發(fā)布時(shí)間：2022-09-17 12:02

　　目前的細(xì)胞株生物學(xué)特性與臨床標(biāo)本不符,臨床標(biāo)本細(xì)胞成分復(fù)雜、正常與異常細(xì)胞共存,以上已成為制約套細(xì)胞淋巴瘤（mantle cell lymphoma,MCL）發(fā)病機(jī)制研究的瓶頸。既往研究認(rèn)為MCL來(lái)源于CD19陽(yáng)性（CD19+）的成熟B細(xì)胞,而近期少許研究提示CD19陰性（CD19-）細(xì)胞可能是MCL的起源細(xì)胞,均預(yù)示MCL發(fā)病機(jī)制的復(fù)雜性。MCL惡性克隆發(fā)病機(jī)制研究嚴(yán)重不足,成為基礎(chǔ)與臨床研究急需解決的重要問(wèn)題,導(dǎo)致這一問(wèn)題的關(guān)鍵因素是優(yōu)良細(xì)胞模型的匱乏。因此建立生物學(xué)特性與臨床高度吻合的細(xì)胞株,將為打破發(fā)病機(jī)制研究實(shí)驗(yàn)瓶頸,為進(jìn)一步研究其發(fā)病機(jī)制提供可能。目的1建立包含CD19+并極大富集CD19-早期階段細(xì)胞,且生物學(xué)特性與臨床高度吻合的MCL惡性克隆細(xì)胞株。2利用新建立的細(xì)胞模型進(jìn)行MCL惡性克隆發(fā)病機(jī)制的研究,重點(diǎn)關(guān)注:MCL是單克隆還是多克隆腫瘤;惡性克隆生物學(xué)特性:聚焦異常發(fā)育階段,免疫表型,基因表達(dá)、體內(nèi)外腫瘤生物學(xué)特性。方法1 Je Ko-1-spheres細(xì)胞株的建立（1）球形生長(zhǎng)方式的鑒定:流式檢測(cè)比較Je Ko-1-parental細(xì)胞株球形生長(zhǎng)及單個(gè)懸浮兩種不... 

