)其磷酸化。PASD1過量表達(dá)顯著增強(qiáng)IL-6誘導(dǎo)的STAT3磷酸化,而PASD1表達(dá)下調(diào)則明顯抑制IL-6誘...

【文章頁數(shù)】：114 頁

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
1. 前言
    1.1 慢性炎癥與腫瘤概述
        1.1.1 慢性炎癥和非可控性炎癥
        1.1.2 炎癥與腫瘤微環(huán)境
        1.1.3 NF-κB-IL-6-STAT3在腫瘤發(fā)生中的作用
    1.2 JAK-STAT信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)與調(diào)控機(jī)制
        1.2.1 JAK-STAT信號(hào)通路的發(fā)現(xiàn)
        1.2.2 JAK-STAT信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制
            1.2.2.1 Ⅰ型和Ⅱ型細(xì)胞因子受體
            1.2.2.2 JAKs概述
                1.2.2.2.1 JAKs的結(jié)構(gòu)
                1.2.2.2.2 JAKs的功能
            1.2.2.3 STATs概述
                1.2.2.3.1 STATs的結(jié)構(gòu)
                1.2.2.3.2 STATs的功能
        1.2.3 JAK-STAT信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)調(diào)控機(jī)制
            1.2.3.1 受體水平上的調(diào)節(jié)
            1.2.3.2 JAKs水平上的調(diào)節(jié)
                1.2.3.2.1 SOCS家族蛋白
                1.2.3.2.2 蛋白酪氨酸磷酸酶
                1.2.3.2.3 泛素化和ISG化
            1.2.3.3 STATs水平的調(diào)控
                1.2.3.3.1 STATs的翻譯后修飾調(diào)控
                1.2.3.3.2 STATs的泛素化、ISG化和SUMO化修飾
                1.2.3.3.3 PIAS家族蛋白對(duì)STATs的調(diào)控
                1.2.3.3.4 蛋白酪氨酸磷酸酶
                1.2.3.3.5 STATs的核質(zhì)穿梭
                1.2.3.3.6 共轉(zhuǎn)錄因子/轉(zhuǎn)錄因子對(duì)STAT的調(diào)控
    1.3 癌癥/睪丸抗原概述
        1.3.1 癌癥/睪丸抗原的發(fā)現(xiàn)
        1.3.2 癌癥/睪丸抗原的分類
        1.3.3 癌癥/睪丸抗原的重新激活機(jī)制
        1.3.4 癌癥/睪丸抗原的功能
            1.3.4.1 癌癥/睪丸抗原在腫瘤中的作用
            1.3.4.2 癌癥/睪丸抗原在精子發(fā)生過程中的功能
        1.3.5 癌癥/睪丸抗原的臨床應(yīng)用
2. 實(shí)驗(yàn)材料與方法
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 細(xì)胞、細(xì)胞培養(yǎng)和細(xì)胞因子
        2.1.2 載體構(gòu)建所需材料和試劑
        2.1.3 熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)相關(guān)材料
        2.1.4 實(shí)時(shí)熒光定量PCR試劑
        2.1.5 免疫共沉淀以及Western Blot實(shí)驗(yàn)相關(guān)材料
        2.1.6 克隆形成實(shí)驗(yàn)和MTT實(shí)驗(yàn)相關(guān)材料
        2.1.7 實(shí)驗(yàn)所用動(dòng)物
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 載體構(gòu)建和質(zhì)粒提取
        2.2.2 細(xì)胞培養(yǎng)和瞬時(shí)轉(zhuǎn)染
        2.2.3 熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)
        2.2.4 RT-PCR實(shí)驗(yàn)
        2.2.5 免疫共沉淀及Western blot實(shí)驗(yàn)
            2.2.5.1 過量表達(dá)蛋白免疫共沉淀實(shí)驗(yàn)
            2.2.5.2 內(nèi)源性蛋白免疫共沉淀實(shí)驗(yàn)
            2.2.5.3 Western blot實(shí)驗(yàn)
        2.2.6 逆轉(zhuǎn)錄病毒介導(dǎo)的RNAi穩(wěn)定細(xì)胞系的構(gòu)建
        2.2.7 MTT實(shí)驗(yàn)
        2.2.8 軟瓊脂培養(yǎng)克隆形成實(shí)驗(yàn)
        2.2.9 傷口愈合實(shí)驗(yàn)
        2.2.10 裸鼠成瘤實(shí)驗(yàn)
        2.2.11 重組蛋白的原核表達(dá)和純化
3. 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與討論
    3.1 立項(xiàng)依據(jù)
    3.2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.2.1 篩選調(diào)控IL-6-STAT3信號(hào)通路的候選蛋白
        3.2.2 PASD1的過量表達(dá)特異性地激活STAT3信號(hào)通路
        3.2.3 PASD1的表達(dá)下調(diào)抑制IL-6誘導(dǎo)的STAT3信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)
        3.2.4 PASD1與STAT3相互作用
        3.2.5 PASD1調(diào)節(jié)STTA3的磷酸化
        3.2.6 PASD1抑制TC45對(duì)STAT3的去磷酸化
        3.2.7 PASD1影響腫瘤細(xì)胞的增殖、不依賴錨定的生長(zhǎng)以及遷移
        3.2.8 PASD1在體內(nèi)促進(jìn)腫瘤的生長(zhǎng)
    3.3 小結(jié)與討論
4. 研究總結(jié)與展望
參考文獻(xiàn)
縮略詞表
作者簡(jiǎn)介
發(fā)表論文
致謝



本文編號(hào)：3780406