人肝細(xì)胞癌是位于世界第三位導(dǎo)致患者死亡的惡性腫瘤,是嚴(yán)重危害人類健康的重大疾病。手術(shù)是最為有效而確切的治療手段,但由于肝癌起病隱匿且惡性程度高,大部分患者發(fā)現(xiàn)時(shí)即已屬晚期,喪失手術(shù)機(jī)會(huì),故化療仍然是晚期肝癌治療的重要手段,但肝癌的多藥耐藥性的發(fā)生常導(dǎo)致治療失敗。目前研究表明,肝細(xì)胞癌等惡性腫瘤常高表達(dá)Bcl-2蛋白家族內(nèi)Bcl-2、Bcl-XL等抗凋亡蛋白,通過調(diào)節(jié)抗凋亡蛋白和促凋亡蛋白間的平衡,使腫瘤發(fā)生凋亡逃逸。因此抑制Bcl-2的過表達(dá)將成為一種有效的腫瘤治療方法。目前開發(fā)出的ABT-737是一種BH3蛋白模擬物,能夠特異性地抑制Bcl-2/Bcl-XL等在BH3結(jié)構(gòu)域與Bax/Bak的結(jié)合,從而誘導(dǎo)凋亡。諸多學(xué)者認(rèn)為自噬可以在腫瘤形成的初始階段起到抑制作用,但后期腫瘤細(xì)胞往往可通過自噬應(yīng)答降低化療藥物的殺傷作用。研究表明,自噬通過降解受損的細(xì)胞器及細(xì)胞內(nèi)老化蛋白質(zhì)等,促進(jìn)細(xì)胞修復(fù)和生存,在治療中常使腫瘤細(xì)胞免受凋亡和壞死,成為腫瘤耐藥的重要的機(jī)制之一。目前臨床上亦采用Bcl-2抑制劑ABT-737進(jìn)行肝細(xì)胞癌治療的研究,但由于ABT-737可以通過某些因素誘導(dǎo)自噬,常導(dǎo)致耐藥的... 

【文章頁(yè)數(shù)】：86 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
英文縮略語(yǔ)索引
第1章 文獻(xiàn)綜述
    1.1 肝細(xì)胞癌
        1.1.1 概述
        1.1.2 肝細(xì)胞癌的治療
    1.2 Bcl-2 蛋白家族
        1.2.1 Bcl-2 蛋白家族概述
        1.2.2 Bcl-2 蛋白家族調(diào)節(jié)細(xì)胞凋亡
        1.2.3 Bcl-2 蛋白家族調(diào)節(jié)細(xì)胞自噬
        1.2.4 以Bcl-2 蛋白為靶點(diǎn)的小分子化合物ABT-737
    1.3 凋亡
        1.3.1 概述
        1.3.2 凋亡和自噬的關(guān)系
    1.4 自噬
        1.4.1 概述
        1.4.2 自噬與腫瘤耐藥
        1.4.3 活性氧（ROS）與自噬
第2章 材料與方法
    2.1 材料
        2.1.1 實(shí)驗(yàn)試劑
        2.1.2 實(shí)驗(yàn)儀器
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)
        2.2.2 細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)
        2.2.3 細(xì)胞凋亡檢測(cè)
        2.2.4 ROS檢測(cè)
        2.2.5 蛋白濃度的測(cè)定
        2.2.6 Westernblot
        2.2.7 免疫熒光標(biāo)記及激光共聚焦顯微鏡
        2.2.8 TUNEL檢測(cè)法
        2.2.9 細(xì)胞瞬時(shí)轉(zhuǎn)染及Beclin1基因敲除
        2.2.10 統(tǒng)計(jì)分析
第3章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    3.1 ABT-737 抑制人肝癌阿霉素耐藥細(xì)胞株HepG-2/ADM細(xì)胞生長(zhǎng)并誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡
        3.1.1 HepG-2/ADM細(xì)胞的Bcl-2 蛋白表達(dá)水平高于HepG-2 細(xì)胞..293.1.2 ABT-737 抑制Hep G-2/ADM細(xì)胞生長(zhǎng)
        3.1.2 ABT-737 誘導(dǎo)Hep G-2/ADM細(xì)胞凋亡
    3.2 ABT-737 誘導(dǎo)人肝癌阿霉素耐藥細(xì)胞株HepG-2/ADM細(xì)胞Beclin1依賴的自噬
        3.2.1 ABT-737 誘導(dǎo)Hep G-2/ADM細(xì)胞自噬
        3.2.2 ABT-737 誘導(dǎo)HepG-2/ADM細(xì)胞發(fā)生Beclin1依賴的自噬..37
    3.3 ABT-737 誘導(dǎo)ROS產(chǎn)生并誘導(dǎo)人肝癌阿霉素耐藥細(xì)胞株HepG-2/ADM細(xì)胞發(fā)生ROS介導(dǎo)的自噬
        3.3.1 ABT-737 誘導(dǎo)Hep G-2/ADM細(xì)胞中ROS的生成
        3.3.2 ABT-737 誘導(dǎo)Hep G-2/ADM細(xì)胞發(fā)生ROS介導(dǎo)的自噬
    3.4 抑制ROS能增加ABT-737 誘導(dǎo)的人肝癌阿霉素耐藥細(xì)胞株HepG-2/ADM細(xì)胞凋亡
    3.5 抑制自噬能增加ABT-737 誘導(dǎo)的人肝癌阿霉素耐藥細(xì)胞株HepG-2/ADM細(xì)胞凋亡
第4章 討論
第5章 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
作者簡(jiǎn)介及在學(xué)期間所取得的科研成果
致謝



本文編號(hào)：3663649