目的:本研究將使用MSP或BSP檢測前列腺癌組織、正常前列腺組織與前列腺癌細(xì)胞系(PC-3、DU145)及正常人前列腺上皮細(xì)胞(RWPE-1)中miR-34a的啟動子區(qū)甲基化水平;通過QPCR檢測獲取前列腺癌細(xì)胞系經(jīng)抑制甲基化處理前后的miR-34a及ATG4B的表達(dá)水平;通過雙熒光素酶報(bào)告基因檢測miR-34a與ATG4B在前列腺癌細(xì)胞中是否存在直接靶向性關(guān)系。以期為前列腺化療提供新的理論基礎(chǔ)及基因治療提供新的靶點(diǎn)。方法:第一部分,內(nèi)源檢測:1、收集前列腺癌組織與正常組織各25例,MSP檢測miR-34a啟動子甲基化狀態(tài);2、QPCR檢測癌癥組織與癌旁組織中miR-34a的mRNA表達(dá)水平;3、MSP檢測前列腺癌細(xì)胞系(PC-3、DU145)及正常人前列腺上皮細(xì)胞(RWPE-1)中miR-34a的啟動子區(qū)甲基化狀態(tài);4、QPCR 檢測 RWPE-1、PC-3、DU145 中 miR-34a、ATG4B 的 mRNA 表達(dá)水平。第二部分,靶基因驗(yàn)證:1、甲基化抑制劑5’-雜氮脫氧胞苷處理PC-3、DU145兩株前列腺癌細(xì)胞系(時間:48h濃度:10umol/L);2、miR-34a的模...

【文章頁數(shù)】：68 頁

【學(xué)位級別】：碩士

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主要縮略語表
第一章 前言
第二章 材料與方法
    1. 材料、細(xì)胞培養(yǎng)及MTT檢測前列腺癌細(xì)胞的生長
    2. MSP檢測miR-34a啟動子甲基化狀態(tài)
    3. Real-time PCR檢測
    4. Western Blot檢測凋亡相關(guān)蛋白及自噬相關(guān)蛋白的表達(dá)
    5. 雙螢光素酶實(shí)驗(yàn)檢測miR-34a是否靶向作用于ATG4B
    6. 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理
第三章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
第四章 討論
第五章 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
文獻(xiàn)綜述
    參考文獻(xiàn)
讀研期間主要研究成果
致謝



本文編號：3750014