研究背景腎細胞癌是泌尿系統(tǒng)常見的惡性腫瘤之一,每年在全球范圍內(nèi)約造成10萬人死亡,分別占男女惡性腫瘤的5%和3%。腎細胞癌是起源于腎實質(zhì)泌尿小管上皮細胞的一種惡性腫瘤,可分為多種細胞亞型,其中腎透明細胞癌是最為常見的病理類型。尚無針對腎癌的簡便、經(jīng)濟的篩查手段;目前腎癌的術(shù)前診斷主要依靠影像學檢查,但影像學檢查有時難以確定腎臟腫瘤的良惡性;確診主要依靠術(shù)后組織病理學檢查。腎癌的治療仍以腎根治性切除術(shù)、腎部分切除術(shù)等微創(chuàng)手術(shù)為主;術(shù)后缺乏經(jīng)濟有效的輔助治療手段。雖然細胞因子治療已應(yīng)用于臨床數(shù)年,但因其副作用大、有效率低,有時難以取得滿意的療效。大約有40%的腎癌患者術(shù)后出現(xiàn)腫瘤的復發(fā)及轉(zhuǎn)移,且轉(zhuǎn)移性腎癌患者的預后很差,五年生存率只有10%左右。雖然目前已有針對轉(zhuǎn)移性腎癌的靶向治療藥物,能將患者的總生存時間提高數(shù)月;但其費用高昂,長時間應(yīng)用還存在耐受性差、耐藥性強的問題。因此迫切需要研究新的分子生物靶點來指導早期診斷和后續(xù)治療。長鏈非編碼RNA（lncRNA）是長度超過200個核苷酸且不能編碼蛋白質(zhì)的一類RNA。既往被認為是轉(zhuǎn)錄噪音。近年來隨著二代測序技術(shù)的普及和相關(guān)研究技術(shù)的成熟應(yīng)用,l... 

【文章來源】：鄭州大學河南省211工程院校

【文章頁數(shù)】：68 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖３．２?Ｉｉｎｃ００６４５在腎透明細胞癌組織中的相對表達??

????３．３?Ｌｉｎｃ００６４５抑制腎透明細胞癌細胞增殖??為了驗證ｌｉｎｃ００６４５在體外條件下對細胞增殖的影響，我們進行了?ＣＣＫ－８實??驗，驗證其對腎癌細胞系７８６－０和ＡＣＨＮ兩種細胞增殖的影響。構(gòu)建ｌｉｎｃ００６４５??過表達質(zhì)粒并通過脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法轉(zhuǎn)染至細胞內(nèi)，培養(yǎng)４８小時后提取總ＲＮＡ，使??用去基因組ＤＮＡ試劑后進行反轉(zhuǎn)錄實時熒光定量ＰＣＲ檢測，可見構(gòu)建的過表??達質(zhì)粒組細胞中ｌｉｎｃ００６４５的表達量遠高于空載質(zhì)粒組（圖３．４?Ａ、圖３．４?Ｂ，ｐ??＜０．０５）。于轉(zhuǎn)染兩天后進行ＣＣＫ－８實驗。在％小時的連續(xù)細胞培養(yǎng)過程中，??分別在０小時、２４小時、４８小時、７２小時、９６小時將ＣＣＫ－８試劑加入到９６孔??板中相應(yīng)細胞分組內(nèi)，并測定吸光度（ＯＤ值）。兩個細胞系的ＣＣＫ－８實驗表明，??相比于空載質(zhì)粒組，轉(zhuǎn)染有ｌｉｎｃ００６４５過表達質(zhì)粒的細胞其增殖受到了明顯抑制??（圖?３．４Ｃ、圖?３．４Ｄ，ｐ＜０．０５）??Ａ?Ｂ??７８６－０細胞過表達效率?ＡＣＨＮ細胞過表達效率??１５〇１?＊＊?５００１??＊＾１１?，??￣￣?＾１?丁??一＂￣?４００－??１００－??域?Ｂ３００＇??Ｓ?ｇ２〇ｏ－??５０??１００－??Ｊ?Ｊ??空載質(zhì)粒組?ｌｉｎｃ００６４５過表達組?空載質(zhì)粒組?１?ｉｎｃ００６４５過表達組??Ｃ?７８６－０?ｃｃｋ－８實驗?Ｄ?ＡＣＨＮｃｃｋ－８實驗??２?５ｉ?２?０－１??．空釵丨貞粒組?？?＋空找質(zhì)粒紺??〇?ｎ?＋?ｌｉｒｕ．００６１５過衣達約１?＋?Ｉｉｎｃ００６１５過衣達約１??１

????３．４?Ｌｉｎｃ００６４５促進腎透明細胞癌細胞凋亡??隨后我們通過Ａｎｎｅｘｉｎ?Ｖ－Ｐ丨雙染色法，用流式細胞儀進行細胞凋亡檢測。使??用７８６－０、ＡＣＨＮ兩種細胞系分別進行４８小時的過表達質(zhì)粒轉(zhuǎn)染，收集細胞培??養(yǎng)上清液及貼壁細胞進行流式細胞術(shù)。分折兩組細胞早期凋亡（Ｑ３象限）及晚??期凋亡（Ｑ２象限）比例之和的差異（圖３．５?Ａ、圖３．５?Ｃ）。可見７８６－０細胞空載??質(zhì)粒組的總凋亡細胞比例為１５．４１?±０．３２７?（％），而過ｌｉｎｃ００６４５表達組細胞的總??凋亡比例為２６．５丨土?１．０丨５?（％），可見在ｌｉｎｃ００６４５過表達之后，細胞凋亡比例明??顯增加（圖３．５Ｂ，?／；＜０．０５）。在ＡＣＨＮ細胞中的相同實驗也得到了類似的結(jié)果??（圖３?Ｄ，?ｐ＜０．０５），空載質(zhì)粒組的總凋亡細胞比例為９．５７±０．２８３（％），Ｉｉｎｃ００６４５??表達組總凋亡細胞比例為１４．１?±０．３６７?（％）�？梢娫冢欤椋睿悖埃埃叮矗颠^表達，兩種細胞??的凋亡比例明顯增加。??Ａ?７８６?０凋廣丈驗?ｇ??，〇，１＾?１．二?Ａ?，°７?７８６?０凋亡實驗???■—Ｉ??―備?▲??？ｖ?０ｒ?＾?＾?Ｕ??ｍ?１０－??，〇？?－０３?－?０４?０３?Ｔ，??〇?Ｊ?６?０８??＿＂？，」?扣。仁…，．”Ｕ?羝??１０?，〇?Ｆ＾ＣＨ?＊°〇?，〇：?＾?０?空較Ｕｎｃ００６４５過農(nóng)達?ｆｆｌ??ｒｕ－Ｈ?ＦｆＴＣ－Ｈ?＞Ｕ?Ｈ?ＦＩＴＣ－Ｈ??９伐?Ｗｉ?料?ｍ?Ｌｉｎｃ００６４５?過農(nóng)達?Ｗｉｆｉ?ｍ??ｃ?ＡＣＨＮ糾廣丈吣?Ｄ??《

【參考文獻】：
期刊論文
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