目的:與愛(ài)潑斯坦-巴爾病毒（Epstein-Barr virus,EBV）相關(guān)的胃癌,即EB病毒相關(guān)胃癌（Epstein-Barr virus-associated gastric cancer,EBVaGC）約占胃癌的近10%,由于胃癌在世界范圍內(nèi)的高發(fā)病率和病死率,EBVaGC發(fā)病的絕對(duì)數(shù)高,每年新發(fā)病例在90000以上,因此對(duì)EBVaGC發(fā)生機(jī)制以及其相關(guān)基因的研究具有重要意義。然而,迄今為止在EBV相關(guān)腫瘤中尚未見(jiàn)EBV潛伏膜蛋白2A（EBV-encoded Latent Membrane Protein 2A,LMP2A）與環(huán)氧合酶2（cyclooxygenase-2,COX-2）之間相關(guān)性的研究報(bào)道。EBV編碼的潛伏膜蛋白1（EBV-encoded Latent Membrane Protein 1,LMP1）在EBVaGC中是否與COX-2相互作用也需要進(jìn)一步研究。方法:（1）采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR（Quantitative Real-time PCR,qRT-PCR）檢測(cè)3種EBV陽(yáng)性胃癌細(xì)胞系（GT38,GT39以及SNU719）和5種EBV陰性胃癌細(xì)胞系（SGC79... 

【文章來(lái)源】：青島大學(xué)山東省

【文章頁(yè)數(shù)】：76 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
引言
材料與方法
    1 所用儀器、試劑和耗材
        1.1 主要使用儀器
        1.2 主要使用試劑和耗材
        1.3 使用的試劑配制
    2 選擇細(xì)胞系
    3 細(xì)胞處理
        3.1 細(xì)胞的復(fù)蘇
        3.2 細(xì)胞的傳代
    4 PTGS2基因啟動(dòng)子部分區(qū)域甲基化檢測(cè)
        4.1 細(xì)胞系DNA的提取
        4.2 亞硫酸氫鹽基因組測(cè)序(BGS)
    5 PTGS2 基因m RNA檢測(cè)
        5.1 細(xì)胞系總RNA的提取
        5.2 反轉(zhuǎn)錄為cDNA
        5.3 實(shí)時(shí)熒光定量PCR(Quantitative Real-time PCR,qRT-PCR)
        5.4 qRT-PCR結(jié)果數(shù)據(jù)分析
    6 胃癌細(xì)胞系中相關(guān)蛋白表達(dá)的檢測(cè)
        6.1 蛋白提取
        6.2 Western blotting測(cè)蛋白表達(dá)
    7 microRNA的qRT-PCR檢測(cè)
    8 細(xì)胞免疫熒光檢測(cè)
    9 LMP1和LMP2A過(guò)表達(dá)細(xì)胞模型建立
        9.1 質(zhì)粒的預(yù)備
        9.2 重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染胃癌細(xì)胞系SGC7901
    10 siRNA轉(zhuǎn)染
    11 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
結(jié)果
    1 Real-time PCR檢測(cè)胃癌細(xì)胞系中COX-2 的轉(zhuǎn)錄表達(dá)
    2 Western blotting檢測(cè)胃癌細(xì)胞系中COX-2 蛋白表達(dá)
    3 COX-2編碼基因啟動(dòng)子區(qū)域甲基化狀態(tài)檢測(cè)
    4 COX-2 相關(guān)3種micro RNA的檢測(cè)結(jié)果
    5 COX-2蛋白在胃癌細(xì)胞系中的亞細(xì)胞定位檢測(cè)
    6 外源性EBV潛伏膜蛋白LMP1和LMP2A穩(wěn)定表達(dá)對(duì)COX-2 的影響
        6.1 外源性LMP1和LMP2A穩(wěn)定表達(dá)SGC7901 細(xì)胞的篩選和建立
        6.2 外源性LMP1和LMP2A穩(wěn)定過(guò)表達(dá)對(duì)COX-2 的影響
    7 外源性LMP1或LMP2A瞬時(shí)表達(dá)對(duì)COX-2 的影響
        7.1 建立外源性LMP1和LMP2A瞬時(shí)過(guò)表達(dá)的SGC7901 細(xì)胞
        7.2 外源性LMP1和LMP2A瞬時(shí)表達(dá)對(duì)COX-2 的影響
    8 干擾LMP1和LMP2A的表達(dá)對(duì)COX-2 的影響
    9 Western blotting檢測(cè)TRAF2 在胃癌細(xì)胞系中的表達(dá)
    10 外源性LMP1和LMP2A表達(dá)對(duì)TRAF2 的影響
        10.1 外源性LMP1和LMP2A穩(wěn)定表達(dá)對(duì)TRAF2 的影響
        10.2 外源性LMP1和LMP2A瞬時(shí)表達(dá)對(duì)TRAF2 的影響
    11 干擾LMP1和LMP2A表達(dá)對(duì)TRAF2 的影響
    12 靶向干擾TRAF2對(duì)COX-2 表達(dá)的影響
    13 Western blotting檢測(cè)ERK信號(hào)分子在胃癌細(xì)胞系中的表達(dá)
    14 過(guò)表達(dá)LMP1 后對(duì)p-ERK的影響
    15 阻斷ERK通路對(duì)COX-2 的影響
        15.1 MEK抑制劑PD0325901 阻斷ERK通路
        15.2 小干擾序列阻斷ERK通路
    16 阻斷AKT通路對(duì)COX-2 表達(dá)的影響
        16.1 LY294002 阻斷PI3K/AKT通路
        16.2 干擾Fox O1對(duì)COX-2 的影響
討論
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
綜述
    綜述參考文獻(xiàn)
攻讀學(xué)位期間的學(xué)術(shù)成果
縮略詞表
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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本文編號(hào)：3638533