目的非小細(xì)胞肺癌（NSCLC）是最常見的肺癌組織學(xué)亞型,占肺癌的80%左右。補(bǔ)體C5a的受體（C5a R）在腫瘤中的表達(dá)常與病情的嚴(yán)重程度和患者的預(yù)后相關(guān),其在非小細(xì)胞肺癌組織中的表達(dá)較癌旁組織高。金黃色葡萄球菌分泌的PV-殺白細(xì)胞素（Panton-Valentine leukocidin,PVL）由Luk F-PV和LukS-PV雙組分組成,其中LukS-PV能靶向結(jié)合C5a R,抑制白血病細(xì)胞增殖與侵襲,誘導(dǎo)凋亡及分化。我們推測在C5a R表達(dá)增高的非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞中LukS-PV可能發(fā)揮相似的生物學(xué)作用。本課題從細(xì)胞的增殖,遷移,凋亡和周期多方面進(jìn)行研究,探討LukS-PV對(duì)非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞A549、H460的作用及機(jī)制。方法（1）體外培養(yǎng)正常肺上皮細(xì)胞16-HBE及非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞A549、H460,用不同濃度LukS-PV（0、0.25、0.5、0.75、1μM）刺激不同時(shí)間（0、12、24、36、48H）。（1）CCK-8試驗(yàn)檢測LukS-PV對(duì)各組細(xì)胞活力的影響。（2）Ed U試驗(yàn)檢測LukS-PV對(duì)A549、H460細(xì)胞增殖的影響。（2）利用Transwell試驗(yàn)檢測L... 

【文章來源】：安徽醫(yī)科大學(xué)安徽省

【文章頁數(shù)】：52 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

LukS-PV抑制NSCLC細(xì)胞遷移AA549和H460細(xì)胞分別用不同濃度的LukS-PV處理24h，WB檢測遷移相關(guān)蛋白MMP-2表達(dá)

安徽醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文-30-圖3LukS-PV誘導(dǎo)NSCLC細(xì)胞的凋亡A,BA549和H460細(xì)胞分別用不同濃度的LukS-PV處理24h，然后用AnnexinV-FITC/PI染色，流式細(xì)胞術(shù)檢測和分析細(xì)胞凋亡率。CWesternblot檢測凋亡相關(guān)蛋白Bax、BCL-2水平。所有實(shí)驗(yàn)均重復(fù)三次。LukS-PV處理組與對(duì)照組相比;*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001Fig3LukS-PVinducesapoptosisinNSCLCcells.A,BA549andH460cellsweretreatedwithdifferentconcentrationsofLukS-PVfor24h,andthenstainedwithAnnexinV-FITC/PIandflowcytometrywasusedtomeasureandanalyzetheratioofapoptosis.Cthelevelsofapoptosis-relatedproteinsBaxandBCL-2weredeterminedbyWesternblot.Allexperimentswereperformedintriplicate.LukS-PV-treatedvs.Control;*P<0.05,**P<0.01,***P<0.0013.4LukS-PV誘導(dǎo)NSCLC細(xì)胞周期阻滯為了研究LukS-PV對(duì)細(xì)胞增殖的抑制是否與細(xì)胞周期阻滯有關(guān)，我們對(duì)細(xì)胞周期進(jìn)行了檢測。我們分別使用不同濃度（0、0.25、0.5、0.75μM）的LukS-PV對(duì)A549和H460細(xì)胞作用24H后，采用流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞的周期。結(jié)果表明，

安徽醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文-31-與對(duì)照組相比，LukS-PV可增加S期A549細(xì)胞數(shù)量，減少G2/M期細(xì)胞數(shù)量；同時(shí),LukS-PV還導(dǎo)致H460細(xì)胞在S期的比例升高，G0/G1期相應(yīng)降低，即LukS-PV使細(xì)胞周期阻滯在S期(4A)。為進(jìn)一步研究具體機(jī)制，我們對(duì)相關(guān)的周期蛋白進(jìn)行了檢測，Westernblotting結(jié)果顯示，經(jīng)LukS-PV處理后，細(xì)胞周期蛋白cyclinD1和CDK2表達(dá)下降，而P21表達(dá)增高，其與real-timePCR結(jié)果一致。此外，cyclin-A2的mRNA表達(dá)水平也降低（4B-C）。圖4LukS-PV誘導(dǎo)NSCLC細(xì)胞周期阻滯A分別用不同濃度的LukS-PV處理A549和H460細(xì)胞24H，采用PI染色和流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞周期分布。B用0.5μM濃度LukS-PV處理細(xì)胞24H，real-timePCR檢測S期相關(guān)基因(P21,cyclinA2和cyclinD1)的表達(dá)。CWesternblot檢測S期相關(guān)蛋白的表達(dá)。所有實(shí)驗(yàn)均重復(fù)三次。LukS-PV處理組與對(duì)照組相比；*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001Fig4LukS-PVinducescellcyclearrestinNSCLCcells.AA549andH460cellsweretreatedwithdifferentconcentrationsofLukS-PVfor24H,andcellcycledistributionwasmeasuredand


本文編號(hào)：3623433