發(fā)布時間：2023-03-24 20:47

　　乳腺癌是女性常見的惡性腫瘤,其發(fā)病率居女性惡性腫瘤的首位。盡管隨著早期診斷和綜合治療(包括外科手術、輔助放化療、內分泌治療、免疫治療以及靶向治療)的開展,在一定程度上獲得了較好的治療效果,但是由于乳腺癌容易產生耐藥和高轉移的特點,造成乳腺癌容易愈后復發(fā)。因此探究更加安全有效地治療乳腺癌的策略研究,具有重要的科學意義與現實價值。環(huán)氧合酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)是催化花生四烯酸(Arachidonic acid,AA)生成前列腺素類物質(PGs)的關鍵限速酶。多項研究表明,COX-2在乳腺癌細胞中過度表達,參與乳腺癌細胞的細胞增殖與凋亡、免疫抑制、誘導生成各種致癌物質、促進血管生成因子的產生導致乳腺癌細胞遷移浸潤等,因此COX-2已成為治療乳腺癌的一個重要潛在靶點。通過基因工程手段使抗體在細胞內表達的胞內抗體技術,能實現靶向干擾和阻斷細胞內抗原蛋白的轉錄、翻譯、加工和修飾等過程。因此,本實驗室前期成功構建抗COX-2胞內抗體Intra-OX-1。實驗研究發(fā)現,該胞內抗體能有效的與肝癌細胞內的COX-2結合,抑制肝癌細胞的生長與增殖,促進肝癌細胞的凋亡,具有良好的...

【文章頁數】：67 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
Abstract
第一章 引言
    1.1 乳腺癌治療現狀
    1.2 COX-2與乳腺癌
        1.2.1 COX-2的發(fā)現
        1.2.2 COX-2的基本特性
        1.2.3 COX-2與腫瘤
        1.2.4 COX-2與乳腺癌
    1.3 胞內抗體
        1.3.1 胞內抗體的生物學功能
        1.3.2 胞內抗體的應用
    1.4 本論文立題目的與意義
第二章 實驗材料和方法
    2.1 實驗材料
        2.1.1 細胞株及質粒
        2.1.2 主要藥品及試劑
        2.1.3 引物
        2.1.4 試劑配制
        2.1.5 實驗儀器
    2.2 實驗方法
        2.2.1 提取去內毒素含抗體的質粒
        2.2.2 乳腺癌細胞的培養(yǎng)
        2.2.3 細胞轉染
        2.2.4 RT-PCR實驗
        2.2.5 逆轉錄(RT)反應
        2.2.6 間接免疫熒光實驗
        2.2.7 Western blot分析
        2.2.8 集落形成實驗
        2.2.9 AnnexinV/PI雙染流式細胞術檢測分析
        2.2.10 MTT檢測法
        2.2.11 劃痕實驗
        2.2.12 Transwell體外侵襲實驗
        2.2.13 實時定量PCR
第三章 實驗結果
    3.1 MCF-7細胞中COX-2的表達
    3.2 胞內抗體在乳腺癌MCF-7細胞中的瞬時表達
        3.2.1 RT-PCR檢測胞內抗體的表達
        3.2.2 Western-blot檢測瞬時轉染細胞株內胞內抗體的表達
        3.2.3 間接免疫熒光檢測瞬時轉染細胞內胞內抗體的表達
    3.3 穩(wěn)定細胞系的鑒定
    3.4 胞內抗體與內源COX-2的結合
    3.5 Intra-OX-1抑制了MCF-7細胞的生長與增殖
    3.6 Intra-OX-1促進MCF-7細胞的凋亡
    3.7 Intra-OX-1抑制MCF-7細胞遷移
    3.8 Intra-OX-1抑制MCF-7細胞體外侵襲
    3.9 Intra-OX-1對MCF-7細胞相關因子的影響
第四章 討論
    4.1 以COX-2為靶點的乳腺癌治療策略
    4.2 靶向COX-2胞內抗體抑瘤效應的可能分子機制
第五章 結論
參考文獻
作者簡介
攻讀碩士期間科研成果
致謝



本文編號：3769822