目的:探討miR-26b在肺癌組織中的表達及miR-26b在肺癌細胞侵襲和遷移過程中的作用及其機制。方法:q PCR檢測肺癌和正常肺組織中miR-26b的表達情況;熒光素酶報告基因檢測miR-26b與人平衡核苷轉運蛋白1（human equilibrative nucleoside transporter 1,hENT1）的相互作用;Transwell侵襲試驗檢測miR-26b的表達對肺癌細胞侵襲能力的影響;劃痕試驗檢測miR-26b的表達對肺癌細胞遷移能力的影響;Western印跡檢測h ENT1,ROCK-1,Rho A蛋白的表達情況;鬼筆環(huán)肽染色觀察miR-26b-mimic處理后細胞骨架的變化情況;裸鼠皮下成瘤試驗檢測miR-26b-mimic對肺癌成瘤大小及體積的影響。結果:與正常肺組織相比,肺癌組織中miR-26b表達明顯降低;且晚期、低分化和有淋巴結轉移的肺癌組織miR-26b表達明顯較早期、高分化和無淋巴結轉移的肺癌組織低;miR-26b能與h ENT1的3’-UTR特異性結合;miR-26b可以調(diào)控肺癌A549細胞的侵襲遷移能力;過表達miR-26b可以抑制h ENT... 

【文章來源】：中南大學學報(醫(yī)學版). 2017,42(07)北大核心CSCD

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【部分圖文】：

Transwell侵襲試驗檢測miR-26b對人肺癌細胞A549侵襲能力的影響(×400)

MiR-26b靶向hENT1通過RhoA/ROCK-1通路調(diào)控肺癌細胞的侵襲和遷移高陽，等7592.6MiR-26b調(diào)節(jié)hENT1，ROCK-1和RhoA的表達Western印跡結果顯示：與NC組相比，miR-26b-mimic組中hENT1，RhoA和ROCK-1表達水平明顯下降[hENT1為(22.6±1.9)%vs(82.3±5.9)%；ROCK-1為(32.6±3.2)%vs(92.1±6.2)%；RhoA為(27.2±3.2)%vs(84.2±8.3)%，P<0.05；圖4]。2.7MiR-26b調(diào)節(jié)肺癌細胞A549細胞骨架細胞骨架鬼筆環(huán)肽染色表明：與NC組相比，miR-26b-mimic組A549細胞F-actin染色明顯減少，細胞膜皺褶形成明顯減少，偽足形成明顯減少(圖5)。2.8裸鼠皮下成瘤試驗檢測miR-26b-mimic對腫瘤生長的影響荷瘤小鼠生存時間為4~8周，中位生存時間為6周。尸體解剖見左腋下腫瘤均有生長，腫瘤呈灰白色，實性，圓形或橢圓形，表面有結節(jié)狀突起，剖面呈魚肉樣，成瘤率100%。裸鼠腫瘤生長情況：MiR-26b-mimic組的腫瘤明顯小于NC組；miR-26b-mimic組裸鼠腫瘤體積和質量均明顯小于NC組(圖6)。圖2Transwell侵襲試驗檢測miR-26b對人肺癌細胞A549侵襲能力的影響(×400)Figure2EffectofmiR-26bontheinvasionabilityofA549cellsdetectedbyTranswellmatrigelinvasionassays(×400)NCmiR-26b-mimicmiR-26b-mimicNC0h24h48h72h圖3劃痕試驗檢測miR-26b-mimic對人肺癌細胞A549遷移能力的影響(×400)Figure3EffectofmiR-26b-mimicontheA549cellsmigrationabilitydetectedbywoundhealingassays(×400)圖4Western印跡檢測miR-26b-mimic處理后hENT1，ROCK-1和RhoA蛋白的表達Figure4ExpressionofhENT1,ROCK-1andRhoAdetectedbyWesternblotafterinducedwithmiR-26b-mimichENT1ROCK-1RhoAGAPDHNCmiR-26b-mimic

MiR-26b靶向hENT1通過RhoA/ROCK-1通路調(diào)控肺癌細胞的侵襲和遷移高陽，等7592.6MiR-26b調(diào)節(jié)hENT1，ROCK-1和RhoA的表達Western印跡結果顯示：與NC組相比，miR-26b-mimic組中hENT1，RhoA和ROCK-1表達水平明顯下降[hENT1為(22.6±1.9)%vs(82.3±5.9)%；ROCK-1為(32.6±3.2)%vs(92.1±6.2)%；RhoA為(27.2±3.2)%vs(84.2±8.3)%，P<0.05；圖4]。2.7MiR-26b調(diào)節(jié)肺癌細胞A549細胞骨架細胞骨架鬼筆環(huán)肽染色表明：與NC組相比，miR-26b-mimic組A549細胞F-actin染色明顯減少，細胞膜皺褶形成明顯減少，偽足形成明顯減少(圖5)。2.8裸鼠皮下成瘤試驗檢測miR-26b-mimic對腫瘤生長的影響荷瘤小鼠生存時間為4~8周，中位生存時間為6周。尸體解剖見左腋下腫瘤均有生長，腫瘤呈灰白色，實性，圓形或橢圓形，表面有結節(jié)狀突起，剖面呈魚肉樣，成瘤率100%。裸鼠腫瘤生長情況：MiR-26b-mimic組的腫瘤明顯小于NC組；miR-26b-mimic組裸鼠腫瘤體積和質量均明顯小于NC組(圖6)。圖2Transwell侵襲試驗檢測miR-26b對人肺癌細胞A549侵襲能力的影響(×400)Figure2EffectofmiR-26bontheinvasionabilityofA549cellsdetectedbyTranswellmatrigelinvasionassays(×400)NCmiR-26b-mimicmiR-26b-mimicNC0h24h48h72h圖3劃痕試驗檢測miR-26b-mimic對人肺癌細胞A549遷移能力的影響(×400)Figure3EffectofmiR-26b-mimicontheA549cellsmigrationabilitydetectedbywoundhealingassays(×400)圖4Western印跡檢測miR-26b-mimic處理后hENT1，ROCK-1和RhoA蛋白的表達Figure4ExpressionofhENT1,ROCK-1andRhoAdetectedbyWesternblotafterinducedwithmiR-26b-mimichENT1ROCK-1RhoAGAPDHNCmiR-26b-mimic


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