發(fā)布時(shí)間：2022-07-13 11:47

　　研究目的:胰腺癌是消化系統(tǒng)腫瘤之一,其惡性程度極高、預(yù)后極差的根本原因是早期診斷難度大和轉(zhuǎn)移快。本文旨在探究DNA甲基化結(jié)合蛋白3（Methyl-CpG-binding domain 3,MBD3）對(duì)胰腺癌細(xì)胞增殖等生物學(xué)功能的作用,初步闡明其調(diào)控胰腺癌細(xì)胞干性的潛在作用機(jī)制,為今后MBD3在胰腺癌臨床診斷和預(yù)后中的應(yīng)用提供可靠的理論依據(jù)。研究方法:首先通過(guò)熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)和Western blot實(shí)驗(yàn)檢測(cè)MBD3在三種胰腺癌細(xì)胞中的表達(dá)情況并驗(yàn)證Flag-MBD3和sh-MBD3質(zhì)粒的干擾和過(guò)表達(dá)效果。接著使用克隆形成實(shí)驗(yàn)、干細(xì)胞成球?qū)嶒?yàn)和動(dòng)物實(shí)驗(yàn)檢測(cè)MBD3對(duì)胰腺癌細(xì)胞增殖和干性的影響。采用Western blot實(shí)驗(yàn)檢測(cè)MBD3對(duì)胰腺癌細(xì)胞中干性相關(guān)指標(biāo)和Hippo/YAP信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路相關(guān)指標(biāo)的變化。分析TCGA數(shù)據(jù)庫(kù)中MBD3和YAP表達(dá)量的關(guān)系,采用免疫沉淀（IP）實(shí)驗(yàn)、免疫熒光試驗(yàn)和核漿分離試驗(yàn)分析MBD3對(duì)YAP的影響。研究結(jié)果:熒光定量PCR和Western blot實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明MBD3在SW1990、PaTu8988和PANC1細(xì)胞中mRNA和蛋白表達(dá)水平逐漸升高。... 

【文章頁(yè)數(shù)】：79 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
主要縮略詞表
第一章 緒論
    1.1 研究背景
        1.1.1 胰腺癌
        1.1.2 DNA甲基化結(jié)合蛋白3
        1.1.3 干性
        1.1.4 Hippo通路
    1.2 本研究的目的、內(nèi)容、方法與技術(shù)路線
        1.2.1 研究目的
        1.2.2 研究?jī)?nèi)容
        1.2.3 研究意義
        1.2.4 研究技術(shù)路線圖
第二章 MBD3在胰腺癌細(xì)胞中的表達(dá)
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 實(shí)驗(yàn)細(xì)胞
        2.1.2 實(shí)驗(yàn)耗材
        2.1.3 實(shí)驗(yàn)儀器
        2.1.4 實(shí)驗(yàn)試劑
        2.1.5 常用試劑配制
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 細(xì)胞的傳代、凍存及復(fù)蘇
        2.2.2 細(xì)胞總RNA提取
        2.2.3 qPCR檢測(cè)方法
        2.2.4 Western blot檢測(cè)方法
        2.2.5 CCLE數(shù)據(jù)庫(kù)分析
    2.3 數(shù)據(jù)處理與統(tǒng)計(jì)方法
    2.4 結(jié)果
        2.4.1 在多種癌組織中MBD3 在胰腺癌組織中的表達(dá)量較低
        2.4.2 MBD3 在胰腺癌組織中m RNA水平的表達(dá)情況
        2.4.3 MBD3 與胰腺癌患者病理分期的關(guān)系
        2.4.4 MBD3 與胰腺癌患者預(yù)后正相關(guān)
        2.4.5 MBD3 在三種胰腺癌細(xì)胞中的表達(dá)水平
    2.5 討論
第三章 MBD3 對(duì)胰腺癌細(xì)胞增殖和干性的影響
    3.1 實(shí)驗(yàn)儀器和材料
        3.1.1 實(shí)驗(yàn)儀器
        3.1.2 實(shí)驗(yàn)耗材
        3.1.3 實(shí)驗(yàn)試劑
        3.1.4 試劑配制
    3.2 實(shí)驗(yàn)方法
        3.2.1 感受態(tài)細(xì)胞的制備
        3.2.2 質(zhì)粒的擴(kuò)增與提取
        3.2.3 病毒包裝
        3.2.4 感染細(xì)胞
        3.2.5 質(zhì)粒轉(zhuǎn)染
        3.2.6 細(xì)胞計(jì)數(shù)
        3.2.7平板克隆形成實(shí)驗(yàn)
        3.2.8干細(xì)胞成球?qū)嶒?yàn)
        3.2.9 細(xì)胞培養(yǎng)、Western blot
    3.3 數(shù)據(jù)處理與統(tǒng)計(jì)方法
    3.4 結(jié)果
        3.4.1 Flag-MBD3和sh-MBD3 質(zhì)粒效果驗(yàn)證
        3.4.2 MBD3 抑制胰腺癌細(xì)胞的克隆形成能力
        3.4.3 MBD3 抑制胰腺癌細(xì)胞的干性
        3.4.4 MBD3 抑制胰腺癌細(xì)胞的脂質(zhì)合成
        3.4.5 MBD3 促進(jìn)胰腺癌細(xì)胞的自噬
    3.5 討論
第四章 MBD3 對(duì)胰腺癌細(xì)胞干性影響的分子機(jī)制
    4.1 實(shí)驗(yàn)儀器和材料
        4.1.1 實(shí)驗(yàn)儀器
        4.1.2 實(shí)驗(yàn)耗材
        4.1.3 實(shí)驗(yàn)試劑
        4.1.4 試劑配制
    4.2 實(shí)驗(yàn)方法
        4.2.1 免疫熒光
        4.2.2 細(xì)胞核與細(xì)胞漿蛋白分離提取
        4.2.3 雙熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)
        4.2.4 質(zhì)粒轉(zhuǎn)染、細(xì)胞培養(yǎng)、Western blot
        4.2.5 腫瘤數(shù)據(jù)庫(kù)分析
        4.2.6免疫沉淀(IP)實(shí)驗(yàn)
        4.2.7動(dòng)物實(shí)驗(yàn)
    4.3 數(shù)據(jù)處理與統(tǒng)計(jì)方法
    4.4 結(jié)果
        4.4.1 MBD3 促進(jìn)胰腺癌Hippo/YAP信號(hào)通路的激活
        4.4.2 MBD3與YAP的表達(dá)量在胰腺癌細(xì)胞中成負(fù)相關(guān)
        4.4.3 MBD3與YAP結(jié)合
        4.4.4 MBD3 抑制胰腺癌細(xì)胞中YAP的核轉(zhuǎn)位
        4.4.5 MBD3 抑制胰腺癌細(xì)胞中YAP的轉(zhuǎn)錄活性
        4.4.6 MBD3 抑制胰腺癌細(xì)胞的致瘤性
        4.4.7 YAP在三種胰腺癌細(xì)胞中的表達(dá)量
        4.4.8 胰腺癌細(xì)胞中YAP抑制MBD3 的表達(dá)
    4.5 討論
結(jié)論與展望
參考文獻(xiàn)
致謝
攻讀碩士期間發(fā)表論文


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Epigenetic regulation of prostate cancer:the theories and the clinical implications[J]. Yiji Liao,Kexin Xu.  Asian Journal of Andrology. 2019(03)
[2]Epidemiology of pancreatic cancer[J]. Milena Ilic,Irena Ilic.  World Journal of Gastroenterology. 2016(44)



本文編號(hào)：3659986