研究背景腎細(xì)胞癌是泌尿系統(tǒng)常見的惡性腫瘤之一,每年在全球范圍內(nèi)約造成10萬人死亡,分別占男女惡性腫瘤的5%和3%。腎細(xì)胞癌是起源于腎實(shí)質(zhì)泌尿小管上皮細(xì)胞的一種惡性腫瘤,可分為多種細(xì)胞亞型,其中腎透明細(xì)胞癌是最為常見的病理類型。尚無針對(duì)腎癌的簡(jiǎn)便、經(jīng)濟(jì)的篩查手段;目前腎癌的術(shù)前診斷主要依靠影像學(xué)檢查,但影像學(xué)檢查有時(shí)難以確定腎臟腫瘤的良惡性;確診主要依靠術(shù)后組織病理學(xué)檢查。腎癌的治療仍以腎根治性切除術(shù)、腎部分切除術(shù)等微創(chuàng)手術(shù)為主;術(shù)后缺乏經(jīng)濟(jì)有效的輔助治療手段。雖然細(xì)胞因子治療已應(yīng)用于臨床數(shù)年,但因其副作用大、有效率低,有時(shí)難以取得滿意的療效。大約有40%的腎癌患者術(shù)后出現(xiàn)腫瘤的復(fù)發(fā)及轉(zhuǎn)移,且轉(zhuǎn)移性腎癌患者的預(yù)后很差,五年生存率只有10%左右。雖然目前已有針對(duì)轉(zhuǎn)移性腎癌的靶向治療藥物,能將患者的總生存時(shí)間提高數(shù)月;但其費(fèi)用高昂,長(zhǎng)時(shí)間應(yīng)用還存在耐受性差、耐藥性強(qiáng)的問題。因此迫切需要研究新的分子生物靶點(diǎn)來指導(dǎo)早期診斷和后續(xù)治療。長(zhǎng)鏈非編碼RNA（lncRNA）是長(zhǎng)度超過200個(gè)核苷酸且不能編碼蛋白質(zhì)的一類RNA。既往被認(rèn)為是轉(zhuǎn)錄噪音。近年來隨著二代測(cè)序技術(shù)的普及和相關(guān)研究技術(shù)的成熟應(yīng)用,l... 

【文章來源】：鄭州大學(xué)河南省211工程院校

【文章頁數(shù)】：68 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖３．２?Ｉｉｎｃ００６４５在腎透明細(xì)胞癌組織中的相對(duì)表達(dá)??

????３．３?Ｌｉｎｃ００６４５抑制腎透明細(xì)胞癌細(xì)胞增殖??為了驗(yàn)證ｌｉｎｃ００６４５在體外條件下對(duì)細(xì)胞增殖的影響，我們進(jìn)行了?ＣＣＫ－８實(shí)??驗(yàn)，驗(yàn)證其對(duì)腎癌細(xì)胞系７８６－０和ＡＣＨＮ兩種細(xì)胞增殖的影響。構(gòu)建ｌｉｎｃ００６４５??過表達(dá)質(zhì)粒并通過脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法轉(zhuǎn)染至細(xì)胞內(nèi)，培養(yǎng)４８小時(shí)后提取總ＲＮＡ，使??用去基因組ＤＮＡ試劑后進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄實(shí)時(shí)熒光定量ＰＣＲ檢測(cè)，可見構(gòu)建的過表??達(dá)質(zhì)粒組細(xì)胞中ｌｉｎｃ００６４５的表達(dá)量遠(yuǎn)高于空載質(zhì)粒組（圖３．４?Ａ、圖３．４?Ｂ，ｐ??＜０．０５）。于轉(zhuǎn)染兩天后進(jìn)行ＣＣＫ－８實(shí)驗(yàn)。在％小時(shí)的連續(xù)細(xì)胞培養(yǎng)過程中，??分別在０小時(shí)、２４小時(shí)、４８小時(shí)、７２小時(shí)、９６小時(shí)將ＣＣＫ－８試劑加入到９６孔??板中相應(yīng)細(xì)胞分組內(nèi)，并測(cè)定吸光度（ＯＤ值）。兩個(gè)細(xì)胞系的ＣＣＫ－８實(shí)驗(yàn)表明，??相比于空載質(zhì)粒組，轉(zhuǎn)染有ｌｉｎｃ００６４５過表達(dá)質(zhì)粒的細(xì)胞其增殖受到了明顯抑制??（圖?３．４Ｃ、圖?３．４Ｄ，ｐ＜０．０５）??Ａ?Ｂ??７８６－０細(xì)胞過表達(dá)效率?ＡＣＨＮ細(xì)胞過表達(dá)效率??１５〇１?＊＊?５００１??＊＾１１?，??￣￣?＾１?丁??一＂￣?４００－??１００－??域?Ｂ３００＇??Ｓ?ｇ２〇ｏ－??５０??１００－??Ｊ?Ｊ??空載質(zhì)粒組?ｌｉｎｃ００６４５過表達(dá)組?空載質(zhì)粒組?１?ｉｎｃ００６４５過表達(dá)組??Ｃ?７８６－０?ｃｃｋ－８實(shí)驗(yàn)?Ｄ?ＡＣＨＮｃｃｋ－８實(shí)驗(yàn)??２?５ｉ?２?０－１??．空釵丨貞粒組?？?＋空找質(zhì)粒紺??〇?ｎ?＋?ｌｉｒｕ．００６１５過衣達(dá)約１?＋?Ｉｉｎｃ００６１５過衣達(dá)約１??１

