巨噬細(xì)胞存在于大多數(shù)組織中,維持著機(jī)體免疫內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)態(tài)。當(dāng)巨噬細(xì)胞所處微環(huán)境改變時(shí),其表型和功能也會(huì)發(fā)生相應(yīng)的改變,被稱為巨噬細(xì)胞的可塑性。而表觀遺傳是調(diào)控巨噬細(xì)胞可塑性的關(guān)鍵因素之一。近年來(lái),越來(lái)越多證據(jù)證明表觀遺傳可調(diào)控巨噬細(xì)胞基因表達(dá)進(jìn)而調(diào)節(jié)免疫反應(yīng)。其中,據(jù)報(bào)道組蛋白賴氨酸特異性去甲基化酶LSD1不僅可調(diào)控造血干細(xì)胞（HSC）分化,腫瘤上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化（EMT）,還可調(diào)節(jié)腫瘤免疫原性,參與B細(xì)胞生成。但其在巨噬細(xì)胞免疫特性轉(zhuǎn)換中的作用尚不清楚,基于LSD1在免疫調(diào)控中的潛能,本課題將深入探究LSD1對(duì)巨噬細(xì)胞免疫特性轉(zhuǎn)換的影響。在該研究中,我們首先采用體外誘導(dǎo)的方式,將人單核細(xì)胞分化為靜息狀態(tài)的M0型巨噬細(xì)胞,并將M0進(jìn)一步誘導(dǎo)為經(jīng)典活化的M1型巨噬細(xì)胞和替代活化的M2型巨噬細(xì)胞,用于模擬體內(nèi)具有不同免疫調(diào)節(jié)功能的巨噬細(xì)胞。為了探究LSD1是否在巨噬細(xì)胞免疫特性轉(zhuǎn)換過(guò)程中發(fā)揮調(diào)控作用,我們分別從抑制LSD1酶活性和干擾LSD1基因表達(dá)兩方面入手,通過(guò)運(yùn)用流式細(xì)胞術(shù)、ELISA、Western Blot、熒光定量PCR等技術(shù),分析巨噬細(xì)胞形態(tài)學(xué)、表面標(biāo)志物（Markers）、細(xì)胞因子... 

【文章頁(yè)數(shù)】：82 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
縮略詞
第一章 前言
    1.1 巨噬細(xì)胞來(lái)源功能及其可塑性
        1.1.1 巨噬細(xì)胞來(lái)源及異質(zhì)性
        1.1.2 巨噬細(xì)胞功能
        1.1.3 巨噬細(xì)胞可塑性
    1.2 表觀遺傳與巨噬細(xì)胞
        1.2.1 表觀遺傳影響基因的表達(dá)
        1.2.2 表觀遺傳調(diào)控巨噬細(xì)胞表型及功能轉(zhuǎn)換
        1.2.3 表觀遺傳酶LSD1與免疫
    1.3 本文的主要研究目的和意義
    參考文獻(xiàn)
第二章 實(shí)驗(yàn)材料與方法
    2.1 常見(jiàn)溶液的配制
    2.2 細(xì)胞培養(yǎng)
        2.2.1 懸浮細(xì)胞THP1培養(yǎng)
        2.2.2 貼壁細(xì)胞培養(yǎng)
        2.2.3 細(xì)胞凍存
        2.2.4 細(xì)胞復(fù)蘇
    2.3 細(xì)胞計(jì)數(shù)
    2.4 巨噬細(xì)胞及其極化狀態(tài)模型的構(gòu)建
    2.5 細(xì)胞轉(zhuǎn)染及穩(wěn)轉(zhuǎn)株篩選
    2.6 Real-Time PCR及熒光定量PCR
        2.6.1 RNA提取
        2.6.2 RNA反轉(zhuǎn)錄
        2.6.3 熒光定量PCR
    2.7 巨噬細(xì)胞表型鑒別
    2.8 巨噬細(xì)胞吞噬功能檢測(cè)
    2.9 酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)
    2.10 細(xì)胞全蛋白提取
    2.11 酸沉淀法提取細(xì)胞組蛋白
    2.12 BCA蛋白定量
    2.13 Western Blotting實(shí)驗(yàn)
    2.14 細(xì)胞活性檢測(cè)
    2.15 腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞模型構(gòu)建
    2.16 T細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)
    2.17 共培養(yǎng)增殖實(shí)驗(yàn)
    2.18 Transwell實(shí)驗(yàn)
    2.19 數(shù)據(jù)分析
第三章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與討論
    3.1 LSD1參與巨噬細(xì)胞分化和極化
        3.1.1 巨噬細(xì)胞模型構(gòu)建與驗(yàn)證
        3.1.2 經(jīng)典活化的M1型巨噬細(xì)胞模型構(gòu)建及驗(yàn)證
        3.1.3 替代活化的M2型巨噬細(xì)胞模型構(gòu)建及驗(yàn)證
        3.1.4 LSD1在不同極化狀態(tài)下巨噬細(xì)胞顯著高表達(dá)
    3.2 LSD1對(duì)M0型巨噬細(xì)胞免疫特性轉(zhuǎn)換的調(diào)控作用
        3.2.1 抑制LSD1酶活性對(duì)M0型巨噬細(xì)胞免疫特性的影響
        3.2.2 干擾LSD1表達(dá)對(duì)M0型巨噬細(xì)胞免疫特性轉(zhuǎn)換的影響
    3.3 抑制巨噬細(xì)胞中LSD1可增強(qiáng)其免疫監(jiān)察功能
        3.3.1 抑制LDS1可增強(qiáng)M1型巨噬細(xì)胞功能
        3.3.2 抑制LSD1可促M(fèi)2型巨噬細(xì)胞向經(jīng)典活化的方向極化
        3.3.3 抑制LSD1后腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞(TAMs)促腫瘤功能的變化
    3.4 巨噬細(xì)胞中LSD1調(diào)控其免疫特性轉(zhuǎn)換的機(jī)制探索
    3.5 討論
參考文獻(xiàn)
個(gè)人簡(jiǎn)歷
致謝



本文編號(hào)：3678039