發(fā)布時間：2022-02-22 02:45

　　目的:與愛潑斯坦-巴爾病毒（Epstein-Barr virus,EBV）相關(guān)的胃癌,即EB病毒相關(guān)胃癌（Epstein-Barr virus-associated gastric cancer,EBVaGC）約占胃癌的近10%,由于胃癌在世界范圍內(nèi)的高發(fā)病率和病死率,EBVaGC發(fā)病的絕對數(shù)高,每年新發(fā)病例在90000以上,因此對EBVaGC發(fā)生機制以及其相關(guān)基因的研究具有重要意義。然而,迄今為止在EBV相關(guān)腫瘤中尚未見EBV潛伏膜蛋白2A（EBV-encoded Latent Membrane Protein 2A,LMP2A）與環(huán)氧合酶2（cyclooxygenase-2,COX-2）之間相關(guān)性的研究報道。EBV編碼的潛伏膜蛋白1（EBV-encoded Latent Membrane Protein 1,LMP1）在EBVaGC中是否與COX-2相互作用也需要進一步研究。方法:（1）采用實時熒光定量PCR（Quantitative Real-time PCR,qRT-PCR）檢測3種EBV陽性胃癌細(xì)胞系（GT38,GT39以及SNU719）和5種EBV陰性胃癌細(xì)胞系（SGC79... 

【文章來源】：青島大學(xué)山東省

【文章頁數(shù)】：76 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
引言
材料與方法
    1 所用儀器、試劑和耗材
        1.1 主要使用儀器
        1.2 主要使用試劑和耗材
        1.3 使用的試劑配制
    2 選擇細(xì)胞系
    3 細(xì)胞處理
        3.1 細(xì)胞的復(fù)蘇
        3.2 細(xì)胞的傳代
    4 PTGS2基因啟動子部分區(qū)域甲基化檢測
        4.1 細(xì)胞系DNA的提取
        4.2 亞硫酸氫鹽基因組測序(BGS)
    5 PTGS2 基因m RNA檢測
        5.1 細(xì)胞系總RNA的提取
        5.2 反轉(zhuǎn)錄為cDNA
        5.3 實時熒光定量PCR(Quantitative Real-time PCR,qRT-PCR)
        5.4 qRT-PCR結(jié)果數(shù)據(jù)分析
    6 胃癌細(xì)胞系中相關(guān)蛋白表達的檢測
        6.1 蛋白提取
        6.2 Western blotting測蛋白表達
    7 microRNA的qRT-PCR檢測
    8 細(xì)胞免疫熒光檢測
    9 LMP1和LMP2A過表達細(xì)胞模型建立
        9.1 質(zhì)粒的預(yù)備
        9.2 重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染胃癌細(xì)胞系SGC7901
    10 siRNA轉(zhuǎn)染
    11 統(tǒng)計學(xué)分析
結(jié)果
    1 Real-time PCR檢測胃癌細(xì)胞系中COX-2 的轉(zhuǎn)錄表達
    2 Western blotting檢測胃癌細(xì)胞系中COX-2 蛋白表達
    3 COX-2編碼基因啟動子區(qū)域甲基化狀態(tài)檢測
    4 COX-2 相關(guān)3種micro RNA的檢測結(jié)果
    5 COX-2蛋白在胃癌細(xì)胞系中的亞細(xì)胞定位檢測
    6 外源性EBV潛伏膜蛋白LMP1和LMP2A穩(wěn)定表達對COX-2 的影響
        6.1 外源性LMP1和LMP2A穩(wěn)定表達SGC7901 細(xì)胞的篩選和建立
        6.2 外源性LMP1和LMP2A穩(wěn)定過表達對COX-2 的影響
    7 外源性LMP1或LMP2A瞬時表達對COX-2 的影響
        7.1 建立外源性LMP1和LMP2A瞬時過表達的SGC7901 細(xì)胞
        7.2 外源性LMP1和LMP2A瞬時表達對COX-2 的影響
    8 干擾LMP1和LMP2A的表達對COX-2 的影響
    9 Western blotting檢測TRAF2 在胃癌細(xì)胞系中的表達
    10 外源性LMP1和LMP2A表達對TRAF2 的影響
        10.1 外源性LMP1和LMP2A穩(wěn)定表達對TRAF2 的影響
        10.2 外源性LMP1和LMP2A瞬時表達對TRAF2 的影響
    11 干擾LMP1和LMP2A表達對TRAF2 的影響
    12 靶向干擾TRAF2對COX-2 表達的影響
    13 Western blotting檢測ERK信號分子在胃癌細(xì)胞系中的表達
    14 過表達LMP1 后對p-ERK的影響
    15 阻斷ERK通路對COX-2 的影響
        15.1 MEK抑制劑PD0325901 阻斷ERK通路
        15.2 小干擾序列阻斷ERK通路
    16 阻斷AKT通路對COX-2 表達的影響
        16.1 LY294002 阻斷PI3K/AKT通路
        16.2 干擾Fox O1對COX-2 的影響
討論
結(jié)論
參考文獻
綜述
    綜述參考文獻
攻讀學(xué)位期間的學(xué)術(shù)成果
縮略詞表
致謝


