目的:肺癌在我國惡性腫瘤中死亡率位居首位,發(fā)病率也是逐年上升,主要以非小細胞肺癌為主,約占肺癌發(fā)病率的80%左右。Brf1作為PolⅢ基因的特異性調(diào)控因子,在肝癌、乳腺癌等惡性腫瘤中表達水平上調(diào),并促進細胞轉(zhuǎn)化及腫瘤的發(fā)生。但其在非小細胞肺癌中的作用尚不明確。本研究通過檢測Brf1在非小細胞肺癌組織及癌旁肺組織中的表達情況,驗證Brf1是否在非小細胞肺癌中存在高表達。然后應(yīng)用CRISPR/Cas9系統(tǒng)特異性沉默人非小細胞肺癌細胞中BRF1基因的表達,觀察其對非小細胞肺癌細胞生物學功能的影響。探討B(tài)rf1成為非小細胞肺癌治療靶點的可能性,為后續(xù)研究提供參考。方法:1.免疫組化法（S-P法）用于檢測非小細胞肺癌組織和癌旁肺組織中Brf1的表達,比較Brf1表達水平與臨床病例參數(shù)和預(yù)后之間的關(guān)系。通過Western blot法等驗證Brf1是否在非小細胞肺癌細胞株中高度表達。2.根據(jù)BRF1基因的序列設(shè)計sgRNA,與經(jīng)BsmBI酶切后的lenti-CRISPR v2質(zhì)粒進行重組,得到特異性針對BRF1基因的CRISPR/Cas9重組質(zhì)粒,利用該載體含有嘌呤霉素抗性的特性,篩選出敲除BRF1... 

【文章來源】：南昌大學江西省211工程院校

【文章頁數(shù)】：57 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
中英文縮略詞表
第1章 引言
第2章 非小細胞肺癌中Brf1 表達與預(yù)后的關(guān)系
    2.1 前言
    2.2 實驗材料
        2.2.1 臨床資料
        2.2.2 主要儀器及耗材
        2.2.3 主要試劑
    2.3 實驗方法
        2.3.1 Western blot
        2.3.2 實時熒光定量PCR實驗(qRT-PCR)
        2.3.3 免疫組化
        2.3.4 統(tǒng)計學分析
    2.4 實驗結(jié)果
        2.4.1 Brf1 在非小細胞肺癌組織和癌旁肺組織中的表達情況
        2.4.2 非小細胞肺癌患者Brf1 表達強度與臨床病例特征的關(guān)系
        2.4.3 非小細胞肺癌患者生存分析
    2.5 討論
第3章 干擾BRF1 表達對非小細胞肺癌細胞生物學功能的影響
    3.1 前言
    3.2 實驗材料
        3.2.1 細胞株
        3.2.2 主要儀器及耗材
        3.2.3 主要試劑
    3.3 實驗方法
        3.3.1 細胞培養(yǎng)
        3.3.2 Western blot
        3.3.3 構(gòu)建并獲取lenti-CRISPR v2-BRF1 重組質(zhì)粒
        3.3.4 慢病毒的包裝
        3.3.5 慢病毒轉(zhuǎn)染及篩選穩(wěn)轉(zhuǎn)細胞株
        3.3.6 實時熒光定量PCR實驗(qRT-PCR)
        3.3.7 CCK8 法檢測細胞增殖
        3.3.8 Transwell小室實驗
        3.3.9 統(tǒng)計學分析
    3.4 實驗結(jié)果
        3.4.1 非小細胞肺癌細胞株中Brf1 的表達情況
        3.4.2 重組質(zhì)粒的測序結(jié)果
        3.4.3 實時熒光定量PCR及 Western blot驗證敲除效率
        3.4.4 CCK8 驗證細胞增殖情況
        3.4.5 Transwell小室實驗驗證細胞遷移、侵襲情況
    3.5 討論
第4章 主要結(jié)論與展望
致謝
參考文獻
攻讀學位期間的研究成果
論文綜述
    參考文獻


【參考文獻】：
期刊論文
[1]2013年中國惡性腫瘤發(fā)病和死亡分析[J]. 陳萬青,鄭榮壽,張思維,曾紅梅,鄒小農(nóng),赫捷.  中國腫瘤. 2017(01)
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本文編號：3639493