????３．４?Ｌｉｎｃ００６４５促進(jìn)腎透明細(xì)胞癌細(xì)胞凋亡??隨后我們通過Ａｎｎｅｘｉｎ?Ｖ－Ｐ丨雙染色法，用流式細(xì)胞儀進(jìn)行細(xì)胞凋亡檢測(cè)。使??用７８６－０、ＡＣＨＮ兩種細(xì)胞系分別進(jìn)行４８小時(shí)的過表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染，收集細(xì)胞培??養(yǎng)上清液及貼壁細(xì)胞進(jìn)行流式細(xì)胞術(shù)。分折兩組細(xì)胞早期凋亡（Ｑ３象限）及晚??期凋亡（Ｑ２象限）比例之和的差異（圖３．５?Ａ、圖３．５?Ｃ）�？梢姡罚福叮凹�(xì)胞空載??質(zhì)粒組的總凋亡細(xì)胞比例為１５．４１?±０．３２７?（％），而過ｌｉｎｃ００６４５表達(dá)組細(xì)胞的總??凋亡比例為２６．５丨土?１．０丨５?（％），可見在ｌｉｎｃ００６４５過表達(dá)之后，細(xì)胞凋亡比例明??顯增加（圖３．５Ｂ，?／；＜０．０５）。在ＡＣＨＮ細(xì)胞中的相同實(shí)驗(yàn)也得到了類似的結(jié)果??（圖３?Ｄ，?ｐ＜０．０５），空載質(zhì)粒組的總凋亡細(xì)胞比例為９．５７±０．２８３（％），Ｉｉｎｃ００６４５??表達(dá)組總凋亡細(xì)胞比例為１４．１?±０．３６７?（％）。可見在ｌｉｎｃ００６４５過表達(dá)，兩種細(xì)胞??的凋亡比例明顯增加。??Ａ?７８６?０凋廣丈驗(yàn)?ｇ??，〇，１＾?１．二?Ａ?，°７?７８６?０凋亡實(shí)驗(yàn)???■—Ｉ??―備?▲??？ｖ?０ｒ?＾?＾?Ｕ??ｍ?１０－??，〇？?－０３?－?０４?０３?Ｔ，??〇?Ｊ?６?０８??＿＂？，」?扣。仁…，．”Ｕ?羝??１０?，〇?Ｆ＾ＣＨ?＊°〇?，〇：?＾?０?空較Ｕｎｃ００６４５過農(nóng)達(dá)?ｆｆｌ??ｒｕ－Ｈ?ＦｆＴＣ－Ｈ?＞Ｕ?Ｈ?ＦＩＴＣ－Ｈ??９伐?Ｗｉ?料?ｍ?Ｌｉｎｃ００６４５?過農(nóng)達(dá)?Ｗｉｆｉ?ｍ??ｃ?ＡＣＨＮ糾廣丈吣?Ｄ??《

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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