目的:前列腺癌在我國發(fā)病率逐年增高,且隨著年齡增加有遞增趨勢^[1]。前列腺癌患者在患病前期沒有明顯的癥狀,目前也缺乏有效的早期診斷方法,少數(shù)在早期診斷出前列腺癌的患者多為正常體檢時意外發(fā)現(xiàn)。多數(shù)患者在確診時已經(jīng)發(fā)展為晚期前列腺癌,喪失了前列腺根除術的合適時機^[2-4]。因此及早診斷和治療對前列腺癌患者至關重要。生物標記物檢測對于惡性腫瘤的早期診斷近年來是臨床研究的重點內容。Eya2（eyes absent homolog2）是EYA家族蛋白之一,具有高度保守的EYA結構域,該家族成員可以編碼一系列轉錄輔助因子^[5]。近些年來,一些研究表明Eya2參與一些癌癥的發(fā)展,在包括肺癌,頭頸癌,宮頸癌以及膠質瘤中等惡性腫瘤中均存在Eya2異常表達的現(xiàn)象^[6-9]。在本課題研究中我們將探究Eya2在前列腺癌中的表達模式,臨床意義,表達差異對前列腺癌細胞生物學功能的影響以及潛在的分子生物學機制,以判斷Eya2是否可能作為前列腺癌早期診斷的生物標記物。研究方法:1組織樣本98例人類前列腺癌組織和16例前列腺正常組織... 

【文章頁數(shù)】：104 頁

【學位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
英文縮略語
第一部分:Eya2在前列腺癌中高表達并促進前列腺癌細胞增殖和侵襲
    1 前言
    2 材料與方法
        2.1 免疫組織化學
            2.1.1 主要儀器及生產(chǎn)商
            2.1.2 主要試劑及生產(chǎn)商
            2.1.3 組織樣本
            2.1.4 主要實驗步驟
        2.2 細胞培養(yǎng)
            2.2.1 主要儀器及生產(chǎn)商
            2.2.2 主要試劑及生產(chǎn)商
            2.2.3 主要實驗步驟
        2.3 Western Blot
            2.3.1 主要儀器及生產(chǎn)商
            2.3.2 主要試劑及生產(chǎn)商
            2.3.3 主要試劑配方
            2.3.4 主要實驗步驟
        2.4 細胞轉染與干擾
            2.4.1 主要儀器及生產(chǎn)商
            2.4.2 主要試劑及生產(chǎn)商
            2.4.3 主要實驗步驟
        2.5 實時熒光定量PCR
            2.5.1 主要儀器及生產(chǎn)商
            2.5.2 主要試劑及生產(chǎn)商
            2.5.3 主要實驗步驟
        2.6 CCK-8和集落形成實驗
            2.6.1 儀器及生產(chǎn)商
            2.6.2 主要試劑及生產(chǎn)商
            2.6.3 主要實驗步驟
        2.7 TRANSWELL細胞侵襲實驗
            2.7.1 主要儀器及生產(chǎn)商
            2.7.2 主要試劑及生產(chǎn)商
            2.7.3 主要實驗步驟
        2.8 統(tǒng)計分析
    3 結果
        3.1 Eya2在前列腺癌組織中高表達
        3.2 Eya2在前列腺癌組織中的表達與臨床病理因素的關系
        3.3 Eya2在前列腺癌細胞中高表達
        3.4 Eya2促進前列腺癌細胞增殖
        3.5 Eya2促進前列腺癌細胞侵襲
    4 討論
    5 結論
第二部分:Eya2調控前列腺癌細胞線粒體功能及多西紫杉醇化療敏感性
    1 前言
    2 材料與方法
        2.1 細胞培養(yǎng)
            2.1.1 主要儀器及生產(chǎn)商
            2.1.2 主要試劑及生產(chǎn)商
            2.1.3 主要實驗步驟
        2.2 細胞轉染與干擾
            2.2.1 主要儀器及生產(chǎn)商
            2.2.2 主要試劑及生產(chǎn)商
            2.2.3 主要實驗步驟
        2.3 western blot
            2.3.1 主要儀器及生產(chǎn)商
            2.3.2 主要試劑及生產(chǎn)商
            2.3.3 主要試劑配方
            2.3.4 主要實驗步驟
        2.4 CCK-8和集落形成實驗
            2.4.1 儀器及生產(chǎn)商
            2.4.2 主要試劑及生產(chǎn)商
            2.4.3 主要實驗步驟
        2.5 細胞凋亡實驗
            2.5.1 儀器及生產(chǎn)商
            2.5.2 主要試劑及生產(chǎn)商
            2.5.3 主要實驗步驟
        2.6 線粒體膜電位JC-1實驗
            2.6.1 儀器及生產(chǎn)商
            2.6.2 主要試劑及生產(chǎn)商
            2.6.3 主要實驗步驟
        2.7 統(tǒng)計方法
    3 結果
        3.1 Eya2降低前列腺癌細胞對多西紫杉醇的化療敏感性
        3.2 Eya2抑制多西紫杉醇誘導的細胞凋亡
        3.3 Eya2抑制凋亡相關蛋白的降解
        3.4 Eya2促進線粒體膜電位上升
    4 討論
    5 結論
第三部分:Eya2 通過AKT/Bcl-2 通路調節(jié)前列腺癌細胞生物學功能
    1 前言
    2 材料與方法
        2.1 細胞培養(yǎng)
            2.1.1 主要儀器及生產(chǎn)商
            2.1.2 主要試劑及生產(chǎn)商
            2.1.3 主要實驗步驟
        2.2 細胞轉染與干擾
            2.2.1 主要儀器及生產(chǎn)商
            2.2.2 主要試劑及生產(chǎn)商
            2.2.3 主要實驗步驟
        2.3 western blot
            2.3.1 主要儀器及生產(chǎn)商
            2.3.2 主要試劑及生產(chǎn)商
            2.3.3 主要試劑配方
            2.3.4 主要實驗步驟
        2.4 實時熒光定量PCR
            2.4.1 主要儀器及生產(chǎn)商
            2.4.2 主要試劑及生產(chǎn)商
            2.4.3 主要實驗步驟
        2.5 統(tǒng)計分析
    3 結果
        3.1 Eya2 促進AKT磷酸化并上調Bcl-2 以及MMP7 表達
        3.2 前列腺癌中Eya2與Bcl-2及MMP7 表達顯著相關
        3.3 Eya2 激活前列腺癌細胞中AKT/Bcl-2 信號通路
    4 討論
    5 結論
本研究創(chuàng)新性的自我評價
參考文獻
綜述
    參考文獻
攻讀學位期間取得的研究成果
致謝
個人簡介


【參考文獻】：
期刊論文
[1]前列腺癌骨轉移的預測因素[J]. 陳業(yè)輝,聶品,江文,趙仕佳,仉智,林華欣,李淼沅,劉燕青,李鵬麾,朱旭生.  南方醫(yī)科大學學報. 2016(02)
[2]PI3K-Akt信號通路與腫瘤細胞凋亡關系的研究進展[J]. 黃秀蘭,崔國輝,周克元.  癌癥. 2008(03)



本文編號：3677494