【參考文獻】：
期刊論文
[1]二甲雙胍聯(lián)合COX-2選擇性抑制劑塞來昔布對胃癌SGC-7901細(xì)胞增殖凋亡的影響[J]. 張永恒,常廷民.  胃腸病學(xué)和肝病學(xué)雜志. 2019(04)
[2]Post-translational modifications of prostaglandin-endoperoxide synthase 2 in colorectal cancer:An update[J]. Rafael I Jaén,Patricia Prieto,Marta Casado,Paloma Martín-Sanz,Lisardo Boscá.  World Journal of Gastroenterology. 2018(48)
[3]Cyclooxygenase 2 in liver dysfunction and carcinogenesis: Facts and perspectives[J]. Paloma Martín-Sanz,Marta Casado,Lisardo Boscá.  World Journal of Gastroenterology. 2017(20)
[4]TCGA divides gastric cancer into four molecular subtypes:implications for individualized therapeutics[J]. Wei Zhang.  Chinese Journal of Cancer. 2014(10)
[5]Helicobacter pylori infection, gastrin and cyclooxygenase-2 in gastric carcinogenesis[J]. Yun Shao,Kun Sun,Wei Xu,Xiao-Lin Li,Hong Shen,Wei-Hao Sun.  World Journal of Gastroenterology. 2014(36)
[6]MicroRNA-143 suppresses gastric cancer cell growth and induces apoptosis by targeting COX-2[J]. Xiao-Li Wu,Bin Cheng,Pei-Yuan Li,Huan-Jun Huang,Qiu Zhao,Zi-Li Dan,Dean Tian,Peng Zhang.  World Journal of Gastroenterology. 2013(43)
[7]Role of cyclooxygenase-2 in gastric cancer development and progression[J]. Jian Cheng,Xiao-Ming Fan.  World Journal of Gastroenterology. 2013(42)
[8]健脾解毒方介導(dǎo)p38MAPK/ATF-2信號通路抑制幽門螺桿菌誘導(dǎo)的人胃癌細(xì)胞COX-2表達[J]. 劉寧寧,王炎,吳瓊,周利紅,劉宣,范忠澤,李琦.  中國中西醫(yī)結(jié)合雜志. 2011(07)
[9]Meta-analysis of the relationship between Epstein-Barr virus infection and clinicopathological features of patients with gastric carcinoma[J]. LI ShuYing1,2, DU HaiJun3, WANG Zhan3, ZHOU Ling3, ZHAO XiaoYu1 & ZENG Yi3 1 College of Life Sciences, Hebei University, Baoding 071002, China; 2 Department of Pathogenic Biology, Faculty of Biological Science, North China Coal Medical College, Tangshan 063000, China; 3 National Institute for Viral Disease Control and Prevention, Chinese Center for Disease Control and Prevention (Chinese CDC), State Key Laboratory for Infectious Disease Prevention and Control (SKLID), Beijing 100052, China.  Science China（Life Sciences）. 2010(04)
[10]COX-2 in liver,from regeneration to hepatocarcinogenesis:What we have learned from animal models?[J]. Paloma Martín-Sanz,Rafael Mayoral,Marta Casado,Lisardo Boscá.  World Journal of Gastroenterology. 2010(12)



本文編號：3638533