發(fā)布時間：2022-02-23 22:16

　　目的:本研究嘗試將我們新發(fā)現(xiàn)的抗腫瘤間質(zhì)干細胞（Mesenchymal stem cells,MSCs）亞群及其來源的胞外囊泡（Extracellular vesicles,EVs）應(yīng)用于女性惡性腫瘤（卵巢癌和乳腺癌）的治療。深入探討CD90^low MSCs亞群在腫瘤治療中的作用,并為腫瘤的治療提供理論依據(jù)和治療靶點。為EVs作為一種新型有效的治療或藥物傳遞媒介提供依據(jù),同時也為治療其它類型腫瘤提供新的思路和見解。方法:（1）對不同組織進行酶消化法分離培養(yǎng)獲得骨髓來源間質(zhì)干細胞（Bone marrow-derived MSCs,BM-MSCs）、骨密質(zhì)來源間質(zhì)干細胞（Compact bone-derived MSCs,CB-MSCs）和脂肪來源間質(zhì)干細胞（Adipose-derived mesenchymal stem cells,ADSCs）。（2）利用細胞的形態(tài)特征、流式細胞術(shù)分析細胞表面標(biāo)志和多向分化能力的檢測對MSCs進行鑒定。（3）利用卵巢癌小鼠腫瘤模型評價CB-MSCs、BM-MSCs和CB-MSCs與VIC-008聯(lián)合的抗腫瘤效果。（4）利用qRT-... 

【文章來源】：江蘇大學(xué)江蘇省

【文章頁數(shù)】：129 頁

【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

BM-MSCs和CB-MSCs形態(tài)特征

間質(zhì)干細胞亞群及其胞外囊泡對卵巢癌和乳腺癌影響的研究34圖3.2流式細胞術(shù)鑒定BM-MSCs和CM-MSCs表面標(biāo)記A：流式細胞術(shù)設(shè)門策略；B：BM-MSCs表面標(biāo)記表達分析；C：CB-MSCs表面標(biāo)記表達分析Figure.3.2IdentificationofBM-MSCsandCM-MSCsbyflowcytometryA：Gatedstrategyofflowcytometry；B：ExpressionanalysisofBM-MSCssurfacemarkers；C：ExpressionanalysisofCB-MSCssurfacemarkers3.4.3.CB-MSCs表達更高的SCA-1和更低的CD90與BM-MSCs相比不同來源的MSCs是一類具有異質(zhì)性群體的細胞混合體[198]。通過流式細胞術(shù)對P3代細胞表面標(biāo)記進行鑒定分析，結(jié)果顯示在CB-MSCs中CD29+SCA-1+的亞群百分比為67.7%，而在BM-MSCs中CD29+SCA-1+的亞群百分比僅為32.4%；另外，在CB-MSCs中CD73+CD90+的亞群百分比為10.2%，在BM-MSCs中CD73+CD90+的亞群百分比為33.6%（圖3.3A）。通過流式細胞術(shù)單獨分析SCA-1和CD90表面標(biāo)志，結(jié)果同樣顯示CB-MSCs表達更高的SCA-1和更低的CD90與BM-MSCs相比具有統(tǒng)計學(xué)意義（將低表達CD90的CB-MSCs定義為CD90lowCB-MSCs）（圖3.3B）。通過流式細胞分選SCA-1+的陽性MSCs并進行培養(yǎng)，在顯微鏡下觀察能發(fā)現(xiàn)SCA-1-和SCA-1+亞群表現(xiàn)出不同的形態(tài)，SCA-1-亞群MSCs呈小而圓的形狀，而SCA-1+亞群MSCs呈大而伸長的形狀（圖3.3C）。據(jù)報道，CD90的表達減少與人類MSCs免疫抑制活性的喪失有關(guān)[199]，因此在CB-

江蘇大學(xué)博士學(xué)位論文35MSCs中觀察到的低CD90表達可能表明免疫抑制功能的喪失，從而使腫瘤靶向T細胞能夠執(zhí)行其腫瘤殺傷能力。圖3.3CB-MSCs表達更高的SCA-1和更低的CD90A：CB-MSCs和BM-MSCs流式分析表面標(biāo)記；B：統(tǒng)計CB-MSCs和BM-MSCs中Sca-1和CD90陽性的比例；C：經(jīng)分選后的Sca-1陰性細胞和陽性細胞的形態(tài)觀察（20×）*P<0.05和**P<0.01Figure.3.3CB-MSCsexpresshigherSca-1andlowerCD90comparedtoBM-MSCsA：RepresentativecytometricdotplotsofCB-MSCandBM-MSCs；B：PercentageofSca-1andCD90positivepopulationinCB-MSCsandBM-MSCs；C：MicroscopicimagesofsortedSca-1negative(left)andpositivecells(right),(20×magnification)*P<0.05and**P<0.013.4.4.BM-MSCs和CB-MSCs多向分化能力鑒定接下來，我們檢測了BM-MSCs和CB-MSCs分化為典型間質(zhì)細胞類型的能力：即脂肪細胞、成骨細胞和軟骨細胞誘導(dǎo)分化。當(dāng)BM-MSCs和CB-MSCs在各自相應(yīng)的誘導(dǎo)分化培養(yǎng)基中培養(yǎng)時，它們能夠成功分化為脂肪細胞、成骨細胞和軟骨細胞。經(jīng)過大約14天成脂誘導(dǎo)后，我們能夠在顯微鏡下清楚的觀察到未染色的細胞胞漿中有大小不一的圓形且折光性較強脂肪滴形成（圖3.4A，左邊部分），通過油紅O染色便可以清楚的看到染成橘紅色或紅色的脂肪滴（圖3.4A，右邊部分）；經(jīng)過大約21天成骨誘導(dǎo)后，通過茜素紅染色，在顯微鏡下觀察能夠發(fā)現(xiàn)被茜素紅染成紅色的陽性骨細胞（圖3.4B）；同樣經(jīng)過大約21天成軟骨誘導(dǎo)后，通過阿爾新藍和核固紅染色可以發(fā)現(xiàn)誘導(dǎo)后的細胞胞漿大部分被染成藍色陽性軟骨細胞，其細胞核被染成紅色（圖3.4C）。上述結(jié)果表明BM-MSCs

【參考文獻】：
期刊論文
[1]Transplanting embryonic stem cells onto damaged human corneal endothelium[J]. Charles Hanson,Arsaell Arnarsson,Thorir Hardarson,Ann Lindg?rd,Mandana Daneshvarnaeini,Catarina Ellerstr?m,Anita Bruun,Ulf Stenevi.  World Journal of Stem Cells. 2017(08)
[2]Homing and migration of mesenchymal stromal cells: How to improve the efficacy of cell therapy?[J]. Ann De Becker,Ivan Van Riet.  World Journal of Stem Cells. 2016(03)
[3]Roles of micro RNA-140 in stem cell-associated early stage breast cancer[J]. Benjamin Wolfson,Gabriel Eades,Qun Zhou.  World Journal of Stem Cells. 2014(05)



本文編號：3641423