目的:介入熱療成為治療肝細(xì)胞癌的新方法,但血管細(xì)胞受到的損傷需要評(píng)估。原代內(nèi)皮細(xì)胞相比以往研究的細(xì)胞系可以保留更多的蛋白結(jié)構(gòu)和功能。因此提取原代內(nèi)皮細(xì)胞進(jìn)行體外實(shí)驗(yàn),研究不同溫度下的形態(tài)和活性變化及死亡模式,認(rèn)識(shí)內(nèi)皮細(xì)胞對(duì)熱療的耐受性規(guī)律,并以此為依據(jù)對(duì)介入熱化療的臨床策略提出建議。去細(xì)胞技術(shù)可以保留組織內(nèi)部完整的血管結(jié)構(gòu),可以用于建立體外熱療模型用以后續(xù)評(píng)估熱療對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞的影響。方法:用組織貼壁法分離培養(yǎng)內(nèi)皮細(xì)胞,在41℃、43℃、45℃三個(gè)溫度梯度下水浴研究原代內(nèi)皮細(xì)胞的形態(tài)變化,并用熒光探針檢測(cè)線粒體和細(xì)胞核的變化。用MTT法定量地檢測(cè)不同溫度和加熱時(shí)間的內(nèi)皮細(xì)胞活性,用流式細(xì)胞術(shù)定量檢測(cè)細(xì)胞存活率和凋亡水平。用去細(xì)胞肝臟作為生物支架建立體外熱療模型。結(jié)果:41℃加熱30min的溫?zé)岽碳は略鷥?nèi)皮細(xì)胞不發(fā)生明顯形態(tài)變化,43℃時(shí)會(huì)引起原代內(nèi)皮細(xì)胞的發(fā)生體積皺縮、形態(tài)變圓、細(xì)胞間連接消失、線粒體致密聚集的現(xiàn)象。檢測(cè)活性發(fā)現(xiàn)形態(tài)變化與細(xì)胞活性的下降對(duì)應(yīng),死細(xì)胞的絕對(duì)比例增多。延長熱療時(shí)間至1h細(xì)胞活性進(jìn)一步下降,并且45℃加熱后原代內(nèi)皮細(xì)胞的活性再24h內(nèi)持續(xù)下降,失去增殖能力。在熱... 

【文章來源】：哈爾濱工業(yè)大學(xué)黑龍江省211工程院校985工程院校

【文章頁數(shù)】：75 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
名詞術(shù)語表
第1章 緒論
    1.1 課題背景及研究的目的和意義
    1.2 腫瘤熱療的國內(nèi)外發(fā)展概況
        1.2.1 發(fā)展歷史
        1.2.2 熱療的原理
        1.2.3 熱療的方法
        1.2.4 介入熱化療的研究
    1.3 血管內(nèi)皮細(xì)胞的功能
    1.4 細(xì)胞系與原代細(xì)胞
        1.4.1 細(xì)胞系
        1.4.2 原代細(xì)胞
    1.5 熱刺激對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞的殺傷
        1.5.1 細(xì)胞壞死
        1.5.2 細(xì)胞凋亡
        1.5.3 熱療相關(guān)基因
    1.6 去細(xì)胞技術(shù)
        1.6.1 去細(xì)胞生物支架及其應(yīng)用
        1.6.2 去細(xì)胞的原理和影響因素
        1.6.3 去細(xì)胞肝臟的研究
    1.7 本文的主要研究?jī)?nèi)容
第2章 原代內(nèi)皮細(xì)胞熱刺激下的形態(tài)研究
    2.1 引言
    2.2 實(shí)驗(yàn)材料及儀器
        2.2.1 實(shí)驗(yàn)試劑及其配制
        2.2.2 實(shí)驗(yàn)儀器
    2.3 實(shí)驗(yàn)步驟與方法
        2.3.1 原代內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)
        2.3.3 水浴加熱
        2.3.4 熒光探針檢測(cè)
    2.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        2.4.1 大鼠原代內(nèi)皮細(xì)胞的分離培養(yǎng)
        2.4.2 原代內(nèi)皮細(xì)胞的熱處理
        2.4.3 熒光探針檢測(cè)
    2.5 討論
    2.6 本章小結(jié)
第3章 原代細(xì)胞加熱后的活性與凋亡研究
    3.1 引言
    3.2 實(shí)驗(yàn)材料及儀器
        3.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)和水浴加熱
        3.2.2 活性及凋亡檢測(cè)試劑
        3.2.3 酶標(biāo)儀
        3.2.4 流式細(xì)胞儀
    3.3 實(shí)驗(yàn)步驟與方法
        3.3.1 原代內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)
        3.3.2 水浴加熱
        3.3.3 細(xì)胞活性實(shí)驗(yàn)
        3.3.4 凋亡分析
    3.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.4.1 不同溫度下原代內(nèi)皮細(xì)胞的活性
        3.4.2 加熱時(shí)間與恢復(fù)時(shí)間對(duì)活性的影響
        3.4.3 不同熱刺激下內(nèi)皮細(xì)胞的死亡類型
    3.5 討論
    3.6 本章小結(jié)
第4章 熱療的去細(xì)胞肝臟模型的建立
    4.1 引言
    4.2 實(shí)驗(yàn)材料及儀器
    4.3 實(shí)驗(yàn)步驟和方法
        4.3.1 獲取肝臟
        4.3.2 去細(xì)胞肝臟的制備
        4.3.3 去細(xì)胞肝臟重新內(nèi)皮化
        4.3.4 石蠟切片的制備
        4.3.5 切片染色
    4.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        4.4.1 去細(xì)胞肝臟支架
        4.4.2 內(nèi)皮化模型
    4.5 討論
    4.6 本章小結(jié)
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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博士論文
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本文編號(hào)：3637661