目的:探討miR-26b在肺癌組織中的表達(dá)及miR-26b在肺癌細(xì)胞侵襲和遷移過(guò)程中的作用及其機(jī)制。方法:q PCR檢測(cè)肺癌和正常肺組織中miR-26b的表達(dá)情況;熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)miR-26b與人平衡核苷轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白1（human equilibrative nucleoside transporter 1,hENT1）的相互作用;Transwell侵襲試驗(yàn)檢測(cè)miR-26b的表達(dá)對(duì)肺癌細(xì)胞侵襲能力的影響;劃痕試驗(yàn)檢測(cè)miR-26b的表達(dá)對(duì)肺癌細(xì)胞遷移能力的影響;Western印跡檢測(cè)h ENT1,ROCK-1,Rho A蛋白的表達(dá)情況;鬼筆環(huán)肽染色觀察miR-26b-mimic處理后細(xì)胞骨架的變化情況;裸鼠皮下成瘤試驗(yàn)檢測(cè)miR-26b-mimic對(duì)肺癌成瘤大小及體積的影響。結(jié)果:與正常肺組織相比,肺癌組織中miR-26b表達(dá)明顯降低;且晚期、低分化和有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的肺癌組織miR-26b表達(dá)明顯較早期、高分化和無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的肺癌組織低;miR-26b能與h ENT1的3’-UTR特異性結(jié)合;miR-26b可以調(diào)控肺癌A549細(xì)胞的侵襲遷移能力;過(guò)表達(dá)miR-26b可以抑制h ENT... 

【文章來(lái)源】：中南大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版). 2017,42(07)北大核心CSCD

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Transwell侵襲試驗(yàn)檢測(cè)miR-26b對(duì)人肺癌細(xì)胞A549侵襲能力的影響(×400)

MiR-26b靶向hENT1通過(guò)RhoA/ROCK-1通路調(diào)控肺癌細(xì)胞的侵襲和遷移高陽(yáng)，等7592.6MiR-26b調(diào)節(jié)hENT1，ROCK-1和RhoA的表達(dá)Western印跡結(jié)果顯示：與NC組相比，miR-26b-mimic組中hENT1，RhoA和ROCK-1表達(dá)水平明顯下降[hENT1為(22.6±1.9)%vs(82.3±5.9)%；ROCK-1為(32.6±3.2)%vs(92.1±6.2)%；RhoA為(27.2±3.2)%vs(84.2±8.3)%，P<0.05；圖4]。2.7MiR-26b調(diào)節(jié)肺癌細(xì)胞A549細(xì)胞骨架細(xì)胞骨架鬼筆環(huán)肽染色表明：與NC組相比，miR-26b-mimic組A549細(xì)胞F-actin染色明顯減少，細(xì)胞膜皺褶形成明顯減少，偽足形成明顯減少(圖5)。2.8裸鼠皮下成瘤試驗(yàn)檢測(cè)miR-26b-mimic對(duì)腫瘤生長(zhǎng)的影響荷瘤小鼠生存時(shí)間為4~8周，中位生存時(shí)間為6周。尸體解剖見(jiàn)左腋下腫瘤均有生長(zhǎng)，腫瘤呈灰白色，實(shí)性，圓形或橢圓形，表面有結(jié)節(jié)狀突起，剖面呈魚(yú)肉樣，成瘤率100%。裸鼠腫瘤生長(zhǎng)情況：MiR-26b-mimic組的腫瘤明顯小于NC組；miR-26b-mimic組裸鼠腫瘤體積和質(zhì)量均明顯小于NC組(圖6)。圖2Transwell侵襲試驗(yàn)檢測(cè)miR-26b對(duì)人肺癌細(xì)胞A549侵襲能力的影響(×400)Figure2EffectofmiR-26bontheinvasionabilityofA549cellsdetectedbyTranswellmatrigelinvasionassays(×400)NCmiR-26b-mimicmiR-26b-mimicNC0h24h48h72h圖3劃痕試驗(yàn)檢測(cè)miR-26b-mimic對(duì)人肺癌細(xì)胞A549遷移能力的影響(×400)Figure3EffectofmiR-26b-mimicontheA549cellsmigrationabilitydetectedbywoundhealingassays(×400)圖4Western印跡檢測(cè)miR-26b-mimic處理后hENT1，ROCK-1和RhoA蛋白的表達(dá)Figure4ExpressionofhENT1,ROCK-1andRhoAdetectedbyWesternblotafterinducedwithmiR-26b-mimichENT1ROCK-1RhoAGAPDHNCmiR-26b-mimic

MiR-26b靶向hENT1通過(guò)RhoA/ROCK-1通路調(diào)控肺癌細(xì)胞的侵襲和遷移高陽(yáng)，等7592.6MiR-26b調(diào)節(jié)hENT1，ROCK-1和RhoA的表達(dá)Western印跡結(jié)果顯示：與NC組相比，miR-26b-mimic組中hENT1，RhoA和ROCK-1表達(dá)水平明顯下降[hENT1為(22.6±1.9)%vs(82.3±5.9)%；ROCK-1為(32.6±3.2)%vs(92.1±6.2)%；RhoA為(27.2±3.2)%vs(84.2±8.3)%，P<0.05；圖4]。2.7MiR-26b調(diào)節(jié)肺癌細(xì)胞A549細(xì)胞骨架細(xì)胞骨架鬼筆環(huán)肽染色表明：與NC組相比，miR-26b-mimic組A549細(xì)胞F-actin染色明顯減少，細(xì)胞膜皺褶形成明顯減少，偽足形成明顯減少(圖5)。2.8裸鼠皮下成瘤試驗(yàn)檢測(cè)miR-26b-mimic對(duì)腫瘤生長(zhǎng)的影響荷瘤小鼠生存時(shí)間為4~8周，中位生存時(shí)間為6周。尸體解剖見(jiàn)左腋下腫瘤均有生長(zhǎng)，腫瘤呈灰白色，實(shí)性，圓形或橢圓形，表面有結(jié)節(jié)狀突起，剖面呈魚(yú)肉樣，成瘤率100%。裸鼠腫瘤生長(zhǎng)情況：MiR-26b-mimic組的腫瘤明顯小于NC組；miR-26b-mimic組裸鼠腫瘤體積和質(zhì)量均明顯小于NC組(圖6)。圖2Transwell侵襲試驗(yàn)檢測(cè)miR-26b對(duì)人肺癌細(xì)胞A549侵襲能力的影響(×400)Figure2EffectofmiR-26bontheinvasionabilityofA549cellsdetectedbyTranswellmatrigelinvasionassays(×400)NCmiR-26b-mimicmiR-26b-mimicNC0h24h48h72h圖3劃痕試驗(yàn)檢測(cè)miR-26b-mimic對(duì)人肺癌細(xì)胞A549遷移能力的影響(×400)Figure3EffectofmiR-26b-mimicontheA549cellsmigrationabilitydetectedbywoundhealingassays(×400)圖4Western印跡檢測(cè)miR-26b-mimic處理后hENT1，ROCK-1和RhoA蛋白的表達(dá)Figure4ExpressionofhENT1,ROCK-1andRhoAdetectedbyWesternblotafterinducedwithmiR-26b-mimichENT1ROCK-1RhoAGAPDHNCmiR-26b-mimic


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