【文章頁(yè)數(shù)】：72 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
符號(hào)說(shuō)明
中文摘要
英文摘要
前言
第一部分 材料和方法
    第一章 材料
        1.1 細(xì)胞
        1.2 臨床標(biāo)本
        1.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        1.4 主要儀器設(shè)備
        1.5 主要試劑
    第二章 方法
        1.1 JeKo-1-parental及Jeko-1-spheres細(xì)胞株培養(yǎng)
            1.1.1 培養(yǎng)條件
            1.1.2 傳代
            1.1.3 JeKo-1-parental及Jeko-1-spheres細(xì)胞株的凍存
            1.1.4 細(xì)胞復(fù)蘇
            1.1.5 胎盤(pán)藍(lán)細(xì)胞活性檢測(cè)
        1.2 臨床標(biāo)本的培養(yǎng)
            1.2.1 納入標(biāo)準(zhǔn)
            1.2.2 排除標(biāo)準(zhǔn)
            1.2.3 采集
            1.2.4 單個(gè)核細(xì)胞的制備
                1.2.4.1 外周血分離PBMC
                1.2.4.2 骨髓液分離BMMNC
            1.2.5 凍存
            1.2.6 復(fù)蘇
            1.2.7 培養(yǎng)
        1.3 流式細(xì)胞分析
        1.4 邊群細(xì)胞分析
        1.5 流式分選
            1.5.1 細(xì)胞株分選方案
            1.5.2 PBMC和BMMNC分選方案
            1.5.3 標(biāo)本準(zhǔn)備
            1.5.4 細(xì)胞分選
        1.6 總RNA提取和qrt-PCR
            1.6.1 總RNA提取
            1.6.2 RNA完整性、純度檢測(cè)及濃度測(cè)定
            1.6.3 總RNA的逆轉(zhuǎn)錄
            1.6.4 PCR引物
            1.6.5 qrt-PCR
        1.7 甲基纖維素克隆成球?qū)嶒?yàn)
            1.7.1 細(xì)胞株實(shí)驗(yàn)
            1.7.2 細(xì)胞株CD19/IgM細(xì)胞亞群實(shí)驗(yàn)
            1.7.3 臨床標(biāo)本單個(gè)核細(xì)胞CD19/IgM細(xì)胞亞群實(shí)驗(yàn)
        1.8 NOD/SCID體內(nèi)成瘤實(shí)驗(yàn)
            1.8.1 細(xì)胞株體內(nèi)實(shí)驗(yàn)
            1.8.2 細(xì)胞株分選CD19/IgM細(xì)胞亞群體內(nèi)實(shí)驗(yàn)
            1.8.3 臨床標(biāo)本pt4分選CD19/IgM細(xì)胞亞群體內(nèi)實(shí)驗(yàn)
        1.9 免疫組織化學(xué)染色
            1.9.1 試劑配制
            1.9.2 試驗(yàn)方法
第二部分 結(jié)果
    第一章 JeKo-1-parental及JeKo-1-spheres細(xì)胞株不同生長(zhǎng)方式的鑒定
        1.1 鏡下觀察結(jié)果
        1.2 CD19在JeKo-1-parental、JeKo-1-spheres及原代標(biāo)本中的表達(dá)
        1.3 JeKo-1-parental由單個(gè)懸浮細(xì)胞轉(zhuǎn)變?yōu)椴灰?guī)則多細(xì)胞球體時(shí)鏡下觀察結(jié)果
        1.4 JeKo-1-parental不同生長(zhǎng)方式及JeKo-1-spheres細(xì)胞活性的測(cè)定
        1.5 JeKo-1-parental及JeKo-1-spheres細(xì)胞株邊群細(xì)胞的測(cè)定..
        1.6 JeKo-1-spheres細(xì)胞株與臨床原代細(xì)胞體外生長(zhǎng)方式的比較..
    第二章 JeKo-1-spheres細(xì)胞株的生物學(xué)特性
        1.1 JeKo-1-spheres細(xì)胞株免疫表型鑒定
        1.2 根據(jù)JeKo-1-spheres細(xì)胞株免疫表型結(jié)果確定異常分化發(fā)育階段
        1.3 Qrt-PCR實(shí)驗(yàn)檢測(cè)Jeko-1-spheres細(xì)胞株的基因表達(dá)
        1.4 Jeko-1-spheres細(xì)胞株甲基纖維素克隆成球?qū)嶒?yàn)結(jié)果
        1.5 Jeko-1-spheres細(xì)胞株體內(nèi)成瘤能力
    第三章 CD19/IgM細(xì)胞亞群在臨床標(biāo)本中的表達(dá)
    第四章 CD19/IgM亞群生物學(xué)特性的鑒定
        1.1 健康供者CD19/IgM細(xì)胞亞群體外克隆成球能力的鑒定
        1.2 JeKo-1-spheres細(xì)胞株中CD19/IgM細(xì)胞亞群體外克隆成球能力的鑒定
        1.3 病人標(biāo)本中CD19/IgM細(xì)胞亞群體外克隆成球能力的鑒定
        1.4 Jeko-1-spheres細(xì)胞株CD19/IgM細(xì)胞亞群體內(nèi)腫瘤生物學(xué)特性的鑒定
        1.5 臨床標(biāo)本pt4中CD19/IgM細(xì)胞亞群體內(nèi)腫瘤生物學(xué)特性的鑒定
第三部分 討論
    第一章 多細(xì)胞球體生長(zhǎng)狀態(tài)是MCL早期階段惡性克隆細(xì)胞的獨(dú)特生長(zhǎng)方式
    第二章 Jeko-1-spheres細(xì)胞株的生物學(xué)特性
    第三章 CD19-/IgM-、CD19-/IgM+、CD19+/IgM+三個(gè)亞克隆在MCL惡性克隆發(fā)病機(jī)制中的作用
全文總結(jié)
參考文獻(xiàn)
文獻(xiàn)綜述
    參考文獻(xiàn)
致謝
博士期間發(fā)表的論文



本文編號(hào)：3679189